常用輸液溶劑中注射用烏司他丁穩(wěn)定性研究

李 鵬，朱龍社，張 方，胡曉藝，王昕陽，胡文利，康傳哲

（中國人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院藥劑科，四川 成都 610065）

注射用烏司他丁為蛋白酶抑制劑，是運用現(xiàn)代生物技術分離提取人新鮮尿液中抑制多種蛋白水解酶活力的糖蛋白而制成的凍干粉針劑，主要有效成分為烏司他丁，臨床主要用于治療急、慢性胰腺炎及急性循環(huán)衰竭的搶救[1-5]。烏司他丁的半衰期約為40 min，而藥品說明書中推薦的給藥方法為靜脈滴注1 ～2 h，該方法會導致還未給藥完成藥物就可能已代謝消除完全。因此，臨床用于急性胰腺炎及急性循環(huán)衰竭的搶救時，為了維持有效的血藥濃度，常采用輸液泵持續(xù)輸注的給藥方式，不僅給藥方便、快速，且可有效控制給藥速率和給藥劑量，臨床應用廣泛[6-8]。但注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑混合配制12 h 內的穩(wěn)定性目前尚未見相關研究報道。本研究中對注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑的配伍穩(wěn)定性進行了考察，為臨床合理安全使用注射用烏司他丁提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PHS-3C 精密型pH 計（廣州市深華生物技術有限公司）；L01A-24 型智能微粒檢測儀（江蘇蘇凈集團有限公司）；Waters 2489 型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；HYC-360 型醫(yī)用冷藏箱（青島海爾特種電器有限公司）；BL-310 型電子分析天平（德國Sartorius 公司）；SW-CJ-2FD 型水平層流潔凈工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公司）。

1.2 試藥

注射用烏司他丁（廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司，批號為H031611015，規(guī)格為100 000 單位）；烏司他丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，純度≥99%，批號為140785-201501）；5%葡萄糖注射液（5%GS，批號為A17031207-1）、0.9%氯化鈉注射液（0.9%NS，批號為A17012002-1），規(guī)格均為500 mL，均購自四川科倫藥業(yè)股份有限公司；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、乙腈均為色譜純，純度≥99.9%；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液配制

在我院靜脈用藥調配中心百級水平層流操作臺潔凈條件下，按無菌操作規(guī)程由經(jīng)驗豐富的專業(yè)配液藥師進行溶液配制[9]。根據(jù)注射用烏司他丁藥品說明書規(guī)定的用量，將注射用烏司他丁1 支（規(guī)格為10 萬單位）分別溶于5%GS 500 mL 和0.9%NS 500 mL 中，搖勻，備用。在溶液配伍前，先對空白對照組溶液的外觀、pH 和不溶性微粒情況進行測定。結果見表1。

表1 空白對照組溶液配伍前外觀、pH 和不溶性微粒測定結果（n=3）

2.2 外觀考察

上述配制的各溶液分別于配制后0，1，3，6，9，12 h取樣，在黑色和白色背景下目視檢查外觀并記錄。室溫條件下放置12 h，溶液均為澄明溶液，且未出現(xiàn)渾濁、沉淀現(xiàn)象及溶液顏色的明顯改變。

2.3 pH 測定

參照2015 年版《中國藥典（四部）》[10]中pH 測定的操作規(guī)則，在靜脈用藥調配中心萬級潔凈條件下，分別于0，1，3，6，9，12 h 時取樣測定并記錄上述配制的各溶液的pH。注射用烏司他丁與2 種臨床常用的輸液溶劑混合配制后，室溫條件下放置12 h 后pH 基本無變化，且均在靜脈輸液質量要求的正常范圍內。詳見表2。

表2 注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑配伍后不同檢測時間點pH 變化（±s，n=3）

表2 注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑配伍后不同檢測時間點pH 變化（±s，n=3）

溶劑5%GS 0.9%NS 0 h 5.65±0.04 5.95±0.03 1 h 5.68±0.11 6.01±0.05 3 h 5.75±0.07 5.93±0.10 6 h 5.69±0.04 5.92±0.04 9 h 5.73±0.05 5.86±0.06 12 h 5.70±0.06 5.89±0.02

2.4 微粒測定

參照2015 年版《中國藥典（四部）》不溶性微粒指定的檢查法光阻法的測定操作規(guī)則和結果判定，在靜脈用藥調配中心萬級潔凈條件下，分別于0，1，3，6，9，12 h時取樣測定上述配制的各溶液≥10 μm 和≥25 μm 的微粒數(shù)并記錄。注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑混合配制12 h 內，≥10 μm 和≥25 μm 的微粒數(shù)均無明顯變化，且均符合2015 年版《中國藥典（四部）》規(guī)定的限度。詳見表3。

表3 注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑配伍后不溶性微粒變化情況（±s，粒/mL，n=3）

表3 注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑配伍后不溶性微粒變化情況（±s，粒/mL，n=3）

5%GS 0.9%NS≥10≥25≥10≥25 0 h 6.43±0.28 0.18±0.03 5.07±0.41 0.46±0.05 1 h 4.80±0.31 0.12±0.02 4.75±0.26 0.32±0.03 3 h 4.72±0.40 0.25±0.02 4.87±0.33 0.28±0.01 6 h 4.84±0.36 0.20±0.01 5.11±0.47 0.34±0.02 9 h 5.39±0.22 0.27±0.02 4.96±0.35 0.43±0.04 12 h 5.76±0.17 0.29±0.05 5.30±0.19 0.52±0.02溶劑品種粒徑（μm）配伍后

