參麻益智方的急性毒性實驗研究

劉劍剛劉美霞李 浩孫成成宋博策周麗娟

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級ICR小鼠40只，雌雄各半，體質量(18～20)g，由斯貝福(北京)生物技術有限公司提供，動物合格證號：SCXK(京)2014-0006。中國中醫科學院西苑醫院屏障環境實驗動物室喂養，溫度控制(24～26)℃，相對濕度控制在50%～70%，光照條件(白晝)為每12 h交替。

1.1.2 藥物與試劑 參麻益智方(由人參、天麻、川芎、鬼箭羽組成，比例3∶3∶3∶2)浸膏，生藥含量為2.44 g/g，由中國中醫科學院西苑醫院中藥制劑室制備，試驗前用蒸餾水配制成含生藥濃度2.44 g/mL的藥液。

1.2 方法

1.2.1 半數致死量(LD50)測定 進行LD50測定之前先進行預實驗，按照臨床劑量計算分成若干組，每組4只，以0.2 mL(10 g)的容量給藥，組間給藥濃度以10倍遞增，找出引起動物死亡的藥物濃度。然后進行正式試驗，以ICR種小鼠，雌雄各半，每組10只，根據預實驗確定的最高、最低劑量，分為6組，以公式計算各組劑量并給藥，觀察并詳細記錄動物反應情況，記錄動物死亡分布情況，連續觀察7～14 d，用Bliss統計方法計算LD50值。

1.2.2 最大耐受量試驗 若測不出LD50，則進行最大給藥量測定。將ICR種小鼠，雌雄各半，分為對照組和給藥組，每組20只。對照組給予最大容積生理鹽水一次灌胃，給藥組給予最大濃度、最大容積藥物一次灌胃，連續觀察14 d，記錄動物反應情況，計算最大給藥量(40 mL/kg)，并推算相當于臨床用藥量的倍數。

1.2.3 觀察指標 觀察小鼠形態外觀、行為活動、飲食情況、糞便形狀等，填寫單次給藥毒性試驗觀察記錄表，給藥后4 h內連續觀察，2～14 d時每日上午、下午各觀察1次，給藥前、給藥后7 d、觀察期結束時分別測定體重，麻醉[3.5%水合氯醛溶液0.9 mL/(100 g體質量)]，之后安死術處理動物，常規解剖，對小鼠主要臟器進行大體觀察，對腦組織進行病理制片檢查。動物實驗過程及實驗動物處理方式符合實驗動物倫理的要求，遵循國家科學技術委員會頒布《實驗動物管理條例》的規定。

2 結 果

2.1 半數致死量 給藥后連續觀察7 d，結果無一只動物死亡，給藥后小鼠一般狀態、行為活動、飲食情況、分泌物和排泄物等均未見明顯異常，因受試藥物質量濃度和體積限制，無法測出受試藥物的半數致死量，故進行了最大耐受量測定。

2.2 最大耐受量 給藥后連續觀察14 d，記錄小鼠中毒癥狀和死亡情況，結果給藥組小鼠在給藥后無明顯不良反應及死亡。開始灌胃后，對照組與給藥組小鼠體質總體趨勢一致，在7～9 d、12～15 d給藥組雄小鼠有小幅度的波動，但所有小鼠體質量持續增長，在合理范圍內波動。所有小鼠體質量增長無明顯異常，精神狀態佳，毛色白而有光澤，二便正常。連續觀察14 d后解剖小鼠，各重要臟器肉眼可見無異常。經統計學分析，各平行時點小鼠體質量組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見圖1、表1。

表1 參麻益智方對小鼠體質量的影響比較(±s) 單位：g

3 討 論

參麻益智方由人參、川芎、天麻和鬼箭羽組成，方中以人參為君藥，具有大補元氣、安神增智之功效。天麻為臣藥，具有平肝息風，滋陰潛陽，活血通經之功效。鬼箭羽為佐藥，具有行血通絡，散瘀之功效，使人參益氣養榮而不壅膩。川芎為使藥，兼具引經作用，為血中之氣藥，可載諸藥直入血分，具活血化瘀，行氣之功，載諸藥直入腦竅。全方諸藥合用，共奏補虛益智，平肝潛陽，化瘀通絡之功。

