青藏高原牦牛腸道寄生蟲診斷與流行現(xiàn)狀

董世雄

（西藏農(nóng)牧學院 動物科學學院，西藏 林芝 860000）

我國地方性品種肉牛，分布廣泛，數(shù)量極多，與人類生活密切相關。特別是牦牛，牦牛是我國青海藏高原的標志之一，生活在海拔3 000多米的高原上[1，2]。目前我國牦牛的種屬居全球首位，且我國青藏高原地區(qū)的牦牛數(shù)量占全球總數(shù)的90%[3]，我國牦牛養(yǎng)殖規(guī)模已達1 300萬頭[4]。即使生活在青藏高原的牦牛對疾病具有高耐受性或抵抗力，但寄生蟲感染是導致牦牛產(chǎn)量下降的主要原因之一，寄生蟲病會對牦牛造成威脅，主要表現(xiàn)為體重嚴重下降，牛奶和肉類產(chǎn)量下降以及生殖能力受損，造成經(jīng)濟損失。牦牛感染多種腸道線蟲、絳蟲、吸蟲以及球蟲、弓形蟲、隱孢子蟲等，常以混合感染為主。關于蠕蟲在國外一些研究表明牦牛有蠕蟲感染的發(fā)生[5－6]，牛奶和肉類產(chǎn)量下降以及生殖能力受損。牦牛感染多種腸道線蟲、絳蟲、吸蟲以及球蟲、弓形蟲、隱孢子蟲等，常以混合感染為主。關于蠕蟲在國外一些研究表明牦牛有蠕蟲感染的發(fā)生[5-6]。關于牦牛原蟲的流行狀況，殷銘陽[7]等對我國牦牛主要寄生蟲病流行現(xiàn)狀進行了概述，并且提出了防控措施。本文就青藏高原牦牛腸道寄生蟲的診斷方法和流行現(xiàn)狀進行概述。

1 腸道寄生蟲診斷

1.1 臨床診斷

腸道寄生蟲臨床上表現(xiàn)為嘔吐、腹瀉、消瘦、水腫、貧血、食欲下降、體溫升高、精神沉郁等多種癥狀，常作為臨床判斷腸道寄生蟲病的參考依據(jù)[8－9]。通過觀察患病家畜的全身臨床癥狀，解剖其組織器官的病理學變化，可做出初步診斷；根據(jù)患病牦牛組織器官的剖檢發(fā)現(xiàn)蟲體或糞便中發(fā)現(xiàn)成蟲，均可確診該動物患有腸道寄生蟲病。

1.2 病原學診斷

由于蟲株的感染強度、毒素等致病因素的不同，家畜感染腸道寄生蟲后有時不會出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，或出現(xiàn)與其他傳染病易混淆的癥狀，所以，采用實驗室診斷技術可以準確診斷腸道寄生蟲病原。利用糞便蟲卵檢測法可以檢測到腸道寄生原蟲的卵囊（孢子化/未孢子化），滋養(yǎng)體、包囊，檢測到腸道線蟲、絳蟲和吸蟲的蟲卵、幼蟲、蟲體節(jié)片（幼節(jié)/成節(jié)/孕節(jié)），常見的糞便蟲卵檢測法有直接涂片法、飽和食鹽水漂浮法、水洗自然沉淀法[10-12]。目前一種較新糞便檢測技術Mini-Flotac檢測法已被成功運用于實驗室腸道寄生蟲病原的診斷[13]。對于一些形態(tài)微小的蟲卵，如腸道原蟲，傳統(tǒng)的形態(tài)學鑒定敏感性較低，利用顯微鏡難以從形態(tài)學上診斷其病原。因此要想準確診斷腸道寄生蟲的病原，鑒別其種屬關系，其他方式的診斷方法也至關重要。

1.3 免疫學診斷

在寄生蟲免疫學診斷中，常用血清學反應來診斷家畜是否感染寄生蟲。利用寄生蟲和宿主之間的抗原抗體進行免疫學的診斷，通過凝集反應（Agglutination reaction）產(chǎn)生相應的反應現(xiàn)象用于寄生蟲診斷，提高了寄生蟲疾病的診斷效率。目前，關于腸道寄生蟲病的診斷，已經(jīng)建立酶聯(lián)免疫吸附試驗ELLSA（雙抗體夾心法和間接法）、瓊脂糖擴散試驗AGID、皮內(nèi)變態(tài)反應（TST）、膠體金快速診斷技術（IHA）、間接免疫熒光（IFA）、間接血凝試驗（IHA）、環(huán)卵沉淀法（COPT）[14-15]。

