湖南地區9 205例孕婦B族鏈球菌感染狀況分析

唐 笑， 甘 甜， 周梅華， 代 冰， 劉岱璿

（長沙金域醫學檢驗所，湖南 長沙 410006）

B族鏈球菌（group B Streptococcus，GBS）是兼性厭氧的革蘭陽性菌，同時也是條件致病菌，常定植于直腸和陰道[1]。正常人群感染GBS后并不致病，但孕婦感染GBS后可導致圍生期嚴重感染[2]，增加宮內感染、胎膜早破、早產、產后出血、產褥感染、新生兒感染等風險，還可造成新生兒肺炎、血流感染或腦膜炎等，同時給新生兒神經功能造成損傷[3]。GBS被列為圍生期母嬰感染的主要致病菌之一[4-5]。本研究旨在分析湖南地區孕婦GBS感染情況，為臨床進行早期預防和治療提供指導，降低孕婦圍生期GBS感染風險和新生兒感染的發病率。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集2017年9月—2018年8月湖南省14個地級行政區醫療機構9 205例孕婦直腸拭子及陰道分泌物樣本。孕婦年齡16～46歲。

1.2 儀器與試劑

ABI 7500實時熒光PCR儀（美國ABI公司），B族鏈球菌核酸檢測試劑盒[博爾誠（北京）科技有限公司]。

1.3 樣本采集和處理

1.3.1 孕婦生殖道分泌物 先拭去陰道過多的分泌物，采用無菌拭子插入陰道內1/3處，沿陰道壁輕輕旋轉取得分泌物，將采集的拭子置于無菌管中，密封送檢。

1.3.2 孕婦直腸分泌物 將拭子插入肛門，在肛門括約肌以上約2.5 cm處，沿腸壁輕輕旋轉取得樣本，將采集拭子置于無菌管中，密封送檢。樣本一經送檢，盡快檢測。

1.3.3 樣本存放 待測樣本在2～8 ℃保存不超過24 h，-18 ℃以下保存不超過4 d。

1.4 檢測方法

1.4.1 提取DNA 取1 mL含有分泌物的0.9%氯化鈉溶液至1.5 mL離心管中，15 870×g離心10 min，棄上清，沉淀（如不明顯可重復離心），加入1 mL無菌0.9%氯化鈉溶液混勻，15 870×g離心5 min，棄上清。沉淀加入50 μL DNA提取液充分混勻，99～100 ℃加熱處理10 min，15 870×g離心10 min后提取DNA。

1.4.2 擴增 按樣本數量（包含質控）分裝GBS聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）反應液，按每管35 μL分裝至0.2 mL PCR反應管中，每管加入5 μL樣本DNA進行擴增。程序設定為：50 ℃ 2 min；95 ℃ 5 min；95 ℃15 s，60 ℃ 35 s，45個循環。在60 ℃時分別檢測FAM通道和HEX通道。

1.4.3 結果分析 閾值設定在空白對照正常擴增曲線的上方，基線設定選擇3～5個循環。陰性結果判定：如果FAM通道無循環閾值（cycle threshold，Ct）顯示，而HEX通道信號正常（Ct值≤35.00），則該樣本為陰性。陽性結果判定：（1）若樣本的FAM通道Ct值≤38.00且擴增曲線正常則判定樣本為陽性；（2）若樣本的Ct值為＞38.00～≤45.00，則對該樣本進行復查，如復查結果的Ct值仍為＞38.00～≤45.00或≤38.00，則判定為陽性；如果Ct值不顯示且HEX通道信號正常（Ct值≤35.00），則判定為陰性。

1.5 統計學方法

采用 SPSS 20.0軟件進行統計分析。計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 直腸樣本和陰道樣本GBS陽性率比較

9 205例孕婦中有719例GBS陽性，陽性率為7.81%。其中直腸拭子樣本5 267例，陽性516例（9.80%）；陰道分泌物樣本3 938例，陽性203例（5.15%）；直腸和陰道部位同時陽性548例，陽性率為7.61%（548/7 204）。直腸拭子樣本GBS陽性率高于陰道分泌物樣本（P＜0.05）。

2.2 不同年齡孕婦GBS陽性率比較

＞39歲孕婦GBS陽性率最高，＜20歲孕婦GBS陽性率最低。見表1。

表1 不同年齡孕婦GBS陽性率

3 討論

細菌培養是實驗室檢測GBS的金標準。但是培養法需要分離細菌，檢測耗時長，操作復雜，存在一定程度的漏檢可能。本研究采用實時熒光定量PCR方法檢測病原體核酸，能快速、靈敏、準確地篩查出GBS。本研究中直腸拭子樣本陽性率（9.80%）明顯高于陰道分泌物樣本（5.15%）（P＜0.05），與栗艷芳等[6]的報道一致，說明不同部位取材對于GBS的陽性率有影響。分析原因可能是直腸的環境相對于弱酸性的陰道環境更利于GBS生長繁殖所致[7]。

本研究分析了不同年齡組GBS檢查陽性率，發現高齡產婦（≥35歲）的GBS陽性檢出率最高，可能與雌激素水平或者免疫力有關。

據文獻報道，印度、中國、尼日利亞、美國和印度尼西亞是孕婦GBS定植居前5位的國家[8]。但相關研究結果表明，我國GBS檢測陽性率普遍不高，遠低于美國疾病預防控制中心統計數據（10%～30%）。對比近幾年我國部分地區已報道的GBS篩查情況，發現湖南地區孕婦GBS陽性檢出率在國內處于中等水平，低于江西（8.76%）[7]、佛山（10.15%）[9]和秦皇島（9.50%），高于中山（6.70%）、南京（4.16%）、上海（6.30%）、深圳（4.50%）、常州（4.20%）、呼和浩特（4.80%）[10-16]。

孕婦感染GBS危害較為嚴重，會導致多種不良妊娠結局，誘發孕婦和新生兒的各種疾病，甚至死亡。歐美地區已廣泛開展圍生期孕婦GBS感染篩查，但我國重視程度不足，應加大孕婦GBS感染篩查的推廣力度，及時采取相應的預防和治療措施，降低GBS感染發生率，同時建議在條件允許的情況下接種母體GBS疫苗，有效預防妊娠期婦女GBS感染。