JAM-A和b1-integrin在食管癌中的表達及臨床意義#

甘紹印 王忠民 陳志軍 朱德奇李賓趙冬 李云霞 臧丹 尚杰

·臨床論著·

JAM-A和b1-integrin在食管癌中的表達及臨床意義#

甘紹印*1王忠民△1陳志軍1朱德奇1李賓1趙冬2李云霞2臧丹3尚杰3

（1. 新鄉醫學院第一附屬醫院胸外科一病區，河南 新鄉 453000；2. 新鄉醫學院第一附屬醫院呼吸內科二病區，河南 新鄉 453000；3. 新鄉醫學院第一附屬醫院病理科，河南 新鄉 453000）

：探討JAM-A和b1-integrin在食管癌中表達及其臨床意義。選取本院自2012年2月至2013年4月確診的120例食管癌患者，以免疫組化法檢測腫瘤組織及癌旁組織中JAM-A和b1-integrin的表達，進一步隨訪患者術后無疾病生存期，應用Cox模型多因素分析兩種蛋白對食管鱗癌的預后意義。JAM-A和b1-integrin蛋白在食管癌組織中高表達，與癌旁組織對比其表達存在顯著性差異（P＜0.05），相關性分析顯示：JAM-A蛋白與b1-integrin蛋白表達呈正相關（r=0.476，P＜0.05）。Cox模型風險分析顯示JAM-A與b1-integrin蛋白高表達可能提示食管鱗癌預后較差（P＜0.05），且JAM-A是其獨立危險因素。JAM-A與b1-integrin的高表達可能與食管癌不良預后存在密切關系。

食管鱗癌；JAM-A；b1-integrin

管管癌是一種全世界范圍的消化道惡性腫瘤，尤其在我國河南地區、廣州潮汕地區及福建等地為高發區[1]，其患病率及致死率一直在惡性腫瘤中居高。目前治療食管癌的主要方法包括手術治療、放化療。研究表明，即使同一分期的食管癌患者，其臨床預后仍存在較大的差異[2]。因此，除了臨床病理分期外，我們目前仍急需一些其他指標來評估食管癌預后及放化療方案。

連接粘附分子A（Junctional adhesion molecule A，JAM-A）作為細胞免疫球蛋白家族中一員，是一種不依賴鈣離子的細胞粘附分子[3]，在惡性腫瘤發生、侵襲及轉移方面具有重要意義。研究表明，JAM-A通過抑制Akt信號通路降低b-catenin表達，從而抑制腫瘤細胞增殖；同時又可通過調節b1-integrin和GTP Rap1活性促進腫瘤細胞轉移。本文擬應用免疫組化方法研究JAM-A與b1-integrin在食管鱗癌中的表達，分析上述蛋白與臨床病理分期、術后轉移復發的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院自2012年2月至2013年4月進行食管癌切除術，經術后病理標本確診為食管癌的120例臨床資料，進行回顧性分析。其中食管鱗癌98例，腺癌22例，男性76例（63.3%），女性44例（36.7%），年齡35~79歲（平均年齡59.35歲），同時選取癌旁組織（距離腫瘤邊緣3 cm）作為對照組。術后隨訪進展105例，無進展15例，無疾病生存期（Disease free survival, DFS）為4.8~61.30 m，中位DFS為30.26 m。

1.2 方法

1.2.1 隨訪方法

以手術當日為起點，采用電話隨訪2月1次，截止日期為2018年6月25日。

1.2.2 實驗方法

將手術切除標本固定，石蠟包埋后常規切片及并染色。采用鼠抗人JAM-A蛋白單克隆抗體試劑盒（購自北京博爾邁生物技術有限公司），及鼠抗人b1-integrin單克隆抗體（上海艾博生物科技有限公司）。免疫組化步驟：常規抗原修復、封閉，二抗孵育，PBS沖洗3次后顯色。設置一抗為陰性對照，已知陽性食管癌組織切片為陽性對照。

1.3 結果判定

JAM-A、b1-integrin均表達于細胞膜，以膜染色呈黃色或棕黃色為陽性表達，采用雙盲法由2名病理醫師共同評價，評分標準為高倍鏡下隨機選取5個視野，陽性表達細胞數表達≥50%為陽性表達，≤50%為陰性表達。

