獼猴桃根結線蟲形態觀察與病原鑒定

舒然　李磊　龍友華　顧桂飛　張竹竹　尹顯慧

摘要：【目的】明確貴州獼猴桃根結線蟲的種類，為獼猴桃根結線蟲病的防治提供理論依據。【方法】從貴州省修文、息烽和大方縣采集感染根結線蟲的獼猴桃植株，利用改良的貝曼漏斗法分離根結線蟲，采用顯微鏡和掃描電鏡對獼猴桃根結線蟲進行形態觀察與測量，結合分子生物學方法對線蟲進行鑒定。【結果】獼猴桃根系被根結線蟲侵染后產生根結或瘤狀物，形成大小不等的根瘤，直徑為0.5～1.0 cm;直徑1.5～2.0 mm的須根受害較重，被侵染的須根產生單個或串生結節狀腫瘤，瘤狀物呈橢圓或近球形。獼猴桃根結線蟲雌蟲的排泄孔至頭端的距離是口針的1倍左右，口針微微向背部彎曲，唇盤呈啞鈴狀，側唇與中唇和唇盤分開，分界明顯;雄蟲唇盤大而圓，比中唇高，中唇外圍圓滑，與唇盤分界明顯。獼猴桃根結線蟲種群與GenBank的南方根結線蟲MK784570、KP234265和KF041336等線蟲的序列相似度達99%。【結論】侵染貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃的根結線蟲為南方根結線蟲（Meloidogyne incognita）。

關鍵詞： 獼猴桃;南方根結線蟲;形態觀察;鑒定;貴州省

中圖分類號： S432.45;S436.634.1? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）12-2971-07

Abstract：【Objective】To clarify the species of kiwifruit root-knot nematodes and provide? reference for the prevention and treatment of kiwifruit root-knot nematodes. 【Method】In this experiment， kiwifruit plants infected with root-knot nematodes were collected from Xiuwen， Xifeng and Dafang in Guizhou， the modified Bayman funnel method was used to isolate root-knot nematodes， and root-knot nematodes were observed and detected using morphological features and molecular biology methods， and identified by molecular biology. 【Result】Root nodules or nodules were formed in the roots of the injured kiwifruit， and nodules of different sizes were formed， with diameters ranging from 0.5 to 1.0 cm. The fibrous roots with diameter at 1.5-2.0 mm were severely damaged， and the infected fibrous roots produced single or serial nodular tumors， and the tumors were elliptical or subspherical. The distance from the excretory hole to the head of the female root-knot nematode of kiwifruit was about oncec as that of the mouth needle， the needle was bent slightly toward the back， the lip disc was dumbbell-shaped， the lateral lip was separated from the middle lip and the lip disc， and the boundary was obvious. The males lip disc was large and round， higher than the middle lip， and the middle lip clearly demarcated from the lip disc. The nematode population had 99% sequence similarity with the nematodes MK784570， KP234265 and KF041336 from GenBank.【Conclusion】The results show that the root-knot nematode infected Xiuwen， Xifeng and Dafang kiwifruit in Guizhou is Meloidogyne incognita.

Key words： kiwifruit; Meloidogyne incognita; morphological observation; identification; Guizhou

Foundation item： Guizhou Science and Technology Support Plan Project（QKHZC〔2018〕2058，QKHZC〔2019〕2406）

