一種彩色包埋紙在常規病理技術中的應用改進

李明顯 趙 杰 何青蓮 鄭廣娟 謝興意 曹 卓 廣東省中醫院病理科，廣東省廣州市 510120

病理活檢小組織是病理科日常工作中的重要標本來源，由于標本體積小且不同標本之間存在數量差異，傳統方法是應用白色包埋紙將組織包裹后進行常規脫水處理，由于包埋紙的折疊層次不易辨識及缺少對組織數量的相關標記，石蠟包埋效率和包埋質量都會受到影響，進而影響病理診斷的準確性。筆者設計了一套彩色包埋紙，采用特殊處理方式應用于胃腸鏡活檢組織的常規病理技術，經反復實驗，證明了病理活檢小組織標本應用該方法能夠提高石蠟包埋效率和包埋質量。

1 材料與方法

1.1 材料 檢測 2019年3—5月我院胃腸鏡室行消化道內窺鏡檢查術中鉗取的60例活檢標本，每例標本組織數量1～4粒，每粒胃組織標本及腸組織標本直徑0.1～0.5cm，所有標本均經規范化取材[1]、獨立脫水及浸蠟程序處理，通過區組隨機化平均分成兩組，即對照組和改進組，每組30例標本，依次編號為1～30。兩組均由同一位技師分別應用傳統方法與改進方法進行石蠟包埋操作。主要設備耗材：包埋紙，包埋盒(威格斯，廣州)，自動脫水機(Thermo，美國)，石蠟包埋機(Thermo，美國)，石蠟切片機(Leica， 德國)，自動染色機(Leica， 德國)。

1.2 方法

1.2.1 傳統方法：將胃腸鏡活檢組織隨機放入白色包埋紙內，包埋紙上不記錄每例活檢組織的數量，該組作為對照組(圖1A)，將活檢組織用包埋紙折疊[1]后放入包埋盒內，點染伊紅后合上蓋子，依次脫水、透明、浸蠟、包埋。石蠟包埋過程：打開包埋盒的蓋子，拆解包埋紙后逐一收集活檢組織并放入包埋模具，按石蠟包埋原則[2-5]進行操作(圖2A)，最后將包埋模具移至冷凍臺，記錄此過程的包埋耗時(即從打開包埋盒至將包埋模具移至冷凍臺所消耗的時間)，然后進行石蠟切片及HE染色，并于顯微鏡下計數每例標本的組織數量。

1.2.2 改進方法：將1～4個活檢組織分別放入對應的藍色、黃色、白色、綠色包埋紙內。標本放置規則：(1)組織數量為1時，應用藍色包埋紙；(2)組織數量為 2 時，應用黃色包埋紙；(3)組織數量為3時，應用白色包埋紙；(4)組織數量為4時， 應用綠色包埋紙(圖1B)。對包埋紙內的活檢組織點染伊紅并合上蓋子，依次脫水、透明、浸蠟、包埋。石蠟包埋過程：打開包埋盒的蓋子，拆解包埋紙后逐一收集活檢組織并放入包埋模具，按石蠟包埋原則進行操作(圖2B)，最后將包埋模具移至冷凍臺，記錄此過程的包埋耗時，然后進行石蠟切片及HE染色，并于顯微鏡下計數每例標本的組織數量。

圖1 對照組和改進組標本放置示意圖A1～A4分別顯示對照組中1～4 個組織標本分別放置在不同包埋紙內 B1～B4分別顯示改進組中1～4個組織標本分別放置在藍色、黃色、白色、綠色包埋紙內

圖2 對照組與改進組在石蠟包埋過程中包埋紙的折疊狀態示意圖A示對照組中白色包埋紙的折疊狀態 B示改進組中彩色包埋紙的折疊狀態

1.3 觀察指標 為了明確在常規病理技術中應用彩色包埋紙的使用規則后是否能快速高效地處理石蠟包埋過程中的小組織標本，筆者記錄兩組包埋耗時，以及石蠟切片并HE染色后顯微鏡鏡檢每例標本的數量與實際數量的符合率。

