植煙土壤菌株XXJ15的分離及活性評估

許曉敬　唐培培　禹寶成　郭傳濱　楊立均　孫會忠

摘要? ? 采用平板分離技術從煙草根際土壤中分離到一個菌株，編號為XXJ15，并對該菌株的幾種活性功能進行了評估。結果表明，XXJ15在魔芋粉液體鑒別培養基經過48 h發酵后，發酵液中的β-甘露聚糖酶活性達到4.6 U/mL;在解磷液體鑒別培養基中培養72 h后，培養基上清液中游離態磷含量達到102 μg/mL;XXJ15不具備解鉀活性。因此，菌株XXJ15可作為后期誘變育種、煙草專用菌肥和土壤保育劑開發等研究的備用菌株。

關鍵詞? ? 植煙土壤;酶活性;解磷菌;分離;活性評估

中圖分類號? ? S182? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）02-0174-01? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

Abstract? ? A strain named XXJ15 was isolated from tobacco rhizosphere soil by plate separation，and the activity function of the strain were evaluated.The results showed that after 48 h fermentation in the liquid identification medium of konjac powder，the activity of β-mannanase in the fermentation broth reached 4.6 U/mL.After culture for 72 h in the phosphorus solution identification medium，the free phosphorus content in the supernatant of the medium reached 102 μg/mL.XXJ15 didn′t have potassium activity.Therefore strain XXJ15 can be used as a backup strain for later mutagenesis breeding，tobacco special bacterial fertilizer and soil conservation agent development.

Key words? ? tobacco-growing soil;enzyme activity;phosphate-solubilizing bacteria;isolation;activity evaluation

煙草是我國一種傳統的經濟作物，但在實際栽培過程中，耕作層土壤的劣變給煙葉生產造成了很大的困擾，成為制約產量和品質提高的不利因素[1-2]。盡管微生物肥料或制劑起效普遍較慢，但通過一系列綠色或有機栽培技術的使用，保證煙葉品質和特色成為第一要務[3]。我國約有74%的耕地缺磷，難溶性磷酸鹽是土壤中絕大部分磷主要的存在形式，植物不能直接吸收利用[4-6];土壤中的有效鉀易流失，需及時補充，尤其是對于嗜鉀作物煙草來說補充鉀肥更為重要[7-8];活性多糖對植物生長和土壤中的微生物活性起著重要作用。本研究對從煙草根際土壤中分離到的一株菌的生物學活性進行了初步評估，現將結果報道如下。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

土壤樣品采自駐馬店市植煙區煙田。

牛肉膏蛋白胨培養基[9]：牛肉膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，氯化鈉10 g/L，瓊脂20 g/L，pH值7。

魔芋粉鑒別培養基[10]：魔芋精粉5 g，硫酸鎂5 g，硝酸鈉3 g，磷酸鉀1 g，硫酸鐵0.01 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1 000 mL，自然pH值。

解磷菌鑒別培養基[6]：硫酸銨0.5 g，葡萄糖5.0 g，氯化鈉0.5 g，氯化鉀0.3 g，硫酸鐵0.03 g，硫酸鎂0.3 g，硫酸錳0.03 g，雞蛋黃10 mL，菊糖1.0 g，瓊脂粉18.0 g，蒸餾水1 000 mL，自然pH值。

解鉀菌發酵培養基[8]：按100 g培養基計，分別含有鉀長石0.3 g（超純水水洗5次），磷酸氫二鈉0.2 g，碳酸鈣0.01 g，七水硫酸鎂0.5 mg，三氯化鐵0.5 mg，蔗糖0.5 g，海藻糖0.1 g，瓊脂粉1.8 g，pH值控制在7.0～7.5。

LB培養基[9]：斜面和活化培養基。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 菌株的獲得。稱取土樣5 g，無菌操作加入裝有45 mL生理鹽水的250 mL三角瓶中，振蕩20 min，靜置30 s，制成10-1土壤稀釋液。再按10倍梯度稀釋至10-6濃度。取10-6、10-5、10-4 3個梯度稀釋液各0.1 mL涂布牛肉膏蛋白胨培養基平板，于37 ℃恒溫培養3 d。用接種環挑取單菌落并劃線純化，獲得目標菌株，斜面培養基4 ℃保藏。