不同來源生脈注射液對兔和貓降壓作用的比較研究#

黎家敏 馬佳麗 楊春 鄧林 馬文靜 榮祖元

·基礎論著·

不同來源生脈注射液對兔和貓降壓作用的比較研究#

黎家敏*馬佳麗 楊春 鄧林 馬文靜 榮祖元Δ

（四川省食品藥品檢驗檢測院，四川 成都 611731）

比較不同來源生脈注射液對新西蘭兔和貓的降壓作用，探討新西蘭兔用于生脈注射液降壓作用研究和產品質量評價的可行性。取健康新西蘭兔16只和貓4只，均雌雄各半，分別經耳緣靜脈緩慢注射50 mg?kg-1（新西蘭兔）或腹腔注射45 mg?kg-1（貓）的戊巴比妥鈉進行麻醉，按1.0 mL?kg-1的給藥體積分別給予A、B和C三個廠家生脈注射液后，立即測定其動脈血壓。統計分析比較新西蘭兔和貓對不同來源生脈注射液的降壓反應。新西蘭兔對1.0 mL?kg-1的不同廠家生脈注射液均具有很好的降壓反應，降壓均值大于3 kPa，且不同來源產品對新西蘭兔的降壓作用存在一定的差異性，在16只兔體內試驗結果均為一致；而貓對生脈注射液的降壓反應具有敏感性較高但易耐受的特點。新西蘭兔不僅可以用于生脈注射液降壓作用的研究，還可用于產品間質量的評價。

生脈注射液；新西蘭兔；貓；降壓作用

生脈注射液處方源自中醫古方“生脈散”，主要由紅參、麥冬、五味子組成，具有加強心肌收縮力、增加冠狀動脈流量、升高血壓、提高心肌耐缺氧能力、擴張血管、抗休克、對化療藥物有增效及減毒等作用。臨床上廣泛應用于心血管、內分泌等系統疾病[1-2]。目前，常用的中藥材受產地和環境影響，造成中藥材的質量不夠穩定[1]。

生脈注射液具有降低人和動物血壓的作用，甚至引起低血壓的不良反應[3-6]。雖然有報道生脈注射液對貓的降壓物質檢查出現不合格[7]。但當前國內沒有貓的實驗動物標準，實驗用貓大多從商販或收購型飼養場購買，其遺傳背景、微生物和寄生蟲等攜帶狀況均不清楚，存在實驗結果隱存著未知因素的影響和生物安全隱患[8-10]。

本文擬通過利用新西蘭兔，研究不同來源生脈注射液的降壓作用，并與貓的降壓反應結果對較，為今后新西蘭兔用于生脈注射液降壓作用研究和產品質量評價提供實驗基礎和參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

普通級新西蘭兔16只，雌雄各半，由邳州市東方養殖有限公司提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（蘇）2017-0002。實驗用貓4只，雌雄各半，由成都達碩實驗動物有限公司提供。飼養條件：18℃-22℃，相對濕度：40%-70%，自由飲食，光照周期為12/12 h。

1.1.2 儀器

RM6280C多道生理信號采集處理系統，成都儀器廠生產；CPA225D電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司生產；MW-6電子臺秤，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司生產。

1.1.3 藥物試劑

生脈注射液由三個廠家生產。A廠，批號：2001，規格：20 mL/支；B廠，批號：1203，規格：10 mL/支； C廠，批號：1221，規格：20 mL/支。磷酸組胺標準品，批號：150510-201313，規格：約20 mg，來源：中國食品藥品檢定研究院提供。戊巴比妥鈉，批號：130315，規格：25 g/瓶，德國默克公司生產。肝素鈉注射液，批號：151710086A，規格：2 mL: 12500單位，常州千紅生化制藥股份有限公司生產。0.9%氯化鈉注射液，批號：G118021804，規格：100 mL: 0.9 g，四川科倫藥業股份有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 不同生脈注射液對新西蘭兔降壓作用試驗

取健康合格的新西蘭兔16只，按50 mg?kg-1給藥劑量，經耳緣靜脈緩慢注射戊巴比妥鈉溶液進行麻醉后，固定于恒溫手術臺上。手術分離一側頸動脈插入連接生理信號采集處理系統的動脈插管，管內充滿約750 單位·mL-1的肝素鈉溶液作為抗凝劑，記錄動物血壓。經另一側耳緣靜脈依次注射不同來源生脈注射液，三次給藥作為一組，通過調整不同給藥順序再注射另一組（如：A、B、C；B、C、A；C、A、B等），依次循環，給藥體積均為1.0 mL?kg-1原液（人最大臨床給藥劑量）。各次注射速度應基本相同，每次注射后立即注人約3 mL的氯化鈉注射液，每次注射應在前一次反應恢復穩定以后進行，且相鄰兩次注射的間隔時間（約2～3 min）應盡量保持一致。

