老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其與臨床特征和預后的關系

何春華 張斌忠 王胤達 董來榮

(嘉興學院附屬第二醫院腫瘤外科，浙江 嘉興 314000)

胃癌是消化系統常見惡性腫瘤，其預后比較差，對患者健康造成嚴重威脅。隨著胃癌診治技術的不斷發展，胃癌的預后有所改善，但胃癌的早期診斷率仍比較低，使部分患者不能及時診治，導致生存率仍不樂觀〔1〕。探索胃癌發生發展的標志物對早期防治胃癌和改善胃癌預后具有重要意義。微小RNA(miR)在動植物中廣泛存在，在惡性腫瘤的發生發展中發揮重要作用〔2〕。miR-93-5p為新發現的miRNA，在多種惡性腫瘤中表達異常，在惡性腫瘤的發病過程中發揮重要作用〔3，4〕。本文對胃癌患者血清miR-93-5p水平進行研究，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 收集2011年1月至2013年11月嘉興學院附屬第二醫院老年胃癌患者160例和同期老年健康體檢者160例分別作為胃癌組和對照組。胃癌患者均為首診、病理證實為胃癌；兩組簽署知情同意書、年齡≥60歲。研究經嘉興學院附屬第二醫院倫理委員會審批后進行。胃癌組年齡(67.85±6.76)歲，腫瘤最大徑(4.87±1.92)cm；TNM分期Ⅰ期37例、Ⅱ期58例、Ⅲ期51例、Ⅳ期14例；局部浸潤深度T1 32例、T2 44例、T3 51例、T4 33例；分化程度：低分化128例、中分化18例、高分化14例；對照組年齡(68.13±7.02)歲，男110例、女50例。兩組年齡、性別差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2研究方法 miR-93-5p測定：抽取患者外周靜脈血5 ml，置于離心機中離心(2 000 r/min)10 min，分離血清，加入Trizol提取總RNA，酶標儀測定RNA質量和濃度，將總RNA反轉錄為cDNA，以U6為內參照，在PCR儀中擴增，PCR條件為：95℃ 10 min；95℃ 20 s、60℃ 30 s、72℃ 30 s，共42個循環。以2-ΔΔCT表示血清miR-93-5p水平。PCR試劑盒及miR-93-5p引物購自美國ABI公司。

1.3隨訪 胃癌術后通過門診或電話隨訪，隨訪截止時間為2018年11月30日。

1.4統計學方法 采用SPSS20.0軟件進行t檢驗，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-93-5p對胃癌的診斷價值，采用Kaplan-Meier法繪制患者生存曲線，預后影響因素采用Cox分析。

2 結 果

2.1胃癌患者血清miR-93-5p水平 與對照組血清miR-93-5p水平(1.00±0.08)比較，胃癌組血清miR-93-5p水平明顯升高(1.86±0.14，t=67.464，P<0.001)。

2.2不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93-5p水平比較 不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度者血清miR-93-5p水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；不同TNM分期、局部浸潤深度、淋巴結轉移者血清miR-93-5p水平比較差異有統計學意義(P<0.05)，TNM分期高、局部浸潤深度深、有淋巴結轉移者血清miR-93-5p水平明顯高于TNM分期低、局部浸潤深度淺、無淋巴結轉移者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93-5p水平比較

2.3血清miR-93-5p診斷胃癌的效能 采用ROC曲線分析血清miR-93-5p診斷胃癌的效能，根據約登指數計算血清miR-93-5p最佳界值為1.324，ROC曲線下面積為0.871，95%CI為0.868～0.874，根據此界值判斷胃癌的靈敏度為71.25%(114/160)，特異度為96.25%(154/160)。見圖1。

圖1 血清miR-93-5p診斷胃癌的ROC曲線

2.4血清miR-93-5p與胃癌預后的關系 160例胃癌患者隨訪5年，根據ROC曲線約登指數計算的血清miR-93-5p=1.324為界，將患者分為高表達組92例和低表達組68例，高表達組5年總生存率(51.09%)和無病生存率(39.13%)均明顯低于低表達組(79.41%、70.59%，χ2=13.477、15.516，P<0.001)。見圖2和圖3。

2.5胃癌預后的Cox比例風險分析 以血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移為自變量進行胃癌預后影響因素Cox比例分析，結果顯示：血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移為胃癌預后的獨立影響因素(P<0.05)。見表2。

圖2 血清miR-93-5p與胃癌無病生存率的關系

圖3 血清miR-93-5p與胃癌累積生存率的關系

表2 胃癌預后影響因素Cox比例風險模型參數

3 討 論

胃癌患者早期癥狀缺乏特異性，難以鑒別，往往發展至晚期時才得以確診，錯過最佳治療時機，預后比較差〔5〕。胃癌死亡率比較高的主要原因為無有效的早期篩查和診斷胃癌的方法〔6〕。胃鏡檢查為早期診斷胃癌的主要方法，但其為有創操作，難以普及；臨床常用的CA199、癌胚抗原等腫瘤標志物在胃癌的篩查中特異性和靈敏性不足，故探討新的非侵入性胃癌診斷標志物具有重要價值。miRNA為非編碼、單鏈小RNA，可參與多種關鍵的生理病理活動；miRNA在惡性腫瘤的發病過程中也發揮重要作用，在惡性腫瘤的組織和細胞中，多種miRNA表達異常〔7，8〕。miRNA通過調控癌基因表達或抑癌基因表達參與惡性腫瘤的發生發展過程，多數miRNA發揮促進惡性腫瘤發生的作用，也有部分miRNA發揮抑制惡性腫瘤發生的作用〔9〕。多種miRNA在胃癌的發生發展中也發揮重要作用，如Feng等〔10〕研究發現miR-27b可通過靶向NR2F2抑制胃癌轉移；湯光華等〔11〕研究發現老年胃癌患者血清miR-18a水平升高，為胃癌篩查診斷中新的血清學指標；Jin等〔12〕研究發現miR-582-5p可通過靶向AKT3抑制胃癌細胞的增殖。miR-93-5p位于11q22.1染色體上，屬于miR-106b-25家族，在哺乳動物中miR-93-5p比較保守〔13〕。近來研究發現miR-93-5p在多種惡性腫瘤中表達異常，在多種惡性腫瘤的發病中具有重要作用。如張春明等〔14〕研究發現喉癌組織和細胞中miR-93-5p表達升高，其為喉癌發生發展過程中的重要癌基因；胡怡然等〔15〕研究發現miR-93-5p在直腸癌組織中也高表達，miR-93-5p水平與直腸癌體積、淋巴結轉移關系密切，其有望成為直腸癌新的生物標志物；Wang等〔16〕研究發現miR-93-5p可通過下調細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A基因的表達增強人結腸直腸癌細胞的多藥耐藥性。本研究結果表明miR-93-5p在胃癌的發病過程中發揮重要作用，血清miR-93-5p水平和胃癌患者的病情嚴重程度關系密切，檢測血清miR-93-5p水平在胃癌篩查、嚴重程度評估和預后評價中具有重要價值。