0 引言

【研究意義】獼猴桃也稱奇異果，其口感酸甜，富含維生素C，在我國廣泛種植（張安世等，2018）。目前，貴州省獼猴桃栽培面積排名全國第三，僅修文縣獼猴桃種植面積就超過1.0萬ha。隨著獼猴桃栽培區域的擴大，獼猴桃病害發生日益嚴重，其中根部病害以根結線蟲侵害為主（敖禮林和饒衛華，2000），常造成獼猴桃植株的根部腫大呈瘤狀或根結狀，引起地下病根腐爛（劉計權，2014），營養物質運輸通道受阻（郭衍銀等，2004），嚴重降低獼猴桃果實產量及品質。根結線蟲病已成為制約貴州獼猴桃產業發展的主要問題之一。因此，對獼猴桃根結線蟲進行準確鑒定，并采取針對性防治措施，對保障貴州獼猴桃產業健康發展具有重要意義。【前人研究進展】根結線蟲屬雜食性專性寄生蟲（龍海等，2016;王虹云等，2018），1855年首次在英國報道（張燕霞，2011）。目前，在我國不同獼猴桃產區均有根結線蟲發生危害的報道。方炎祖等（1991）報道，侵染湖南獼猴桃的根結線蟲種類主要是花生根結線蟲（Meloidogyne arenaria）和南方根結線蟲（M. incognita），以南方根結線蟲為優勢種群;張紹升等（1993）研究表明，福建建寧獼猴桃根結線蟲為爪哇根結線蟲（M. jaranica）和南方根結線蟲，以爪哇根結線蟲為優勢種群;范學科和黨占平（2007）使用雌成蟲會陰花紋及形態測量對獼猴桃根結線蟲進行鑒定，發現危害陜西關中地區獼猴桃的線蟲為南方根結線蟲。以上研究均采用傳統的形態學特征對獼猴桃根結線蟲進行鑒定。鑒于使用形態觀察與測量鑒定線蟲存在一定誤差，陳文等（2018）結合會陰花紋鑒定和分子生物學手段對貴州省修文縣的20份樣本進行鑒定，結果表明侵染修文縣獼猴桃的線蟲種類為南方根結線蟲;劉晨等（2018）采用形態學及PCR鑒定方法對陜西省周至縣獼猴桃根結線蟲進行鑒定，明確其危害種類為南方根結線蟲。近年來，分子生物學技術快速發展，分子生物學鑒定方法已成為線蟲種類鑒定的重要手段之一（何清聰等，2020），ITS序列分析已應用于黃瓜（黃英凱，2014）、煙草（楊艷梅等，2017）、花椒（曹業凡等，2019）、水稻（呂軍等，2019）和柑橘（何清聰等，2020）等不同作物上根結線蟲的種類鑒定。【本研究切入點】目前，有關貴州獼猴桃受根結線蟲侵染后的根部形態、線蟲形態描述及線蟲危害特征等尚未見詳細報道。【擬解決的關鍵問題】采用顯微鏡和掃描電鏡對貴州獼猴桃根結線蟲進行形態觀察與測量，以分子生物學手段為輔助鑒定獼猴桃根結線蟲種類，并對其危害特征進行描述，以期為貴州獼猴桃根結線蟲病的防治提供理論支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

獼猴桃受害病根采集于貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃基地。將根結癥狀典型的獼猴桃根部沖洗干凈，晾干表面水分。采用改良的貝曼漏斗法分離根結線蟲：先將發病的根部組織切成約1 cm的碎段，用雙層紗布包好后放入有清水的漏斗中，線蟲在趨水性和引力的作用下從獼猴桃根部組織中逃逸出來，并在水中游動，會沉降至漏斗底部末端的橡皮管中;24 h后打開止水夾將止水橡皮管中的水和線蟲引入干凈燒杯，從中吸取5 mL的水樣在3000 r/min離心3 min，倒掉上清液再將底部沉降剩余的線蟲倒入20 mL盛有無菌水的培養皿中，得到分離的線蟲，4 ℃保存備用。