既往文獻報道人參主要活性成分有人參皂苷、人參多糖、人參揮發油等，其中人參皂苷為人參中的主要有效物質，對于神經系統具有興奮、抑制的雙向作用[2]，其毒性報道，主要為關于其胚胎毒性及對新生大鼠心臟毒性的研究[3]。蘇曉梅等[4]匯總分析國內外關于人參皂苷文獻，發現人參皂苷-Rg3具有抗腫瘤、降低化療藥物心臟毒性及腎毒性、反轉腫瘤細胞對抗癌藥物的多藥耐藥性、保護中樞神經系統和心血管系統、抗疲勞、降低血糖、修復創面藥理的作用。吳曉剛等[5]研究180 d慢性毒性試驗結果證實，食用人參未對大鼠血液學指標產生明顯影響。天麻能有效保護細胞凋亡及氧化損傷[6]，在神經衰弱的臨床治療中效果確切[7]，天麻素對于小鼠的急性毒性試驗、亞急性毒性試驗和對犬的亞急性毒性實驗結果顯示無毒性、無致畸和致突變作用，說明天麻素臨床應用安全[8-10]。鬼箭羽的毒性報道研究發現其細胞毒活性[11]和對健康志愿者外周血單核細胞有微弱毒性作用[12]，謝家駿等[13]對由鬼箭羽水提物和黃柏、葛根有效成分提取物混合物的長期毒性觀察實驗發現，其有減少大鼠耗食量、降低膽固醇作用。王相[14]以臨床用量300倍劑量給小鼠，未發現鬼箭羽的急性毒性作用。夏荃等[15]實驗發現低劑量(2 g/kg，相當于臨床正常劑量)川芎水煎液有弱胚胎毒性，對于具體的毒性成分和毒理機制仍有待研究。而鄭旭霞等[16]對活血化瘀類中藥飲片引起的不良反應分析發現，川芎毒性不明顯，其導致的不良反應主要表現在皮膚、消化系統。參麻益智方的組方配伍已具有知識產權[17]，文獻查詢未發現其四味藥配伍的毒性研究，本研究未測出參麻益智方的半數致死量，小鼠在給藥后無死亡，一般狀態、行為活動、飲食情況、分泌物和排泄物等均未見明顯異常，說明參麻益智方藥味配伍是安全的。

參麻益智方用于小鼠灌胃的最大給藥量為生藥97.6g/kg，約為臨床用量的207倍(臨床用量為生藥0.47 g/kg)。一般認為，按照體質量計算，小鼠一天內最大給藥量相當于常人臨床日計量的100倍以上是較安全的[17]。本研究通過灌胃給藥無法測出參麻益智方的半數致死量。在該劑量下，給藥前、給藥后兩組體質量間比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明參麻益智方對小鼠消化吸收功能無顯著影響。給藥組雄小鼠14 d內出現兩次體質量波動，考慮與灌胃(藥液容量)不當影響小鼠消化有關，也有可能與藥物益氣活血的功效有促進排便作用有關[18]，從體質量趨勢線可以看出，小鼠體質量在合理范圍內輕微波動，并逐漸增加。給藥后小鼠精神狀態佳，毛色白而有光澤，二便正常，沒有出現困倦、豎毛、弓背等癥狀，說明參麻益智方沒有神經系統的刺激作用。因此，可以認為參麻益智方的急性毒性較小，在常規劑量下服用是安全的。

本實驗為參麻益智方的急性毒性試驗研究，結果表明參麻益智方未發現不良反應和死亡，這也為隨后開展的慢性毒性試驗及藥效藥理試驗提供了劑量依據。