1.4 分子生物學診斷

隨著分子生物技術在寄生蟲鑒定的不斷發(fā)展，核糖體DNA（ribosomalDNA，rDNA）、線粒體DNA（mitochondriaDNA，mtDNA）等遺傳標記均可作為寄生蟲種屬鑒定、種間和種內(nèi)的遺傳變異、遺傳多樣性分析、系統(tǒng)發(fā)育進化分析等理想標記[16-19]。核糖體DNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribed spacer，ITS）基因序列已在球蟲、蛔蟲、吸蟲等各類寄生蟲的分類上做了大量的研究[20-21]。分子鑒定已在牦牛泰勒蟲、隱孢子蟲等多種寄生蟲病原做了相關報道[22-24]。Mei[25]等對青海省7個地區(qū)1 027份牦牛糞便進行芽囊原蟲（Blastocystisspp.）的小亞基核糖體（Small Subunit ribosome RNA，SSU rRNA）基因擴增，結(jié)果顯示牦牛芽囊原蟲的感染率為27.07%（278/1027），且序列分析表明有三個特異性亞型ST10、ST12和ST14。對牦牛優(yōu)勢寄生蠕蟲的線粒體DNA 基因序列進行測定，對其分子進化、遺傳變異的方面進行研究。Ohiolei[26]等利用NADH脫氫酶亞基1和5（nad1和nad5）線粒體基因?qū)ξ鞑氐貐^(qū)牦牛和綿羊細粒棘球絳蟲（Echinococcus granulosus）感染進行了鑒定，結(jié)果顯示從54頭綿羊和31頭牦牛中采集的85份樣品中，83份鑒定為細粒棘球絳蟲（E.granulosus），其中G1基因型占77頭，G3基因型占6頭；剩余的兩份牦牛樣品被鑒定為加拿大棘球蚴（Echinococcus canadensis），屬于G6基因型。諸多研究表明，分子診斷技術在腸道寄生蟲的分子鑒定、蟲種間遺傳距離、同源性以及堿基突變類型多方面已經(jīng)得到充分應用。

2 青藏高原牦牛腸道寄生蟲流行病學

2.1 牦牛艾美爾球蟲病

牦牛球蟲病（Coccidiosis）其傳染病原主要為艾美耳屬球蟲（Eimeria spp.），是世界上最嚴重的牛類傳染寄生蟲病之一。張凱慧[27]等對西藏林芝市、山南市以及日喀則市牦牛球蟲的流行病學進行了調(diào)查，結(jié)果顯示艾美爾球蟲的總感染率為43.93%，其中三個地區(qū)球蟲的感染率分別為36.84%、37.74%、59.72%，共分離鑒定出十一種艾美耳屬球蟲，其中邱氏艾美耳球蟲（Eimeria zurnii）和橢圓艾美耳球蟲（Eimeria ellipsoidalis）為優(yōu)勢蟲種，其中兩種艾美爾屬球蟲的混合感染率最高。Dong[28]等從青藏高原地區(qū)的4個縣采集牦牛糞便324份，以確定青藏高原牦牛球蟲感染的流行現(xiàn)狀，其中在113份（34.9%）糞便樣品中發(fā)現(xiàn)艾美耳球蟲卵囊，并對卵囊進行分類鑒定。結(jié)果顯示共檢測出十四種艾美耳屬球蟲，其中邱氏艾美耳球蟲（E.zuernii）54.9%、皮利他艾美球蟲（Eimeria pellita）35.4%、加拿大艾美耳球蟲（Eimeria canadensis）33.6%感染率較高，且更多的艾美耳球蟲種在犢牛中被鑒定。

2.2 牦牛隱孢子蟲病

隱孢子蟲病（Cryptosporidiosis）其傳染病原為隱孢子蟲(Cryptosporidium spp.)是引發(fā)家畜以及人發(fā)生嚴重消化道疾病的一類傳染性寄生蟲病，呈流行性分布。毋亞運[29]采集西藏地區(qū)577份新鮮牦牛糞便，利用分子診斷技術擴增隱孢子蟲核糖體小亞基RNA基因，鑒定結(jié)果顯示隱孢子蟲的總感染率為1.4%，此次檢測結(jié)果顯示西藏地區(qū)牦牛隱孢子蟲感染見于牛隱孢子蟲(Cryptosporidium bovis)和安氏隱孢子蟲(Cryptosporidium andersoni)，并且后者感染率較高。Qi[30]等對通過PCR診斷技術對青藏高原地區(qū)隱孢子蟲進行調(diào)查，結(jié)果顯示西藏地區(qū)的感染率為4.17%，青海地區(qū)的感染率為2.63%。

2.3 牦牛弓形蟲病

弓形蟲病（Toxoplasmosis）其傳染病原為剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)，屬于人畜共患寄生蟲病。Liu[31]等采集青海省8個地區(qū)牦牛血清中共946份血清，采用IAT試驗和ELISA免疫學檢測方法對牦牛弓形蟲和犬新孢子蟲(Neospora caninum)的感染率進行了統(tǒng)計分析，其中弓形蟲抗體陽性率為11.8%（112/946），結(jié)果表明青海省多地區(qū)的牦牛中均存在弓形蟲感染，且弓形蟲感染與動物年齡沒有明顯關系。Li[32]等分別在2012年和2013年從青藏高原地區(qū)的牦牛中采集905和736血清樣本，通過間接血凝試驗（IHA）測定了弓形蟲的抗體，結(jié)果顯示2012和2013年青藏高原地區(qū)的弓形蟲感染率分別為21.7%和29.1%，結(jié)果表明牛弓形蟲的感染近年來在青藏高原上廣泛傳播。

