結核菌Xpertrpob基因利福平耐藥快速檢測的臨床價值

譚雪松

【摘 要】 目的：研究結核菌Xpert（rpob）基因檢測在利福平耐藥性的快速檢測過程中的臨床價值。方法： 選取2018年5月～2019年7月在長春市傳染病醫院診斷為肺結核病患者400例作為本次研究對象 采用Xpert MTB/RIF （簡稱Xpert）、抗酸染色法 320液體培養法三種方法對結核菌進行檢測，并對比其檢測靈敏度與檢測時間。結果：Xpert檢出率明顯優于抗酸染色法（P<0.05）。Xpert技術與液體培養法之間無統計學差異。（P >0.05）。Xpert檢測時間最短。用液體培養結合膠體金法菌型鑒定結果為檢驗結核桿菌的金標準，Xpert檢測結核分枝桿菌靈敏度為94.20%，特異性為96.39%，陽性預測值為94.53%。以液體藥敏作為金標準，Xpert檢測與液體藥敏檢測法有較好的一致性。結論：Xpert作為一種新的檢測方法，具有檢測時間短、操作準確性高的特點，對于肺結核的診斷具有重要意義。

【關鍵詞】 結核菌;Xpert;利福平;藥敏檢測

【中圖分類號】R520.4?? 【文獻標志碼】A?? 【文章編號】1005-0019（2020）03-089-01

結核病是由結核桿菌（Tubercle Bacillus，TB）感染引起的一種具有傳染的慢性疾病，以肺結核最為常見，是導致人類死亡的主要疾病之一。我國結核病防治規劃的目標是在2030年使發病率降低80%，而病死率降低90%。為實現此目標，結核病的早期診斷及其耐藥性檢測具有非常重要的應用價值。然而目前我國結核病檢測實驗室設施還不發達，主要確診方法仍停留在涂片和體外培養等傳統方法，檢出率低，且培養周期長，很容易耽誤患者的病情。Xpert MTB/RIF系統是由WHO推薦的近年來在結核病的快速診斷和利福平耐藥性檢測應用較為廣泛，該技術在我國結核病防治機構被初步使用，診斷技術還初級階段[1]。本研究采用Xpert系統對肺結核及疑似患者痰樣本進行結核桿菌及其對利福平耐藥性的檢測，進而評價 Xpert系統在耐多藥結核病快速診斷中的價值。

1 資料和方法

1.1? 一般資料

選取2018年5月～2019年7月長春市傳染病醫院收納的400例肺結核病患者作為本次研究對象。所有患者均符合《肺結核診斷標準》[2]其中男性236例，女性164例，平均年齡（44.4±2.6）歲，所有入組患者均簽署知情同意。

1.2 儀器與試劑

快速培養藥敏系統（美國BD公司）;Xpert MTB/RIF系統（美國Cepheid公司），萋-尼氏抗酸染色試劑盒（上海江萊生物科技有限公司）。

1.3? 抗酸染色 液體培養和藥敏試驗方法

抗酸染色按照文獻[1]進行操作。取1～2ml樣本進行液體培養，對陽性菌株進行涂片確認，鑒定為結核分枝桿菌的進行藥物耐藥檢測。

1.4? Xpert檢測流程

取痰樣本放置處理管中，加入2倍體積的處理液振蕩混勻并放置10min。打開試劑盒，取2ml液化樣本加入試劑盒中，然后將試劑盒放到儀器模塊中，儀器開始進行檢測

1.5? 統計學方法

應用SPSS 20.0統計軟件分析，P<0.05為差異有統意義。以液體培養和藥敏為檢測金標準，統計Xpert的靈敏度和特異性。

2 結果

2.1? 三種方法檢出率及報告時間 400例肺結核痰樣本同時采用Xpert、抗酸染色法、320液體培養法進行檢測。Xpert檢出率36.75% （147/400），抗酸染色檢出率17.75% （71/400），320液體培養檢出率35.75% （143/400）。對比Xpert與抗酸染色法，Xpert檢出率明顯優于抗酸染色法（P<0.05）。Xpert技術與液體培養法之間無統計學差異。（P >0.05）? 抗酸染色的檢出時間為3h，Xpert檢測時間2h，MGIT320平均檢出時間為10.8 （5.0～19.0）d。

2.2? Xpert檢測結核桿菌的診斷效能 400例患者中液體培養陽性143例，培養陰244性例，有13例污染，Xpert檢測陽性147例，陰性250例，有3例結果錯誤。液體培養陽性的菌株可通過膠體金法確認結核分枝桿菌共121例，非結核分枝桿菌7例。用液體培養結合膠體金法菌型鑒定結果為檢驗結核桿菌的金標準，通過Xpert檢測結核分枝桿菌靈敏度為94.20% （130/138），特異性為96.39% （267/ 277），陽性預測值為94.53%（128/121），陰性預測值為97.26%（249/256）。Xpert檢測結核桿菌結果，見表1。

2.3 Xpert MTB/RIF檢測利福平耐藥性

對130例結核菌株進行液體藥敏試驗，對利福平耐藥有7例，敏感的有123例。通過Xpert檢測出利福平耐藥10例，敏感的120例。兩者檢測利福平同時耐藥9例，敏感117例，兩者檢測利福平結果不同的有3例。以液體藥敏作為金標準，Xpert檢測利福平耐藥性的靈敏度90%（9/10），特異性98.37%（121/123），陽性預測值90%（9/10） 陰性預測值97.5% （117/120）。兩種方法一致性較好，Kappa值為0.90≥0.75。兩者檢測利福平結果有所不同。不一致的菌株經ropB基因測序后，均未檢測到基因突變，結果為利福平敏感菌株。

3 討論

結核分支桿菌可引起全身疾病，最常見的為肺結核。而且結核桿菌生長較慢，給檢驗帶來了很大困難。Xpert系統可同時檢測結核分枝桿菌和利福平是否耐藥。本研究顯示Xpert、液體培養、抗酸染 色對結核桿菌的檢出率依次為36.75%、17.75%、35.75%。Xpert在檢測結核方面與以液體培養聯合膠體金菌種鑒定結果靈敏度相似，特異度略高。以液體藥敏作為金標準，Xpert檢測結核桿菌對利福平的耐藥性具有較高靈敏度。

綜上所述，Xpert作為一種新的檢測方法，具有檢測時間短、操作準確性高的特點，對于肺結核的診斷具有重要意義。

參考文獻

[1] 中華醫學會.臨床診療指南：結核病分冊IN].北 京：人民衛生出版社，2015：2-5.

[2] 陸峰，馬俊鋒，王小平，符劍.Xpert MTB/RIF快速檢測結核分枝桿菌技術的應用[J].江蘇預防醫學，2019，30（03）：335-336.