硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑穩(wěn)定性研究

黃潔瑕，肖海文，雷春華，王明巧，廖曉鳳，林文輝，2△

（1. 廣東同德藥業(yè)有限公司，廣東 湛江 524018； 2. 國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心·藥用植物油研究＜湛江＞分中心，廣東 湛江524018； 3. 湛江市明德醫(yī)藥科技有限公司，廣東 湛江524018； 4. 國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心·艾草分中心，廣東 廣州510632）

硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑是葛蘭素史克公司產(chǎn)品萬托林（Ventolin）的仿制品，臨床主要用于緩解哮喘或慢性阻塞性肺部疾患（可逆性氣道阻塞疾病）患者的支氣管痙攣，及預(yù)防急性運動誘發(fā)的哮喘或其他過敏原誘發(fā)的支氣管痙攣。制劑的穩(wěn)定性不僅是評價制劑質(zhì)量的重要指標，還是臨床用藥安全的重要保證，故制劑穩(wěn)定性的考察尤為重要。本研究中根據(jù)2015 年版《中國藥典（四部）》（通則9001）的《原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則》及硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑質(zhì)量標準[1]，以硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑的性狀、沙丁胺酮、有關(guān)物質(zhì)、遞送劑量均一性、微細粒子劑量、含量測定、微生物限度為指標進行考察，分別進行影響因素試驗、加速試驗和長期試驗，通過觀察各指標的變化評價制劑的穩(wěn)定性[2]，以期為該制劑的生產(chǎn)、質(zhì)量控制、儲藏條件等后續(xù)研究提供參考[3]。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技＜中國＞有限公司）；DHG-9070 型鼓風干燥箱，LHH-150GSP 型藥品綜合穩(wěn)定性試驗箱，均購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司；AUW220D 型電子天平（上海右一儀器有限公司，十萬分之一）；安德森多級撞擊器（ACI，Copley Controls 公司）；BCD-215KS 型冰箱（青島海爾股份有限公司）。

1.2 試藥

沙丁胺酮對照品（批號為1437-069A2，Tlcpharmchem 公司）；硫酸沙丁胺醇對照品（批號為100328-200703）、硫酸特布他林對照品（批號為100273-2001202），均購自中國食品藥品檢定研究院；硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑（批號分別為20160201，20160202，20160301，廣東同德藥業(yè)有限公司）；無水乙醇為分析純；異丙醇、醋酸銨、磷酸、乙腈、甲醇、庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉均為色譜純；屈臣氏蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 考察項目

2.1.1 性狀

本品藥液為白色或類白色混懸液。

2.1.2 有關(guān)物質(zhì)

色譜條件：固定相為用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為庚烷磺酸鈉溶液[取庚烷磺酸鈉2.87 g 與磷酸二氫鉀2.5 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用磷酸溶液（1→2）調(diào)節(jié)pH 至3.65] -乙腈（78 ∶22，V/ V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為220 nm；進樣量為20 μL。

溶液制備：取本品1 瓶，用乙醇將表面淋洗干凈，冷凍10 min，取出，在鋁蓋上鉆1 個小孔，插入注射針頭（勿與液面接觸），放至室溫，待拋射劑氣化揮盡后，除去鋁蓋，加流動相分次洗滌，合并洗液至50 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取1 mL，置100 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取硫酸特布他林與硫酸沙丁胺醇適量，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL 中各約含0.2 mg 的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

2.1.3 沙丁胺酮

色譜條件：固定相為以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為以異丙醇-0.1 mol/L 醋酸銨緩沖液（pH=4.5，1.5 ∶98.5，V/ V）為流動相A，異丙醇為流動相B，進行線性梯度洗脫（見表1）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為276 nm；進樣量為20 μL。

表1 流動相梯度洗脫程序

溶液制備：取有關(guān)物質(zhì)項下的供試品溶液作為供試品溶液。取沙丁胺酮對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每1 mL 中約含2.0 μg 的溶液，作為對照品溶液。

2.1.4 遞送劑量均一性

取本品，按2015 年版《中國藥典（四部）》（通則0111）操作，照含量測定項下的方法測定。

2.1.5 微細粒子劑量

照2015 年版《中國藥典（四部）》（通則0951）中吸入制劑微細粒子空氣動力學(xué)特性測定法操作，照含量測定項下的方法測定。

2.1.6 含量測定

色譜條件：固定相為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為磷酸鹽緩沖液（取0.08 mol/L 磷酸二氫鈉溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH 至3.10±0.05）-甲醇（85∶15，V/ V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為276 nm；進樣量為20 μL。

溶液制備：取本品，充分振搖，除去帽蓋，試撳5 次，用流動相淋洗套口，充分干燥后，倒置于已加入一定量流動相作為吸收液的適宜燒杯中，將套口浸入吸收液液面下（至少25 mm），撳射10 次（注意每次撳射間隔5 s并緩緩振搖），取出，用流動相淋洗套口內(nèi)外，合并吸收液與洗液，定量轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取硫酸沙丁胺醇對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含12 μg 的溶液，作為對照品溶液。