2.5 烏司他丁含量測定(高效液相凝膠過濾色譜法)

2.5.1 色譜條件

色譜柱：Shodex LF -604 凝膠色譜柱（150 mm ×6.0 mm，5 μm）；流動相：磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉混合溶液（0.1% mol/L，39 ∶61，V/ V）-乙腈（90 ∶10，V/ V）；流速：0.7 mL/min；進樣量：20 μL；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃。

2.5.2 溶液制備

取烏司他丁對照品1 000 單位，置5 mL 棕色容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，即得每1 mL 200 單位的對照品溶液，室溫條件下避光保存。取2.1 項下配伍液適量，用0.22 μm 微孔濾膜濾過，續(xù)濾液即為供試品溶液[11]。

2.5.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：取5%GS、0.9%NS、對照品溶液、供試品溶液各適量，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過后，精密量取20 μL，依法進樣，記錄色譜峰，色譜圖見圖1。結果表明，在擬訂色譜條件下烏司他丁峰形對稱，保留時間約為7.68 min，且含量測定不受輸液溶劑干擾。

線性關系考察：取對照品溶液適量，分別用流動相稀釋成每1 mL 20，40，80，160，200，240 單位的標準系列溶液，精密量取20 μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖。以烏司他丁濃度為橫坐標（X）、峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得線性回歸方程Y=0.258X-0.050 2，R2=0.999 9（n=6）。結果表明，烏司他丁在每1 mL 20 ～240 單位范圍內濃度與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：選擇低、中、高3 種濃度（每1 mL50，100，200 單位）對照品溶液，按擬訂色譜條件重復測定6 次，連續(xù)測6 d，考察其日內和日間精密度。結果日內RSD分別為0.61%，0.55%，0.73%（n=6），日間RSD分別為0.70%，0.78%，0.84%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：取適量注射用烏司他丁，精密稱定，加流動相溶解并稀釋成每1 mL 200 單位溶液。取上述溶液9 份，每份1 mL，分別加入不同劑量濃度的烏司他丁對照品，制成濃度分別為每1 mL 360，400，440 單位的樣品溶液，取20 μL 進樣，計算回收率。結果見表4。

穩(wěn)定性考察：選擇每1 mL 50，100，200 單位3 種低、中、高濃度的供試品溶液各3 份，分別于0，1，3，6，9，12 h 進樣測定分析，考察方法的穩(wěn)定性。結果的RSD分別為0.45%，0.52%，0.76%（n=3），表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.5.4 含量測定

取供試品溶液，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過后，在擬訂色譜條件下，分別在0，1，3，6，9，12 h 時自動進樣20 μL，測定其峰面積，計算烏司他丁含量。以0 h 的含量為100，計算各時間點的相對百分含量。結果顯示，各時間點、各配伍液中烏司他丁的相對百分含量為99.45% ～102.55%，RSD低于1%，表明注射用烏司他丁與5%GS、0.9%NS 混合配制后，12 h 內含量基本無改變。結果見表5。

圖1 高效液相色譜圖

3 討論

靜脈成品輸液的不溶性微粒和藥物含量均受配制過程中很多因素影響，如配制過程中的環(huán)境潔凈度、配置人員的技術及無菌操作等[12-13]。本研究中配伍溶液的配置均由同一名專業(yè)技術人員在同一臺百級水平層流操作臺嚴格按照無菌操作規(guī)程完成，實現(xiàn)了配置環(huán)境和人員的條件控制，從而將以上因素對本試驗結果的干擾降低至最低，保證了試驗結果的真實準確。

注射用烏司他丁藥品說明書推薦的用量用法：將1 支（10 萬單位）溶于5%GS 或0.9%NS（500 mL）配制成每1 mL 200 單位的靜脈輸液，靜脈滴注每次1 ～2 h，1 ～3 次/日。但烏司他丁的藥代動力學特點為消除半衰期（t1/2）極短，僅為40 min，臨床用于治療急性胰腺炎及急性循環(huán)衰竭的搶救時，上述給藥劑量和給藥方式難以保證患者體內的有效血藥濃度[14]。故臨床醫(yī)生常采用輸液泵持續(xù)輸注12 h 的給藥方式，更有利于快速起效，并保持有效的血藥濃度[15]。本研究結果顯示，注射用烏司他丁與2 種輸液溶劑混合配制12 h，溶液外觀和pH均無明顯變化，≥10 μm 和≥25 μm 不溶性微粒數(shù)均符合2015 年版《中國藥典（四部）》規(guī)定的限度，且12 h 內烏司他丁的含量基本無改變。故注射用烏司他丁與2 種輸液溶劑配伍后，室溫條件下，12 h 內可保持相對穩(wěn)定，臨床可采用輸液泵持續(xù)給藥的方法使用。

表4 加樣回收試驗結果（n=9）

表5 注射用烏司他丁與2 種常用輸液溶劑配制12 h 內相對百分含量變化情況（%）