1.2.2 不同來源生脈注射液對貓降壓作用試驗

健康的貓4只，按45 mg?kg-1給藥劑量，經腹腔注射戊巴比妥鈉溶液麻醉后，固定于恒溫手術臺上，分離一側頸動脈插入連接生理信號采集處理系統的動脈插管，管內充滿約750單位·mL-1肝素鈉溶液作為抗凝劑，記錄動物血壓。經另一側股靜脈依次注射藥液。參照《中國藥典》2015年版（四部）通則1145降壓物質檢查法[11]，自靜脈依次注入0.05 μg?kg-1、0.10 μg?kg-1和0.15 μg?kg-1組胺劑量，重復2-3次，若0.10 μg?kg-1劑量所致血壓的下降值不小于2.67 kPa，同時相應各劑量所致反應的平均值有差別，可認為該動物的靈敏度符合要求，可用于后續降壓作用比較試驗。給藥方式和要求同上述“1.2.1”中內容。

1.3 數據收集與統計分析

2 結果

2.1 不同來源生脈注射液對新西蘭兔降壓作用

2.1.1 不同性別新西蘭兔基礎血壓的比較

不同性別新西蘭兔的基礎血壓值存在差異，雄性動物的基礎血壓明顯高于雌性動物的基礎血壓（P＜0.01），見表1。

表1 不同性別新西蘭兔基礎血壓值的比較（±SD，n=8）

注：與雌性動物比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.1.2 不同生脈注射液對新西蘭兔降壓作用

雌性新西蘭兔對三個廠家生脈注射液降壓作用從強到弱依次是：生脈注射液（A）＞生脈注射液（B）＞生脈注射液（C）。經SPSS軟件統計分析比較，生脈注射液（A）的降壓作用顯著大于生脈注射液（C）（P＜0.05），其余兩兩比較未見有統計學差異（P＞0.05）。雄性新西蘭兔對三個廠家生脈注射液降壓作用從強到弱依次是：生脈注射液（A）＞生脈注射液（B）＞生脈注射液（C）。經SPSS軟件統計分析比較，生脈注射液（A）和生脈注射液（B）的降壓作用均顯著性大于生脈注射液（C）（P＜0.01），而生脈注射液（A）與生脈注射液（B）相比較未見統計學差異（P＞0.05），見表2。

表2 不同性別新西蘭兔對不同廠家生脈注射液降壓反應的比較（±SD，n=8）

注：與生脈注射液（C）比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

新西蘭兔對三個廠家生脈注射液的降壓作用均值從強到弱依次是：生脈注射液（A）＞生脈注射液（B）＞生脈注射液（C）。經SPSS軟件統計分析比較，生脈注射液（A）和生脈注射液（B）的降壓作用均顯著性大于生脈注射液（C）（P＜0.01），而生脈注射液（A）與生脈注射液（B）相比較未見有統計學差異（P＞0.05），見表3。

新西蘭兔對1.0 mL?kg-1的不同廠家生脈注射液均具有很好的降壓反應，降壓均值均大于3 kPa，且不同廠家生脈注射液對新西蘭兔的降壓作用存在一定的差異性，在16只動物體內試驗結果均為一致.

表3 新西蘭兔對不同廠家生脈注射液降壓反應的比較（±SD，n=16）

注：與生脈注射液（C）比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.2 不同來源生脈注射液對貓的降壓作用

2.2.1 貓對組胺的靈敏度試驗

4只貓經0.10 μg?kg-1組胺處理后，降壓均值均大于2.67 kPa，且各劑量組胺所致反應的平均值有差別，其靈敏度試驗均符合要求。

2.2.2 不同來源生脈注射液對貓的降壓作用

三個廠家生脈注射液對貓的降壓作用依次為：生脈注射液（A）＞生脈注射液（B）＞生脈注射液（C）。

統計分析顯示，不同廠家生脈注射液之間比較均未見統計學差異（P＞0.05），見表4。

表4 貓對不同廠家生脈注射液降壓反應的比較（±SD，n=4）

注：與生脈注射液（C）比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 2.2.3 生脈注射液不同給藥順序對貓降壓反應的影響

2.2.3 生脈注射液給藥順序對貓降壓反應的影響

貓對生脈注射液首次給藥的降壓反應非常明顯，但隨著給藥次數的增加，其降壓反應也在不斷減弱，同時動物的整體血壓下降，見圖2。

貓對生脈注射液首次給藥的降壓反應非常明顯，但隨著給藥次數的增加，其降壓反應也在不斷減弱，同時動物的整體血壓也在下降，說明不同給藥先后順序對貓降壓作用的影響很大，見圖1。

圖1 貓對生脈注射液不同給藥順序的降壓反應趨勢

注：A，B，C，D為4只貓對不同給藥順序的效果

3 討論

新修訂的《中華人民共和國藥品管理法》以“四個最嚴”為立法宗旨，以最嚴謹的標準、最嚴格的監管、最嚴厲的處罰、最嚴肅的問責來保障公眾用藥安全。藥品安全事關人民群眾身體健康和生命安全，社會關注度高。作為使用廣泛且用量較大的生脈注射液，隨著臨床應用的增多，其發生不良反應的報道也逐漸增多，日益引起人們的重視[12]，甚至會引起心血管系統低血壓等嚴重不良反應[5,13]，卻很少有人提及它對血壓的影響[3]。中藥注射劑由于成分復雜、原材料和生產工藝標準化控制困難以及物質基礎研究薄弱等問題，其不良反應也呈復雜性和未知性。因此，開展中藥注射劑藥品的安全性評價和質量穩定性研究具有重要的意義。

