消炎止癢浸膏質量標準研究

吳艷蓉

（遼寧省沈陽市肛腸醫院藥劑科，遼寧 沈陽 110002）

消炎止癢浸膏為我院特色中藥制劑，由蛇床子、苦參、防風、荊芥、蒼術、連翹等組方，具有消炎、止癢、祛風功效，適用于肛門濕疹及肛周瘙癢癥。該制劑為外用制劑，應用時以溫水稀釋后熏洗患處，直接作用于肛腸病變部位，臨床療效確切，用藥簡便安全，患者感覺舒適。但其質量標準較簡單，且無主要成分含量測定方法，無法全面進行質量控制。本研究中采用薄層色譜（TLC）法定性鑒別該制劑中的苦參堿和連翹苷，采用高效液相色譜（HPLC）法測定該制劑中蛇床子素含量，為其質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10AT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；FA1104 型電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；DL-180 型超聲波清洗機（浙江省象山縣石浦海天電子儀器廠）。

1.2 試藥

苦參堿對照品（批號為110843-201011）、連翹苷對照品（批號為110821-201213）、蛇床子素對照品（批號為110822-201308）均購自中國食品藥品檢定研究院；消炎止癢浸膏（沈陽市肛腸醫院自制制劑，批號分別為20170823，20170906，20170920，規格為每袋10 g）；甲醇、乙腈（山東禹王實業有限公司化工分公司）均為色譜純；丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯、硫酸、乙醇、氫氧化銨、甲苯、正丁醇、氫氧化鈉（天津市恒興化學試劑制造有限公司）均為分析純；純凈水（杭州娃哈哈集團）。

2 方法與結果

2.1 TLC 鑒別

苦參[1]202：取本品10 mL，加三氯甲烷20 mL，濃氨試液0.3 mL，搖勻，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作為對照品溶液。按樣品處方工藝制備缺苦參的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。按2015 年版《中國藥典（四部）》通則0502 TLC 法試驗，吸取上述3 種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇（8 ∶3 ∶0.5，V/ V/ V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同橙色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 A。

連翹[1]170：取本品10 mL，加硅藻土12 g，研勻，加三氯甲烷60 mL，超聲處理20 min，濾過，棄濾液，藥渣揮干，加甲醇50 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL 使溶解，用水飽和的正丁醇提取2 次，每次25 mL，合并提取液，用氨試液洗滌2 次，每次30 mL，再用水洗滌2 次，每次30 mL，正丁醇提取液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取連翹苷對照品，加甲醇制成每1 mL 含2 mg 的溶液，作為對照品溶液。按樣品處方工藝制備缺連翹的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。按2015 年版《中國藥典（四部）》通則0502 TLC 法試驗，吸取上述3 種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15 ∶40 ∶22 ∶10，V/ V/ V/ V）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Topsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（63 ∶37，V/ V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：322 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

取蛇床子素對照品2.5 mg，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含蛇床子素0.1 mg/mL 的對照品溶液。取消炎止癢浸膏1 mL，加硅藻土12 g，研勻，加甲醇60 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL 使溶解，用乙酸乙酯提取2 次，每次25 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇定容于50 mL 容量瓶中，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。按樣品處方工藝制備缺蛇床子的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取2.2.2 項下3 種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，色譜圖見圖2。理論板數按蛇床子素峰計應不低于3 000，與相鄰峰的分離度大于

1.5，系統適用性良好。

線性關系考察：分別精密吸取蛇床子素對照品貯備液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取各10 μL 注入高效液相色譜儀測定。以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=58 195X+692 537，r2=0.999 6（n=5）。結果表明，蛇床子素質量濃度在5.0 ～80.0 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件重復進樣6 次，記錄峰面積。結果蛇床子素峰面積的RSD為1.82%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖2 高效液相色譜圖

重復性試驗：精密量取樣品（批號為20170823）6份，各1 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果蛇床子素峰面積的RSD為0.93%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取同一批（批號為20170823）供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果蛇床子素峰面積的RSD為1.32%（n=6），表明供試品溶液在室溫下12 h 內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20170823）6 份，精密稱定，分別精密加入高、中、低3 種濃度的對照品溶液適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取3 個批次的樣品，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定樣品中蛇床子素的峰面積，并計算含量。結果批號分別為20170823，20170906，20170920 的樣品中蛇床子素的含量分別為1.438，1.424，1.457mg/mL。

3 討論

消炎止癢浸膏具有消炎、止癢、祛風功效，現代化學和藥理學研究表明，蛇床子、苦參和連翹為該方藥理作用的主要物質基礎[2-5]，且為該制劑處方中的主要藥物。蛇床子的有效化學成分為香豆素類化合物，包括蛇床子素、歐前胡素等[6]，具有較強活性的單體成分為蛇床子素，其含量為蛇床子的質量控制標準之一[1，7]。苦參堿和連翹苷分別為苦參和連翹的主要藥效成分，且二者分別為苦參和連翹的質量控制指標之一[1，8-9]。

參考2015 年版《中國藥典（一部）》和文獻[2-3，10-11]，本研究中通過對樣品的提取方法、點樣量、展開劑種類和溶劑比例等條件進行篩選，最終確定了苦參堿和連翹苷的TLC 定性鑒別方法；參考文獻[4-5，12]和2015 年版《中國藥典（一部）》中蛇床子藥材項下蛇床子素的含量測定方法[1] 315測定蛇床子素的含量，以乙腈-水（65 ∶35，V/ V）為流動相，但用于本樣品的分離度與理論板數均不理想，于是對流動相比例進行了篩選，最終確定乙腈-水（63 ∶37，V/ V）可滿足樣品中蛇床子素的分離要求。

綜上所述，本研究中建立的方法操作簡便，專屬性強，樣品整體分離效果良好，可用于消炎止癢浸膏的質量控制。