酶聯免疫吸附法與甲苯胺紅不加熱血清試驗法在梅毒檢驗中的應用效果

李愛麗 黃麗芳 劉昊虹

作者單位：512000 廣東 韶關，韶關市第一人民醫院檢驗科

梅毒是臨床上常見的一種性傳播疾病，主要因蒼白螺旋體引起，可通過血液及性進行傳播，也可通過胎盤傳染給胎兒，其危害性僅次于艾滋病，目前已成為社會廣泛關注的公共衛生問題[1]。有研究表明，早發現、早確診、早治療對改善預后有積極意義[2]。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)是臨床診斷梅毒的金標準，但因其費用昂貴，難以作為常規檢查在梅毒篩查中廣泛應用。甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)可有效反映梅毒病程變化，但假陽性率較高，具有一定局限性。酶聯免疫吸附(ELISA)法是臨床檢測梅毒的常用手段，具有敏感性及特異性高的特點，但無法提示病情嚴重程度。盡管ELISA法與TRUST法檢查費用低廉，但何種方式的診斷效能更高目前臨床尚存爭議[3]。本研究選取2017年2月—2019年2月我院收治的320例疑似梅毒患者為研究對象，探討ELISA法與TRUST法在梅毒檢測中的應用價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月—2019年2月我院收治的疑似梅毒患者320例為研究對象，排除心肝腎功能障礙、精神病史、認知障礙及無法配合檢查者。其中，男146例、女174例；年齡27～63歲，平均(45.86±3.42)歲；未婚104例、已婚216例。文化程度：小學及以下57例、初中103例、高中112例、大專及以上48例。本研究經醫院醫學倫理委員會審查通過，所有患者均知情同意，自愿參與本次研究。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 PW-960PLUS洗板機、MB-530酶標儀、微量加樣器，所有儀器均性能完好，經過校準。ELISA試劑盒購自上海科華生物工程股份有限公司，TRUST試劑盒購自上海榮盛生物藥業有限公司，TPPA試驗試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社生產。

1.2.2 檢測方法 囑患者持續空腹＞8 h，抽取外周靜脈血5 mL，靜置后離心分離出血清，分別采用ELISA法與TRUST法檢測梅毒抗體，然后再采用TPPA法進行復查確診。具體操作步驟如下。ELISA法：在預包被板條孔中加入50 μL待測標本，設置空白組、陽性組及陰性組對照，于37 ℃條件下孵育1 h后于陽性、陰性對照孔內分別加入酶標記物50 μL，混合均勻后再于相同條件下孵育0.5 h，洗板后再于各孔內加入底物緩沖液50 μL，混合均勻后再于相同條件下孵育0.5 h，之后在每孔加入終止液50 μL，讀取酶標儀上數值。TRUST法：將50 μL血清置入卡片圈中并均勻涂抹，搖勻抗原液后利用針頭加入1滴，將卡片置于立體脫色搖床震蕩8 min后觀察結果。TPPA法：采用9孔法進行標本處理，將標本稀釋液(B液)加入Μ型反應板，第1孔100 μL，剩余8孔25 μL，將25 μL血清加入第1孔，之后依次稀釋至2～9孔，第3孔加未致敏粒子D液25 μL，第4～9孔加致敏粒子C液25 μL，將量子反應板震蕩30 s后于常溫下靜置2 h后觀察結果。

1.3 觀察指標 分析T P P A檢驗結果，比較ELISA法與TRUST法的陽性檢出率、診斷的敏感性、特異性、準確性、陽性預測值。a表示真陽性；b表示假陽性；c表示假陰性；d表示真陰性；敏感性=a/(a+c)，特異性=d/(b+d)，準確性=(a+d)/(a+b+c+d)，陽性預測值=a/(a+b)[4]。

1.4 統計方法 采用SPSS 19.0軟件對所得數據進行分析處理，計數資料采用百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 E L I S A法與T P P A法結果分析 TPPA檢驗結果顯示，陽性210例，陰性110例，E L I S A法檢出陽性207例、陰性113例，陽性檢出率為98.57%(207/210)；TRUST法檢出陽性185例、陰性135例，陽性檢出率為88.10%(185/210)，ELISA法的陽性檢出率高于TRUST法，差異有統計學意義(χ2=18.52，P＜0.05)。見表1、表2。

表1 ELISA法與TPPA檢測結果分析(例)

表2 TRUST法與TPPA檢測結果分析(例)

2.2 E L I S A法與T R U S T法的診斷效能 ELISA法在梅毒檢驗中的敏感性為96.19%，特異性為95.45%，準確性為95.94%，陽性預測值為97.58%；TRUST法在梅毒檢驗中的敏感性為79.52%，特異性為83.64%，準確性為80.94%，陽性預測值為90.27%；兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

3 討論

近年來，隨著人們思想意識及性觀念的轉變，使得梅毒感染的發生率逐年增長，目前已成為世界廣泛關注的社會問題，及時篩查及檢驗梅毒顯得尤為重要。現階段，臨床應用TPPA對梅毒特異性抗體檢查具有高度敏感性及特異性，但因其成本極高而難以在梅毒篩查中普及，尤其是不利于基層醫院的推廣[5]。ELISA法與TRUST法成本低廉，操作簡單，有效性高，便于推廣。TRUST法主要用于檢測抗心磷脂抗體，在1～2期梅毒中檢出率＞96%，但在3期及潛伏期的檢出率僅為60%～80%，且易受瘧疾、免疫系統疾病的影響，漏診率較高[6]。ELISA法是IgM與IgG的混合抗體，利用基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP47及TP17包被酶標孔板檢測血清中的特異性抗體，是目前篩查及檢測梅毒的有效方法，敏感性及特異性均較高，且不受瘧疾、免疫系統等疾病的影響，但僅可表示曾經感染或現存感染，無法評判梅毒疾病活動情況。因此，必要時還需進行TPPA復檢[7]。

表3 ELISA法與TRUST法的診斷效能比較[例(%)]

本研究結果表明，ELISA法的陽性檢出率高于TRUST法，差異有統計學意義，ELISA法在梅毒檢驗中的敏感性為96.19%，特異性為95.45%，準確性為95.94%，陽性預測值為97.58%，TRUST法在梅毒檢驗中的敏感性為79.52%，特異性為83.64%，準確性為80.94%，陽性預測值為90.27%，兩組比較存在統計學差異。由此可見，ELISA法檢測梅毒特異性抗體的效果優于TRUST法，與TPPA檢驗結果相當，且費用較低。

綜上所述，與TRUST法相比，ELISA法的陽性檢出率及診斷效能更高，與TPPA檢驗結果相當，值得在基層醫院梅毒檢驗中應用推廣。