新型DBI試劑盒在食品微生物生化鑒定中的應用

吳艷輝，王杰偉，何艷玲

(北京陸橋技術股份有限公司，北京 100123)

病原微生物是食品安全最大的威脅之一。隨著經濟全球化進程的加快，國際食品貿易的迅速增加，食品中病原微生物的準確快速鑒定越來越受到重視[1-4]。已有食品中微生物檢驗主要采用生化鑒定方法[5-8]，該方法操作過程復雜，并具有一定的危險性[9]。基于實際生產的需求，本實驗室研制出一種克羅諾桿菌屬和單增李斯特氏菌干制生化鑒定(DBI)試劑盒，通過標準菌株和樣品分離菌株的鑒定試驗，并與生化管和API 20E細菌鑒定系統比對，驗證其鑒定結果的準確性，以期滿足大量樣品準確、簡便、高效的檢測需求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種

標準菌株：阪崎克羅諾桿菌ATCC29544、ATCC51329，大腸埃希菌CMCC44103、ATCC25922，單增李斯特氏菌ATCC19111、ATCC19115，綿羊李斯特氏菌ATCC19119，均由本實驗室保存。

樣品分離菌株：阪崎克羅諾桿菌疑似菌株14株分離自市售嬰幼兒奶粉；單增李斯特氏菌疑似菌株30株分離自市售乳制品、肉制品及蔬菜。

1.1.2 培養基及試劑

腦心浸出液(BHI)肉湯、大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養基、阪崎克羅諾桿菌生化鑒定套裝及DBI試劑盒、單增李斯特氏菌生化鑒定套裝及DBI試劑盒均由北京陸橋技術股份有限公司提供；API鑒定系統及配套鑒定試劑為法國生物梅里埃公司產品。

1.2 方法

1.2.1 菌株活化

將標準菌株及樣品分離菌株分別接種至BHI肉湯，36 ℃培養18～24 h，使其活化，并轉接至TSA培養基備用。

1.2.2 菌株生化鑒定比對試驗

標準菌株及樣品分離菌株生化管鑒定試驗分別按照各自對應的生化鑒定套裝說明書進行，DBI試劑盒鑒定試驗與API細菌鑒定系統分別按照各自對應的說明書進行。比較3種生化鑒定試驗結果的準確性。

2 結果與分析

2.1 標準菌株的對比試驗

阪崎克羅諾桿菌及單增李斯特氏菌傳統生化管與DBI試劑盒、API生化鑒定條鑒定結果分別見表1和表2。由上述結果可知，在阪崎克羅諾桿菌及其質控菌大腸埃希菌標準菌株鑒定中，DBI試劑盒與生化管對其所有生化項目鑒定結果完全一致，與GB 4789.40—2010《食品微生物學檢驗 阪崎克羅諾桿菌檢驗》判定標準一致；在李斯特氏菌標準菌株鑒定中，培養24 h后，DBI試劑盒鑒定結果與GB 4789.30—2010《食品微生物學檢驗 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗》判定標準一致，而傳統生化管中的鼠李糖與木糖則為假陰性，需繼續培養至48 h才出現陽性結果，表明DBI試劑盒在保證鑒定結果準確的前提下，將鑒定時間縮短了24 h左右。

表1 阪崎克羅諾桿菌生化鑒定結果

注：-表示陰性，+表示陽性，/表示未檢出。表2同。

表2 單增李斯特氏菌生化鑒定結果

2.2 樣品分離菌株的對比試驗

DBI試劑盒與生化管對樣品分離菌株鑒定結果見表3。由表可知，DBI試劑盒與生化管對從樣品中分離出的阪崎克羅諾桿菌疑似菌株鑒定結果完全一致，對單增李斯特氏菌疑似菌株鑒定結果的相符率也較高，達到90%以上，表明DBI試劑盒的鑒定結果準確，可用于食品中致病菌的生化鑒定。

表3 DBI試劑盒與生化管生化鑒定結果的比較

3 討論

本研究研制的DBI試劑盒是將生化鑒定所需的所有生化試劑，經過特殊工藝干制于特制的生化鑒定卡上，接入菌液后培養到一定時間，即可通過顏色變化或滴加試劑后變色來觀察結果。DBI試劑盒將生化試劑進一步微量化，在菌懸液濃度不變的條件下，增加了體系中的菌體濃度，從而加快了反應速度，縮短了檢測時間，尤其是在單增李斯特氏菌檢測中，糖類發酵項目反應時間相對于生化管大約縮短24 h。通過對標準菌株的鑒定試驗，DBI試劑盒準確率達到100%，與生化管同時對從樣品分離出的阪崎克羅諾桿菌和單增李斯特氏菌疑似菌株進行鑒定，兩者相符率分別達到100%和94.1%。綜上所述，本試劑盒操作簡單，對于大批量樣品檢測具有很高的實用價值，該檢測方法耗時短，提高了檢測效率，且準確度高，與傳統液體生化管的鑒定結果基本上完全一致，在食品致病菌檢測中應用前景廣闊。