1.4 統計方法

采用SPSS20.0統計學軟件進行數據分析，其中計數資料以百分數（率）表示，計量資料以均數±標準差表示。兩種蛋白表達情況的差異采用X檢驗；相關性分析采用Sperman檢驗；蛋白與臨床病理特征的關系采用X檢驗，而其與食管癌術后DFS關系采用多因素Cox回歸分析，以上檢驗采用雙側檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 食管癌中JAM-A和b1-integrin表達情況

120例食管癌組織JAM-A陽性表達74例（61.7%），而癌旁組織陽性表達56例（46.7%），兩者差異明顯（P＜0.05）。癌組織中b1-integrin陽性表達72例（60%），明顯高于癌旁組織陽性表達56例（52.1%）（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 食管癌中JAM-A、b1-integrin表達與病理特征的關系

食管癌組織中JAM-A陽性表達在患者性別、年齡、位置等病理特征中無顯著差異（P＞0.05），而在浸潤程度（T分期）、淋巴結轉移（N分期）、臨床病理分期（TNM）及腫瘤的分化程度等病理特征中存在顯著性差異（P＜0.05）。b1-integrin蛋白的表達與JAM-A存在一致性，其表達與臨床特征的關系見表2。

2.3 食管癌中JAM-A、b1-integrin的相關性分析

經Sperman檢驗，JAM-A蛋白表達同b1-integrin蛋白呈正相關（r=0.0.476，P＜0.05）。

表1 JAM-A和b1-integrin在食管癌及癌旁組織中的表達情況（例，n=120）

圖1 JAM-A、b-catenin免疫組化圖片（×200）

（注：A. JAM-A陽性示意；B. JAM-A陰性示意圖；C.b1-integrin陽性示意圖；D.b1-integrin陰性示意圖。）

2.4 JAM-A、b1-integrin表達與食管癌預后的關系

應用多因素Cox比例風險模型分析兩種蛋白及上述臨床病理參數同食管癌預后關系。分析表明，食管癌的浸潤深度、淋巴結轉移數、細胞分化程度及JAM-A、β1-integrin的表達均與食管的不良預后存在密切關系，而與患者性別、年齡、腫瘤位置無明顯相關，見表3。

3 討論

目前對于食管癌術后預后評價，仍舊以TNM分期及腫瘤標志物為主要參考，需一種能夠早期、有效評價食管癌術后預后的方法。JAM在細胞信息傳遞及細胞緊密連接中有重要意義。JAM-A是連接粘附分子蛋白家族的一員，研究表明，JAM-A對不同腫瘤細胞的增殖、遷移有不同表現，甚至截然相反。例如，Kurose等發現JAM-A的表達水平與子宮內膜癌的侵襲性呈反比[5]。

表2 食管癌組織中JAM-A、b1-integrin表達情況與臨床參數的關系

表3 食管癌術后Cox模型多因素分析結果

Gotte等發現乳腺腫瘤細胞的侵襲性與JAM-A的表達水平呈正比例關系[6]。目前關于食管癌中JAM-A的表達水平尚未有明確。本研究結果顯示，食管癌中JAM-A表達水平明顯高于癌旁組織，進一步的Cox比例風險模型表明，食管癌中JAM-A的的表達水平對其預后存在明顯的不良影響。根據Tian等對鼻咽癌預后研究表明，其機制可能是通過Akt信號通路促進上皮細胞間充質化，并可影響一些其他細胞因子表達，從而促進腫瘤細胞的淋巴結轉移、腫瘤細胞分化[7]。

b1-整合素（b1-integrin）是跨膜蛋白整合素家族的一員，能夠將細胞外力學狀態及化學環境變化轉導至細胞內，引起細胞骨架改變，導致細胞極性改變或腫瘤細胞遷移。Mandell等研究發現JAM-A突變體中其細胞增殖明顯較高，并伴有b1-integrin過表達[8]。進一步研究發現，JAM-A能夠通過活化GTP Rap1酶活性來上調b1-integrin表達[9]。因此我們同時檢測了食管腫瘤細胞及癌旁組織中b1-integrin表達水平，結果發現癌組織中b1-integrin蛋白表達水平也明顯升高，且進一步統計相關性分析二者存在正相關性。在生存分析Cox模型中b1-integrin蛋白同JAM-A一樣影響食管癌的預后，因此，食管癌中JAM-A高表達可能通過調高b1-integrin表達存進腫瘤細胞轉移。

綜上，食管癌組織中JAM-A與b1-integrin蛋白高表達對食管癌的預后有著重要意義，其作用機制可能與上調b1-integrin蛋白表達促進食管癌細胞間充質化相關。

1 左婷婷, 鄭榮壽, 曾紅梅, 等. 中國食管癌發病狀況與趨勢分析[J]. 中華腫瘤雜志, 2016, 38(9): 703-708.