2.4 片形吸蟲病

片形吸蟲病（Fascioliasis）是由與家畜采食或飲水時吞食囊蚴感染，并且寄生在肝臟的一類人畜共患寄生蟲病，其中肝片吸蟲(F.hepatica)作為我國常見的片形吸蟲病的病原之一，我國牦牛主要感染肝片吸蟲。趙蘭[33]對青海省祁連縣的牦牛肝片吸蟲進行檢測，感染率為10.00%；柴正明[34]對青海省興海縣的牦牛肝片吸蟲進行檢測，感染率為37. 77%；謝海玲[35]檢測出青海省玉樹州雜多縣感染率為5%～20%。

2.5 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus），呈世界形分布，家畜感染后易造成宿主不同程度的損傷，從而造成繼發(fā)傳染性疾病或感染性疾病。輕度感染，蟲體對宿主的組織器官造成的損傷不明顯。重度感染時，蟲體可引起宿主卡他性腸炎、腸黏膜出血或潰瘍，腸道部分或完全阻塞。何添文[36]等人通過形態(tài)學觀察與PCR診斷技術對西藏林芝市農(nóng)牧戶牦牛真胃線蟲進行鑒定，結(jié)果顯示該消化道線蟲為捻轉(zhuǎn)血矛線蟲。

2.6 圓形蛔狀線蟲病

圓形蛔狀線蟲（Asearops strong ylina)是寄生于家畜胃中的一類危害嚴重的消化道寄生蟲病。蔡金山[37]等對青海省德令哈市的19頭牦牛進行病理學剖檢，結(jié)果顯示牦牛圓形蛔狀線蟲的感染率為31.98%（6/19）,并且在相同飼養(yǎng)條件下牦牛圓形蛔狀線蟲的感染率和感染強度均高于黃牛。

2.7 棘球蚴病

棘球蚴病(Echinococcosis)其傳染病原為棘球蚴(Echinococcus cyst)，且寄生于家畜以及人體消化道器官組織的一類寄生蟲傳染病。彭毛[38]對青海玉樹牦牛棘球蚴（E.granulosus）進行調(diào)查，其總感染率為25.6%（33/129)，結(jié)果顯示肝、肺器官感染率分別為10.1%、15.5%。夏晨陽[39]2014等對西藏家畜三種絳蟲蚴病的感染情況進行調(diào)查，其中114頭牦牛棘球蚴（E. granulosus）的感染率為15. 79%。

2.8 莫尼茨絳蟲病

莫尼茨絳蟲病（Monieziasis）是呈流行性分布的一類腸道寄生蠕蟲病，其中擴展莫尼茨絳蟲(Monieziaexpansa)作為改病常見的病原之一。李世雙[40]對青海省門源縣的草原牦牛的絳蟲病感染情況進行調(diào)查，糞便蟲卵檢測結(jié)果顯示絳蟲的感染率為85%（85/100），通過顯微鏡觀察絳蟲卵的形態(tài)學，發(fā)現(xiàn)絳蟲卵多為莫尼次絳蟲。

3 討論

關于青藏高原地區(qū)牦牛腸道寄生蟲診斷，首先通過臨床癥狀進行初步診斷，采用糞便檢查法，分析牦牛腸道寄生蟲卵的感染情況；其次，收集死亡牦牛的蟲體，采用完全剖檢法，研究其種群分布以及感染動態(tài)，確定牦牛感染腸道寄生蟲的優(yōu)勢種群；對傳統(tǒng)方法難以定種的蟲株，采用分子分類學研究方法，對其核糖體DNA（rDNA）的ITS基因序列測定分析，確定蟲株的分類地位；對優(yōu)勢蟲體的部分線粒體（mtDNA）的cox1、nad1等遺傳標記基因序列進行分析，確定優(yōu)勢蟲株的進化關系。

綜上所述，青藏高原地區(qū)牦牛腸道寄生蟲危險嚴重，多以宿主體內(nèi)的消化的食物營養(yǎng)為食，也有的寄生蟲可破壞組織細胞等為，掠奪其營養(yǎng)；蟲體在腸管內(nèi)多發(fā)，引起腸道堵塞、增生、甚至破裂；蟲體攜帶致病性病原傳入宿主體內(nèi)，而導致其他傳染病的發(fā)生；寄生蟲感染降低了機體免疫力，可以引發(fā)一系列繼發(fā)癥。驅(qū)蟲時首先注意選擇廣譜高效的藥物， 其次通過對青藏高原地區(qū)牦牛寄生蟲病流行現(xiàn)狀的調(diào)查，充分利用其生活史，選擇合適的驅(qū)蟲時間、蟲體發(fā)育階段、相對封閉的場所進行驅(qū)蟲，驅(qū)蟲后對家畜排出的糞便實行統(tǒng)一集中無害化處理。合理放牧、減少應激因素、增強家畜抵抗力、加強飼養(yǎng)管理。