高錳酸鉀甲苯胺藍染色法對杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經纖維的染色效果觀察

丁桂齡，鄭建明，劉艷芳

腸道不僅是機體消化吸收營養物質、產生相關激素的重要場所，還是機體發揮免疫功能的關鍵部位。這些功能的發揮依賴于很多特定的細胞、細胞特定的活性、細胞與細胞之間的相互作用等。研究發現杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞和神經纖維等形態結構和成分的變化，與上述功能的發揮密切相關。實際工作中單獨顯示上述組織的染色方法較多，然而用一種特殊染色方法同時顯現上述組織卻罕有報道。本科室經反復摸索，探索出高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法可以較好地同時顯示上述組織結構，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取海軍軍醫大學附屬長海醫院病理科送檢的經外科手術切除的胰十二指腸切除標本、乙狀結腸癌標本、橫結腸癌標本、直腸癌標本各10例，所有標本均經10%中性福爾馬林固定后取材，行常規流程制成3 μm厚石蠟切片，充分烤片。

1.2 主要試劑及配制(1)1%高錳酸鉀硫酸：高錳酸鉀1 g，蒸餾水95 mL，3%硫酸液5 mL。(2)2%草酸：草酸2 g，蒸餾水100 mL。(3)0.5%甲苯胺藍：甲苯胺藍0.5 g，蒸餾水100 mL。(4)麗春紅苦味酸染色液：0.5%麗春紅S水溶液10 mL，苦味酸飽和水溶液90 mL。

1.3 染色方法組織切片經脫蠟至水，0.5%高錳酸鉀硫酸滴染10 min，自來水洗。2%草酸滴染1 min，自來水洗。0.5%甲苯胺藍滴染30 min，自來水洗。麗春紅苦味酸染色液滴染3 min。冷風干燥，中性樹膠封固。

2 結果

杯狀細胞呈邊界清晰的亮白色空泡狀(圖1)；肥大細胞呈圓形或橢圓形，細胞核淺藍色(圖1、2)，胞質顆粒紫紅色(圖3)；漿細胞整體呈深藍色，核藍染呈圓形或半月形偏向一側，胞質淡染(圖4)；膠原纖維呈深粉紅色、不規則、彎曲狀分布(圖1～4)；神經纖維呈淡粉紅色，細胞核藍色，規則條索狀、波浪狀排列(圖4)。

3 討論

杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經纖維、膠原纖維等形態結構和成分的改變，與腸道相關功能的發揮密切相關。能同時顯示上述組織結構的染色方法報道較少，本文提出的高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法，能較好地同時顯示上述組織結構。

對于組織中杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經纖維、膠原纖維的顯示，傳統染色方法是在不同的切片中分別顯示或者不能完全同時顯示；本文提出的組合染色法，可以在一張切片上同時顯示以上組織結構?；诩妆桨匪{對部分組織單一著色的原理，為達到較好的染色效果，組合染色流程中需注意以下幾項：(1)染液的配制上選擇了經硫酸酸化的高錳酸鉀液，因為硫酸能加強肥大細胞胞質顆粒的異染性[1]，但要注意染液配制時的合適比例。(2)高錳酸鉀的濃度從常規染色法中的0.5%提高到1%，既可以加強對組織的氧化反應，又使要顯示的組織具有選擇性，還可以改善背景色調。(3)草酸具有較強的還原性，可以對切片進行漂白和分化并優化背景色調；染色過程中，當肉眼觀察到組織切片變白即可終止染色，否則組織容易脫落。(4)甲苯胺藍屬于具有異染性的堿性染料，含有2個發色團和2個助色團，助色團能促使染料電離成鹽類，幫助發色團對組織產生染色力[2]。組織中的酸性物質與甲苯胺藍中陽離子結合而使細胞核呈藍色[3]，故對杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞和神經纖維的細胞核都有相應的著色。杯狀細胞胞核深藍色位于細胞底部、但整體成亮白色空泡狀，可能是由于杯狀細胞分泌物所含的成分與甲苯胺藍并不反應或反應程度很低，以至于杯狀細胞整體淡染甚至不著色。(5)麗春紅苦味酸染色液的應用，可以同時顯示膠原纖維和神經纖維；由于神經纖維有細胞核，經甲苯胺藍作用，就很好地將兩者區分開；此步驟染色后水洗時間不能過長，否則組織將褪色或著色不均。(6)染色結束后的切片需自然晾干或冷風干燥后封片。因為乙醇和二甲苯對甲苯胺藍分別有分化作用和改變其異染反應的特點，如經乙醇脫水和二甲苯透明時間過長，甲苯胺藍對組織的著色將會被乙醇洗脫和被二甲苯逆轉?；谠摻M合染色的原理并不因組織的特異性而產生差異，該方法在其它含有上述成分的組織結構中同樣適用。

綜上所述，高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法，既可以同時顯示組織中含有的杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經纖維和膠原纖維，又更具直觀性，還解決了因分別染色的時空差異而導致判讀困難的難題。