1.4 統計學方法 應用SPSS22.0統計軟件進行分析，兩組間包埋耗時比較采用t檢驗，兩組間標本數量符合率比較采用χ2檢驗，P<0.05示差異有統計學意義。

2 結果

兩組在石蠟包埋耗時和標本數量符合率方面比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)，改進組在病理小組織標本的石蠟包埋效率和包埋質量方面均優于對照組。見表1。

表1 兩組胃腸鏡組織HE切片制作特點比較

3 討論

病理活檢小組織尤其是胃腸鏡活檢組織是病理科日常工作中的重要標本來源，由于其體積小且標本間存在數量差異，在常規取材及石蠟包埋過程中給操作者帶來一些不便。傳統的技術方法是將白色包埋紙包裹小組織后再進行脫水處理，由于包埋紙浸蠟后其折疊層次不易被辨識(圖2A)，錯誤的拆解方式有可能造成包埋紙被撕裂，甚至組織從撕裂的縫隙遺漏，從而影響包埋效率；再者，石蠟包埋過程中由于缺少記錄組織數量的同步提示，若僅憑借操作者的經驗來判斷仍然可能存在與實際組織數量的差異，因為看似“多粒”的組織實際可能是一個形狀不規則的息肉，而看似“一粒”的組織實際也可能是幾粒相互嵌合在一起的不同組織。從而影響包埋質量，甚至影響病理診斷的準確性。將包埋紙相鄰兩個角均設計為黑色，其余兩個角均設計為紫色，以及將中央區的主體顏色分別設計為藍色、黃色、白色、綠色，使用這種特殊設計的彩色包埋紙時按照實驗中對照組的標本放置規則，就能在石蠟包埋過程中同時提高包埋效率和包埋質量。首先，彩色包埋紙對角錯位折疊[1]后在對角處黑色與紫色相互遮擋形成了鮮明的色彩對比效果(圖2B)，實驗表明彩色包埋紙的這一設計為石蠟包埋過程中快速拆解包埋紙、縮短收集標本耗時提供了視覺上的便利條件；其次，將彩色包埋紙四種不同的中央區主體顏色分別賦予特定的數量對應關系，這種顏色與數量的對應關系是依據紅染的小組織標本在不同彩色包埋紙的背景下形成的色彩對比效果具有強弱不等的現象，這樣的規則設計也能對提高石蠟包埋效率起到一定輔助作用，而且更為重要的是，根據彩色包埋紙的顏色就能準確核實組織的數量。實驗表明彩色包埋紙的這一設計為改進組中標本數量符合率達到100%提供了必要保障。雖然四格小孔徑包埋盒在病理活檢小組織標本中的應用發揮的作用與之相似，而且比彩色包埋紙在提高工作效率上更出色，但是在實際操作中應用四格小孔徑包埋盒時需特別小心，因為在石蠟包埋過程中打開它的蓋子時小組織標本可能因蓋子的震動而彈出包埋盒，由于組織較小，再次被找回的可能性不大，從而造成無法挽回的工作失誤。而彩色包埋紙在石蠟包埋操作過程中由于包埋紙與包埋盒相互粘連的面積較大,很少會發生被彈出的現象，即使包埋紙偶爾被彈出也能夠迅速被找到。綜合考慮，筆者建議在處理病理活檢小組織標本時彩色包埋紙作為首選，配合普通包埋盒即可達到預期目的。

彩色包埋紙同樣適用于纖支鏡及鼻咽鏡等鉗取的小組織在常規病理技術中的應用，能夠同時提高石蠟包埋效率和包埋質量；應用于細針穿刺活檢組織及婦科宮腔鏡術中刮取的碎組織在一定程度上也能提高石蠟包埋操作的工作效率，是一種值得推廣的新型技術方法。