1. 2 獼猴桃發病根部組織觀察

采用次氯酸鈉—酸性品紅染色法（張燕等，2011），褪色完畢后切片置于電子顯微鏡（徠卡DM750，上海孚約商貿有限公司）下觀察、拍照。

1. 3 根結線蟲形態掃描電鏡觀察

用塑料吸管將分離獲得的線蟲轉移至培養皿中用蒸餾水清洗數次，緩慢加熱殺死線蟲后移入4 ℃冰箱存放2 h取出進行固定;再轉移至4 ℃條件下固定24 h，用去離子水清洗5～6次以徹底清除戊二醛，完成后轉移至5%鋨酸中，25 ℃下靜置2 h，用去離子水清洗下線蟲上的鋨酸，將固定好的線蟲依次置于不同濃度梯度的乙醇中脫水20 min。使用環氧樹脂干燥法處理線蟲，鍍膜完成后將線蟲置于掃描電鏡（MERLIN掃描電子顯微鏡，德國ZEISS公司）載物臺上噴金觀察（郭素枝等，2005;段玉璽，2011）。

1. 4 根結線蟲形態鑒定

形態特征鑒定：參照張淑玲等（2019）的方法，先將線蟲加熱殺死并固定，線蟲脫水后制成玻片，然后使用顯微鏡觀察、測量并記錄數據。線蟲雌蟲形態計數測量：觀察線蟲頭部特征，主要記錄指標為體長（L）、最大體寬（W）、口針長度（Stylet）、口針基部球高和寬（Stylet knob height、Stylet knob width）、背食道腺開口至口針基部距離（DGO）和排泄孔至頭端距離（Ex.P.）等值，顯微計數測量采用de Man公式。線蟲雄蟲形態計數測量：觀察線蟲頭部和尾部主要特征，主要記錄指標包括最大體長（L）、最大體寬（W）、體長/體寬（a）、口針長度（Stylet）、口針基部球高和寬（Stylet knob height、Stylet knob width）、背食道腺開口至口針基部距離（DGO）和交合刺長度（Spicule）等值。

1. 5 根結線蟲分子生物學鑒定

在光學顯微鏡下根據形態初步確定為同種線蟲后，將20～30條2齡線蟲參照張喆（2016）的方法提取根結線蟲DNA。利用線蟲rDNA-ITS的通用引物TW81（5'-GTTTCCGTAGGTGAACCTGC-3'）和AB28（5'-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT-3'）進行PCR擴增。PCR反應體系50.0 μL：DNA模板20～50 ng，Taq聚合酶0.5 μL，dNTP 2.0 μL，10× Tap Buffer （Mg2+） 5.0 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各2.0 μL，加ddH20至50.0 μL。擴增程序：95 ℃預變性5 min;94 ℃ 30 s，60 ℃ 25 s，72 ℃ 30 s，進行35個循環;72 ℃延伸8 min。PCR擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后送生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。以MEGA 6.0中的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構建系統發育進化樹。

2 結果與分析

2. 1 根結線蟲侵染后獼猴桃根部癥狀

獼猴桃根系被根結線蟲侵染后產生根結或瘤狀物（圖1），形成大小不等的根瘤，直徑為0.5～1.0 cm，長出瘤狀物的須根部位開始變黑至腐爛。根系洗凈后根瘤狀部位變黃，呈現明顯的畸形生長狀態。直徑在1.5～2.0 mm的獼猴桃須根受害較重，被侵染的須根產生單個或串生結節狀腫瘤，瘤狀物呈橢圓或近球形。根腫瘤有時會長出小根莖，小根莖被侵染后會產生次生根結根瘤（圖1-B）。受侵染的根產生的根結組織早期呈淡黃色（圖1-D），后期變壞死亡呈黑色，且較小的細根容易斷裂后腐爛。

2. 2 根結線蟲侵染后獼猴桃根部解剖形態

獼猴桃健康正常根系（圖2-A和圖2-B）與被侵染根系（圖2-C、圖2-D、圖2-E和圖2-F）組織相比結構發生較大變化，未被侵染的根系發育正常，根的皮層與維管束組織細胞排列整齊，被侵染的根系可觀察到根結線蟲在寄主皮層細胞移動（圖2-E），根結線蟲轉移至維管組織中后繼續危害取食。未被侵染的根系維管組織細胞排列整齊一致，各組織間的界限清晰可見，被侵染根系各組織間的界限模糊不清，且根系維管組織中形成了巨型細胞（圖2-D）。被侵染后發病形成的巨型細胞的細胞質濃厚、多核，發育的細胞隨意排列，嚴重變性;同時，形成的巨型細胞阻隔了植物根系中央的維管組織（圖2-F）。巨型細胞發育成熟后植株根系即出現明顯的結節。部分巨型細胞在后期會出現空洞和衰敗凋亡。