現行生脈注射液質量標準——《國家食品藥品監督管理局國家藥品標準》（WS3－B- 2865-98-2011）尚未對降壓物質進行控制和要求。張德波等曾報道利用貓對生脈注射液進行降壓物質檢查時發現有不合格現象[7]。

目前實驗所用的貓，國內還沒有統一的國家質量標準，沒有實現實驗動物標準化，存在來源不清、健康和質量難以保證以及巨大的生物安全隱患等問題。因此，通過探索利用新西蘭兔為開展生脈注射液降壓作用的研究和產品的質量評價提供新的途徑。課題組前期研究發現，新西蘭兔對組胺引起的降壓反應很不敏感，但生脈注射液可會引起其產生明顯的降壓作用。故在本文的不同來源生脈注射液對新西蘭兔降壓作用試驗研究中沒必要開展新西蘭兔的組胺靈敏度試驗。

本研究通過比較三個廠家生產的生脈注射液對新西蘭兔和貓的降壓作用，發現不同來源和生產工藝的生脈注射液均能引起新西蘭兔和貓產生明顯的降壓反應，降壓作用依次為：生脈注射液（A）＞生脈注射液（B）＞生脈注射液（C），其差異性在16只新西蘭兔具有很好的重現性。說明不來源和生產工藝的產品存在一定的質量差異性。但是不同性別新西蘭兔對不同來源生脈注射液的降壓反應存在一定的差異性。在雌性動物中只有生脈注射液（A）的降壓作用顯著性大于生脈注射液（C），而雄性動物中生脈注射液（A）和生脈注射液（B）的降壓作用均顯著性大于生脈注射液（C）。可能是由于雄性動物的基礎血壓較高，產生的降壓作用更明顯。

不同來源生脈注射液對貓降壓作用沒有統計學差異，結果與新西蘭兔的不一致。原因可能是：①生脈注射液對貓的降壓作用稍強于新西蘭兔，造成降壓作用放大，從而導致產品間的降壓作用差異性被削弱；②貓對生脈注射液的耐受性很明顯，隨著給藥次數的增加，其降壓反應會急劇地減弱，也會造成降壓反應的差異性進一步縮小。

我們還發現生脈注射液不同給藥順序對貓降壓反應的影響很大，首次給藥的降壓作用非常明顯，甚至會出現近似低血壓休克的抽搐反應。但隨著給藥次數的增加，降壓作用急劇降低，動物的整體血壓也下降。提示在臨床使用生脈注射液時，務必嚴格按照使用說明書的要求，不得超劑量、高濃度、過快滴注或長期連續用藥。特別是首次給藥時更應緩慢滴注和加強臨床觀察，以免引起急性的降血壓作用而產生休克等不良反應。

總之，本研究結果表明，新西蘭兔可用于生脈注射液降壓作用的研究和產品的質量評價，尤其可作為的降壓試驗動物，進行產品的內部質量控制和產品差異性評價。

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Comparative study on depressor effects of different Shengmai injections on rabbits and cats#

Li Jia-min*, Ma Jia-li, Yang Chun, Deng Lin, Ma Wen-jing, Rong Zu-yuanΔ

(Sichuan Institute for Food and Drug Control, Chengdu 611731, Sichuan)

To compare the depressor effects of Shengmai injections produced by different manufacturers on New Zealand rabbits and cats, and explore the quality of Shengmai injections in New Zealand rabbits.Sixteen healthy New Zealand rabbits and 4 cats were anesthetized with pentobarbital sodium by injecting slowly into the ear vein of New Zealand rabbits at the dose of 50 mg?kg-1or intraperitoneally at the dose of 45 mg?kg-1for cats, respectively. Then, all of animals were injected intravenously with Shengmai injections from A, B, and C manufacturers respectively at dose of 1.0 mL?kg-1BW. Arterial blood pressure was immediately measured with an acquisition system for physiological signal measurements, and a statistical analysis was carried out to compare the depressor response of New Zealand rabbits and cats to Shengmai injections from different manufacturers.New Zealand rabbits had good depressor response to 1.0 mL?kg-1Shengmai injections, with more than 3 kPa decrease mean value of blood pressure. Besides, the depressor effects of different Shengmai injections on New Zealand rabbits were different, and the difference was consistent in sixteen testing rabbits. However, the depressor response of cats to Shengmai injections was highly sensitive but easily tolerated.New Zealand rabbit can be used to study the depressor effects of Shengmai injection, and evaluate the quality differences among products.

Shengmai injections; Laboratory rabbits; Cats; Depressor effect

（2019-12-30）

四川省食品藥品檢驗檢測院院立項目（編號：2018-KYYL-007）

黎家敏，男，助理研究員，主要從事藥理毒理學研究，Email：ynchina99@163. com；

榮祖元，男，研究員，主要從事藥理毒理學研究，Email：304240183@qq. com。