2.1.7 微生物限度

應(yīng)符合非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查。按2015 年版《中國藥典（四部）》（通則1105、通則1106、通則1107）微生物計數(shù)法和控制菌檢查法項下有關(guān)的各項規(guī)定、非無菌藥品微生物限度標準。1 mL 供試品中需氧菌總數(shù)不得超過102cfu，霉菌和酵母菌數(shù)不得超過10 cfu，耐膽鹽革蘭陰性菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌不得檢出。

2.2 影響因素試驗[4 -7]

高溫試驗：取硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑（批號為20160201），60 ℃溫度下放置10 d，于第5 天和第10 天取樣檢驗。結(jié)果見表2。

高濕試驗：取硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑（批號為20160201），置恒濕密閉容器中，在25 ℃，相對濕度（90±5）%條件下放置10 d，分別于第5 天和第10 天取樣檢驗。結(jié)果見表2。

光照試驗：取硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑（批號為20160201），放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，于照度為（4 500±500）lx 的條件下放置10 d，于第5 天和第10 天取樣檢驗。結(jié)果見表2。

凍融試驗（熱循環(huán)試驗）：對易發(fā)生相分離、黏度減小、沉淀或聚集的制劑，按《化學(xué)藥物（原料藥和制劑）穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（修訂）》還應(yīng)考慮進行低溫試驗。低溫試驗包括3 次循環(huán)，每次循環(huán)是先于2 ～8 ℃放置2 d，再在40 ℃放置2 d，取樣檢測。取硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑（批號為20160201），在4 ℃下放置2 d 和40 ℃下放置2 d 為1 個循環(huán)，共循環(huán)3 次。每完成1 個循環(huán)，取樣檢測。結(jié)果見表3。

2.3 加速試驗[4 -7]

取硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑3 批（批號分別為20160201，20160202，20160301），在溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下放置6 個月。在試驗期間第1，2，3，6 個月末分別取樣1 次。結(jié)果見表4。

表2 硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑影響因素試驗結(jié)果

表3 硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑凍融試驗結(jié)果

表5 硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑長期穩(wěn)定性試驗結(jié)果（批號為20160201 /20160202 /20160301）

2.4 長期穩(wěn)定性試驗[4 -7]

硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑3 批（批號分別為20160201，20160202，20160301），在溫度（25±2）℃、相對濕度（60±10）%的條件下放置24 個月，分別于3，6，9，12，18，24 個月取樣。結(jié)果見表5。

2.5 有效期確定

在確定有效期的統(tǒng)計分析過程中，一般選擇可以定量指標進行處理，通常根據(jù)藥物含量變化計算，按照長期試驗測定數(shù)值，以標示量（%）對時間進行直線回歸，獲得回歸方程，求出各時間點標示量的計算值（y′），然后計算標示量（y′）95%單側(cè)可信限的置信區(qū)間為y′±z。

式中，tN-2為概率0.05，自由度N-2 的t單側(cè)分布值，N為數(shù)組；X0為給定自變量；為自變量X的平均值。

式中，Q=Lyy-bLxy；Lyy為y的離差平方和，Lyy=∑y2-（∑y）2/N；Lxy為xy的離差乘積之和Lxy=∑xy-（∑x）（∑y）/N；b為直線斜率[8-9]。

按照長期試驗測定數(shù)值，分別對各組估計數(shù)據(jù)（X，y′），下限（X，y′ -z），上限（X，y′ +z）作趨勢線。以二次曲線進行回歸，根據(jù)需要的限值代入計算。結(jié)果見表6。

表6 有效期計算結(jié)果

3 討論

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過影響因素試驗、6 個月加速試驗及24 個月長期試驗等穩(wěn)定性考察，性狀、沙丁胺酮、有關(guān)物質(zhì)、遞送劑量均一性、微細粒子劑量、含量測定、微生物限度，各項指標測定結(jié)果均未發(fā)生明顯變化，表明本品制備工藝、包裝與貯存條件能保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，能為藥理研究提供穩(wěn)定、可靠的樣品。本產(chǎn)品加入了微粉化工序，使藥粉粒徑控制在5 μm 以下，采用環(huán)保型拋射劑（藥物推動劑）四氟乙烷替代非環(huán)保型拋射劑，符合我國吸入藥用氣霧劑拋射劑更新升級要求，且提高了藥物的穩(wěn)定性。同時，通過控制粒子表面電荷或利用空間結(jié)構(gòu)達到粒子間相互隔閡，實現(xiàn)了混懸液的穩(wěn)定。根據(jù)長期試驗測定數(shù)值，3 批硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑樣品的預(yù)測有效期均大于60 個月，有效期暫定為24 個月。