2. 3 根結線蟲的形態描述

從修文縣、息烽縣和大方縣3個獼猴桃種植區共分離到1006個根結線蟲樣品，根據形態初步確定為同種線蟲。獼猴桃根結線蟲雌性線蟲蟲體呈球形、梨形（圖3-A），口針長13～15 μm，錐部微微向背部彎曲，基部呈球形或扁圓形。排泄口在口針基部附近（圖3-B和圖3-D），掃描電鏡下唇區的唇盤稍微隆起，中唇近半圓形（圖3-C）。中唇與唇盤融合形成啞鈴狀，唇區融合或分界明顯（圖3-C）。雌蟲的側區表現不明顯，有一些彎向陰門的線紋。雌蟲的口針較粗，微微向背部彎曲，通常長度20.4～25.6 μm，基部球形，背食道腺開口于口針基部后3 μm處，排泄孔位于食道腺中部（圖3-B和圖3-D）。

雄性線蟲呈蠕蟲形，蟲體粗大、體型較長，蟲體上體環明顯（圖4-A和圖4-B）。掃描電鏡下的唇區中部凹陷，唇盤大而圓，比中唇高;中唇外部圓滑，比唇盤窄，與唇盤之間分界明顯，側器口裂縫狀，位于唇盤兩側下方（圖4-C）;唇環不明顯且不完整;精子呈圓形，交合刺長約30 μm，無交合傘微微腹彎，末端鈍圓（圖4-D）。

2. 4 根結線蟲形態測量結果

由表1可知，雌蟲體長356.6～789.8 μm，體寬318.7～567.6 μm，口針長度12.6～15.7 μm，口針基部球高和寬分別為1.6～2.7和2.7～4.6 μm。背食道腺開口至口針基部距離為2.6～5.3 μm，排泄孔至頭端距離/口針長度的比值為0.7～1.8。雄蟲體長達1567.0～2109.0 μm，a和b值分別為39.34～67.89和8.7～16.8，口針長度17.8～26.8 μm，口針基部球高度和寬度分別為2.4～4.7和4.2～6.9 μm，交合刺長20.9～37.9 μm。以上各形態的測量計算值與南方根結線蟲基本一致。

2. 5 根結線蟲分子鑒定結果

選用線蟲通用引物進行PCR擴增，結果見圖6。目的條帶清晰、明亮，表明rDNA-ITS純度較高，結構完整，大小約1000 bp。

2. 6 根結線蟲rDNA-ITS序列系統進化樹構建

將上述經純化和測序得到的序列（大小為955 bp）提交至NCBI進行BLAST搜尋，獲得與本測序序列相似度較高的17個序列。基于根結線蟲的rDNA-ITS序列使用MEGA 6.0構建系統發育進化樹。由圖7看出，本研究的獼猴桃根結線蟲種群以99%的支持率與GenBank的17個南方根結線蟲種群聚在一個支系上，與南方根結線蟲MK784570、KP234265和KF041336等線蟲的序列相似度達99%。由此可確定本研究采集的侵染獼猴桃的根結線蟲為南方根結線蟲（M. incognita）。

3 討論

獼猴桃當前已作為貴州省精品水果進行大力發展，是農民增收致富的重要經濟作物之一，而種植過程中的病害危害已嚴重威脅其產業發展（常青，2019）。其中線蟲侵害是獼猴桃生產上的主要病害之一，獼猴桃根結線蟲主要危害植株根部，從苗期到成株均可受害。