2 楊瓊. Ⅲ期食管癌根治術后的療效及復發模式[D]. 2015.

3 Tuncay H, Brinkmann BF, Steinbacher T, et al. JAM-A regulates cortical dynein localization through Cdc42 to control planar spindle orientation during mitosis[J]. Nat Commun, 2015, 6: 8128.

4 Goetsch L, Haeuw JF, Beau-Larvor C, et al. A novel role for junctional adhesion molecule-A in tumor proliferation: Modulation by an anti-JAM-A monoclonal antibody[J]. Int J Cancer, 2013, 132(6): 1463-1474.

5 Kurose M, Kakuki T, Takano K, et al. Junctional adhesion molecule-A in head and neck squamous cell carcinoma [J]. Adv Otorhinolaryngol, 2016, 77(10): 92-97.

6 Gotte M, Mohro C, Koo CY, et al. miR-145-dependent targeting of junctional adhesion molecule A and modulation of fascin expression are asssociated with reduced breast cancer cell motility and invasiveness [J]. Oncogene, 2010, 29(50): 6569-6580.

7 Tian Y, Tian Y, Zhang W, et al. Junctional adhesion molecule-A, an epithelial-mesenchymal transition inducer, corrolates with metastasis and poor prognosis in human nasopharyngeal cancer [J]. Carcinogenesis, 2015, 36(1): 41-48.

8 Mandell KJ, Brian AB, Nusrat A. Junctional adhesion molecule 1 regulates epithelial cell morphology through effects onb1-integrin and Rap 1 activity[J]. Biol Chem, 2005, 280(12): 11665-11674.

9 Streuli CH, Akhtar N. Signal cooperation between integrins and other receptor systems[J]. Biochem, 2009, 418(3): 491-506.

Expression and significance of JAM-A,b1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma#

Gan Shao-yin*1, Wang Zhong-min△1, Chen Zhi-jun1, Cao Ke-xin1, Li Bin1, Zhao Dong2, Li Yun-xia2, Zang Dan3, Shang Jie3

(1. Department of Thoracic Surgery, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 2. Department of Respiratory Medicine, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 3. Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan)

To investigate the expression and clinical significance of JAM-A andb1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).A total of 120 patients with ESCC diagnosed from February 2012 to April 2013 were enrolled in this study. The expression of JAM-A andb1-integrin in tumor tissues and adjacent tissues was detected by immunohistochemistry. The prognostic significance of the two proteins for ESCC was analyzed by the Cox model.The expression of JAM-A andb1-integrin proteins were significantly higher in tumor tissues than that in adjacent tissues (P<0.05). The expression of JAM-A protein was positively correlated with the expression ofb1-integrin protein (r=0.476, P< 0.05). Risk analysis of Cox model showed that high expression of JAM-A andb1-integrin protein may indicate poor prognosis of ESCC (P<0.05). JAM-A was an independent risk factor of ESCC.The high expression of JAM-A andb1-integrin may be closely related to the poor prognosis of ESCC.

Esophageal squamous cell carcinoma; JAM-A;b1-integrin

The promise and challenge of therapeutic genome editing

Doudna JA

Genome editing, which involves the precise manipulation of cellular DNA sequences to alter cell fates and organism traits, has the potential to both improve our understanding of human genetics and cure genetic disease. Here I discuss the scientific, technical and ethical aspects of using CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) technology for therapeutic applications in humans, focusing on specific examples that highlight both opportunities and challenges. Genome editing is-or will soon be-in the clinic for several diseases, with more applications under development. The rapid pace of the field demands active efforts to ensure that this breakthrough technology is used responsibly to treat, cure and prevent genetic disease.

(From Nature, 2020, 578(7794): 229-236.)

（2019-8-20）

河南省醫學科技攻關計劃聯合共建項目（編號：2018020366）

甘紹印，男，主治醫師，主要從事食管癌及肺癌基礎研究，Email：635416612@qq. com；

王忠民, ，男，主任醫師，主要從事胸心外科臨床及基礎研究，Email：shenyuane94@163. com。