本研究觀察被線蟲侵染的獼猴桃根部，發現受害的獼猴桃根部產生根結或瘤狀物，形成大小不等的根瘤，直徑在0.5～1.0 cm，與梁朋（2012）的研究結果一致。本研究病原線蟲主要特征為：雌蟲的排泄孔至頭端的距離是口針的1倍左右，口針微微向背部彎曲，唇盤呈啞鈴狀，側唇與中唇和唇盤分開，分界明顯;雄蟲唇盤大而圓，比中唇高，中唇外圍圓滑，與唇盤分界明顯，與Eisenback（1985）、黃英凱（2014）的描述基本相符。

本研究從田間采集獼猴桃根部發病部位經室內分離獲得線蟲，并對獼猴桃根結線蟲進行形態觀察與形態測量，基于rDNA-ITS序列構建系統發育進化樹，結合特異性擴增條帶，明確了貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃園發生的根結線蟲為南方根結線蟲，與范學科和黨占平（2007）、陳文等（2018）的研究結果一致。獼猴桃根結線蟲種類多樣，研究發現，我國獼猴桃上的根結線蟲病主要由花生根結線蟲（方炎祖等，1991）、爪哇根結線蟲（張紹升等，1993）和南方根結線蟲（范學科和黨占平，2007）引起。近年來，貴州從外省大量引進獼猴桃苗木，本研究僅發現了南方根結線蟲，究其原因可能是試驗樣本采集區域僅限于一個基地且樣本數量少。本研究僅從形態學特征和分子生物學手段初步鑒定侵染獼猴桃的根結線蟲種類，至于貴州獼猴桃根結線蟲發生規律、群體分布和侵染機制等方面有待進一步探究。

4 結論

結合形態學和分子生物學方法，明確侵染貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃的根結線蟲種類為南方根結線蟲，并對其形態特征和危害癥狀進行描述，為獼猴桃根結線蟲防治提供了一定理論基礎。

參考文獻：

敖禮林，饒衛華. 2000. 獼猴桃根線蟲病及其綜合防治技術[J]. 中國南方果樹，29（3）： 43. [Ao L L，Rao W H. 2000. Kiwi fruit root nematode disease and its integrated control technology[J]. South China Fruits，29（3）： 43.]

曹業凡，汪來發，王曦茁，徐志倫，李央，姚玲. 2019. 九葉青花椒根結線蟲病的病原鑒定[J]. 植物保護，45（5）： 242-246. [Cao Y F，Wang L F，Wang X Z，Xu Z L，Li Y，Yao L. 2019. Identification of root-knot nematode on Zanthoxylumarmatum var. novemfolius[J]. Plant Protection，45（5）： 242-246.]

常青. 2019. 陜西省獼猴桃根結線蟲病發生現狀[G]//中國植物保護學會.中國植物保護學會2019年學術年會論文集：98-103. [Chang Q. 2019. Current status of kiwifruit root-knot nematode disease in Shaanxi Province[G]//Chinese Society of Plant Protection. Proceedings of the Chinese Academy of Plant Protection 2019 Annual Conference：98-103.]

陳文，孫燕芳，吳石平，李添群，唐靖文，龍海波. 2018. 貴州修文獼猴桃根結線蟲的發生種類與鑒定[J]. 西南農業學報，31（1）： 84-88. [Chen W，Sun Y F，Wu S P，Li T Q，Tang J W，Long H B. 2018. Occurrence status and species identification of root knot nematode endangering kiwifruit in Xiuwen County，Guizhou[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，31（1）： 84-88.]

段玉璽. 2011. 植物線蟲學[M]. 北京： 科學出版社：213-214. [Duan Y X. 2011. Plant nematodes[M]. Beijing： Science Press：213-214.]

范學科，黨占平. 2007. 獼猴桃根結線蟲病的病原鑒定及其防治[J]. 陜西農業科學，（6）： 71-72. [Fan X K，Dang Z P. 2007. Pathogen identification and prevention of kiwifruit root-knot nematode disease[J]. Shaanxi Agricultural Scien-ce，（6）： 71-72.]

方炎祖，羅桂菊，朱曉香，廖新光，王宇道. 1991. 湖南獼猴桃根結線蟲病害研究[J]. 湖南農業科學，（4）： 40-42.[Fang Y Z，Luo G J，Zhu X X，Liao X G，Wang Y D. 1991. A study on the root-knot nematode disease of kiwifruit in Hunan[J]. Hunan Agricultural Sciences，（4）： 40-42.]

郭素枝，章淑玲，陳玉芬，張紹升. 2005. 甘薯莖線蟲的掃描電鏡制樣方法[J]. 福建農業大學學報（自然科學版），34（1）： 43-45. [Guo S Z，Zhang S L，Chen Y F，Zhang S S. 2005. Sampling method of Ditylenchus destructor specimens for scanning electron microscopy[J]. Journal of Fujian Agriculture and Forestry University（Natural Science Edition），34（1）：43-45.]

郭衍銀，王秀峰，徐坤，朱艷紅，鄭永強. 2004. 南方根結線蟲對生姜生長及內源激素的影響[J]. 植物病理學報，34（1）： 49-54. [Guo Y Y，Wang X F，Xu K，Zhu Y H，Zheng Y Q. 2004. Effects of Meloidogyne incognita on the growth and intrinsic hormones of ginger[J]. Acta Phytopathologica Sinica，34（1）： 49-54.]

何清聰，王東偉，張德詠，劉勇，王劍，成飛雪. 2020. 湖南柑橘根結線蟲種類鑒定及特異性PCR檢測[J]. 植物保護，46（1）：179-184. [He Q C，Wang D W，Zhang D Y，Liu Y，Wang J，Cheng F X. 2020. Identification and PCR detection of citrus root-knot nematode in Hunan Province[J]. Plant Protection，46（1）：179-184.]

黃英凱. 2014. 福建省蔬菜基地根結線蟲病病原鑒定及發病規律研究[D]. 福州： 福建農林大學. [Huang Y K. 2014. Pathogen and occurrence regularity of root-knot nematode disease in vegetable bases in Fujian Province[D]. Fuzhou： Fujian Agriculture and Forestry University.]

梁朋. 2012. 番茄嫁接苗對南方根結線蟲的抗性評價及抗性機制的研究[D]. 重慶： 西南大學. [Liang P. 2012. Study on the resistance evaluation of grafted tomato（Lycopersicon esculentum Mill.） seedlings and resistance mechanisms to Meloidogyne incognita[D]. Chongqing： Southwest University.]

劉晨，王晨光，張鋒，陳志杰，李英梅，張淑蓮. 2018. 周至縣獼猴桃根結線蟲種類鑒定[J]. 現代農業科技，（2）：117-118. [Liu C，Wang C G，Zhang F，Chen Z J，Li Y M，Zhang S L. 2018. Identification of root-knot nematode on Actinidia chinensis in Zhouzhi County[J]. Modern Agricultural Science and Technology，（2）：117-118.]

劉計權. 2014. 綿馬貫眾對南方根結線蟲的抑制作用研究[D]. 太原： 山西大學. [Liu J Q. 2014. Studies on inhibitory effect of Dryopteris crassirhizoma against Meloidogyne incognita[D]. Taiyuan： Shanxi University.]

龍海，李芳榮，程穎慧，謝泳桂，李一農. 2016. 根結線蟲多樣性研究進展[J]. 中國植保導刊，36（2）： 22-26. [Long H，Li F R，Cheng Y H，Xie Y G，Li Y N. 2016. Research progress on diversity of root-knot nematodes[J]. China Plant Protection，36（2）： 22-26.]

呂軍，余藝濤，邱立新，李奔奔，謝群生，吳猛香. 2019. 湖南平江縣水稻根結線蟲病發生調查及病原種類分子鑒定[J].中國植保導刊，39（8）：15-19. [Lü J，Yu Y T，Qiu L X，Li B B，Xie Q S，Wu M X. 2019. Survey and molecular identification of rice root knot nematode in Pingjiang County，Hunan Province[J]. China Plant Protection，39（8）：15-19.]

王虹云，李濤，姚建剛，張麗莉，周楊，董泰麗，付傳翠，夏秀波，曹守軍. 2018. 新型雞糞發酵提取液對番茄生長及根結線蟲病的影響[J]. 南方農業學報，49（6）：1130-1138. [Wang H Y，Li T，Yao J G，Zhang L L，Zhou Y，Dong T L，Fu C C，Xia X B，Cao S J. 2018. Effects of a new type of chicken manure fermented extract on growth of tomato and root knot nematode[J]. Journal of Southern Agriculture，49（6）：1130-1138.]

楊艷梅，梁艷，袁紹杰，趙希城，胡先奇. 2017. 云南省部分煙區根結線蟲形態和分子鑒定[J]. 南方農業學報，48（2）： 284-291. [Yang Y M，Liang Y，Yuan S J，Zhao X C，Hu X Q. 2017. Morphology and molecular identification of root-knot nematode in partial tobacco growing areas in Yunnan[J]. Journal of Southern Agriculture，48（2）： 284-291.]

張安世，司清亮，齊秀娟，張中海. 2018. 獼猴桃種質資源的SRAP遺傳多樣性分析及指紋圖譜構建[J]. 江蘇農業學報，34（1）：138-144. [Zhang A S，Si Q L，Qi X J，Zhang Z H. 2018. Genetic diversity and fingerprints of Actinidia germplasm resource based on SRAP markers[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，34（1）：138-144.]

張喆. 2016. 云南煙草根結線蟲的種類鑒定[D]. 廣州： 仲愷農業工程學院. [Zhang J. 2016. Identification of tobacco root-knot nematodes species from Yunnan Province[D]. Guangzhou： Zhongkai University of Agriculture and Engineering.]

張淑玲，李惠霞，徐鵬剛，劉永剛，于洪濤，劉向. 2019. 黑龍江腐爛莖線蟲群體的分離和鑒定[J]. 植物病理學報，49（6）：756-762. [Zhang S L，Li H X，Xu P G，Liu Y G，Yu H T，Liu X. 2019. Isolation and identification of Ditylenchus destructor from Heilongjiang[J]. Acta Phytopathologica Sinica，49（6）：756-762.]

張紹升，林尤劍，高日霞. 1993. 福建獼猴桃根結線蟲病病原鑒定[J]. 福建農學院學報（自然科學版），22（4）： 433-435. [Zhang S S，Lin Y J，Gao R X. 1993. Identification of root-knot nematode species parasitizing Actinidia in Fujian China[J]. Journal of Fujian Agriculture and Fore-stry University（Natural Science Edition），22（4）： 433-435.]

張燕，石紅利，郭愷，鄭經武. 2011. 腎形腎狀線蟲的生活史及繁殖能力[J]. 浙江大學學報（農業與生命科學版），37（1）： 11-16. [Zhang Y，Shi H L，Guo K，Zheng J W. 2011. Life cycle and reproductive capacity of Rotylenchulus reniformis[J]. Journal of Zhejiang University（Agriculture and Life Sciences） ，37（1）： 11-16.]

張燕霞. 2011. 黃瓜漸滲系抗南方根結線蟲病遺傳規律及分子標記研究[D]. 南京： 南京農業大學. [Zhang Y X. 2011. Study on inheritance and molecular markers of resistance to the root-knot nematode（Meloidogyne incognita） in cucumber introgression lines[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University.]

Eisenback J D. 1985. Diagnostic characters useful in the identification of the four most common species of root-knot nematodes（Meloidogyne spp.）[M]// Sasser J N，Carter C C. An advanced treatise on Meloidogyne（Vol I）： Biology and control. Ralergh： North Carolina University Graphics，95-112.

（責任編輯 麻小燕）