高效液相色譜-串聯質譜法建立同時測定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認

夏玲玲

摘 ?要：目的 ?研究與分析高效液相色譜-串聯質譜法建立同時測定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認情況。方法 ?采取高效液相色譜-串聯質譜分析方法來同時建立測定肌肉組織中新霉素、多黏菌素B、灰黃霉素、喹乙醇以及其代謝物3-甲基喹啉-2-羧酸，同時采取外標法定量。結果 ?在質量濃度1.0～200.0g/L范圍內，4種藥物均表現出良好的線性關系，且R2均超過0.9980。喹乙醇及MQCA的方法檢出限為0.5g/kg，灰黃霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法檢出限為5.0g/kg，4種藥物在陰性樣品中的加標回收率為82.1%～98.5%。結論 ?采取高效液相色譜-串聯質譜法來進行處理，操作簡單便捷，對結果干擾性較小，可以加以廣泛應用。

關鍵詞：高效液相色譜-串聯質譜法 ?肌肉組織 ?藥物殘留

中圖分類號：X824 ? 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2020）01（c）-0230-02

隨著藥物的濫用，在動物肌肉組織中會殘留很多藥物，目前已經有部分報道了灰黃霉素、喹乙醇、黏菌素以及新霉素等藥物的檢測方法，很多法律法規也對各類藥物的檢測方法進行了規定[1]。該文對高效液相色譜-串聯質譜法建立同時測定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認情況進行研究與分析，現報道如下。

1. 材料與方法

1.1 材料和試劑

試驗樣品選取購買自市場的8份豬肉，4份兔肉以及8份雞肉。試劑選取德國Dr.Ehrenstorfe公司生產的純度>99.0%的MQCA、純度>99.0%的喹乙醇、純度>84.0%的硫酸多黏菌素B、純度>98.0%的灰黃霉素、純度>90.0%的硫酸新霉素標準品。德國Merck公司生產的乙腈以及甲醇。此次試驗均為超純水，同時該實驗使用甲酸為上海安譜實驗科技股份有限公司生產，分析純為廣州化學試劑廠生產。

1.2 儀器與設備

德國CNW公司生產的200mg、6mL HLB固相萃取小柱，德國IKA公司生產的T18高速均質機以及MS3 Basic漩渦振蕩器，美國Agilent公司生產的6490串聯三重四極桿質譜儀以及1260超高效液相色譜儀，昆山市超聲儀器有限公司生產的250W KQ-250DV超聲波清洗儀，美國Millipore公司生產的Milli-Q純水儀，KDC-1044離心機采用由北京中科佳儀科技有限公司生產的儀器。

1.3 方法

1.3.1 配制標準溶液

準確稱取10.0mg5種標準品，放置于100mL的棕色容量瓶中，溶解標準品采用50∶50，V/V10mL乙腈-1%甲酸水溶液，采用乙腈進行定容處理，將5種單標儲備液分別吸取1.0mL，隨后定容至100mL，隨后得到混合標準溶液。在-18℃條件下保存標準溶液。

1.3.2 樣品處理

（1）提取。

首先切碎肌肉組織，隨后將其打碎，混合均勻，將均質后的5.00g樣品放置在塑料離心管（50mL）內，向其內加入提取溶劑10mL，隨后進行渦旋，渦旋時間為1min，在超聲提取10min，離心速度為4000r/min，離心時間為3min，向25mL比色管中加入上清液，隨后進行重復提取，合并2次對上清液進行提取，使用提取溶劑進行定容，需要定容至25.0mL，隨后進行搖勻，待凈化[2-3]。

（2）凈化。

預先將HLB固相萃取柱進行活化，活化采取超純水10mL，甲醇5mL，待完全流出液體后，對固相萃取柱采用5mL超純水淋洗，隨后進行減壓抽干處理，目標化合物采用10mL凈化洗脫液進行洗脫，洗脫完畢后將其放置于15mL離心管內，將洗脫液用氮氣在50℃條件下濃縮至近干。采用1.0mL初始流動相溶解濃縮物，采取0.22m濾膜來進行過濾處理，測定采用HPLC-MS/MS[4-5]。50℃條件下將洗脫液用氮氣濃縮至近干。濃縮物采用1.0mL初始流動相溶解，過濾采取0.22m濾膜，最后采用HPLC-MS/MS進行測定[4-5]。

2 ?結果

2.1 樣品提取和凈化條件的選擇

很多脂溶性的內源性物質存在于動物肌肉組織內，在檢測過程中這些物質會對化合物的相應產生影響，因此將干擾物質采取合適的凈化方式和提取溶劑去除十分必要[6]。

2.1.1 選擇提取溶劑

極性較大的藥物包括新霉素、多黏菌素B和喹乙醇，可以使用極性溶劑進行提取，而極性較小的藥物包括MQCA和灰黃霉素，可以使用有機溶劑進行提取，在酸性條件下多黏菌素B和新霉素具有較高的提取效率。此次實驗結果顯示，喹乙醇、MQCA以及灰黃霉素可以通過單一有機溶劑體系來進行提取，但是提取新霉素以及多黏菌素的效果較差，使用單一的5%甲酸水溶液來提取灰黃霉素幾乎沒有提取效果。

2.1.2 凈化洗脫液的選擇

利用固相萃取小柱凈化提取液，可以有效地去除雜質，同時將基質的干擾減少。此次實驗結果顯示，采用體積分數為20%和50%的乙腈來洗脫雜質，具有較佳的去除效果，但是仍有30%和45%未被洗脫的灰黃霉素殘留，洗脫采用純乙腈洗脫液后，會具有較多的雜質。而采取5%甲酸水-80%乙腈來進行洗脫時，具有較少的雜質，而藥物的回收率均超過80%，因此，最佳的洗脫液為10mL 5%甲酸水-80%乙腈。

2.2 線性方程和檢出限

在質量濃度1.0～200.0g/L范圍內，4種藥物均表現出良好的線性關系，且R2均超過0.9980。喹乙醇及MQCA的方法檢出限為0.5g/kg，灰黃霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法檢出限為5.0g/kg（見表1）。

2.3 回收率

4種藥物在陰性樣品中的加標回收率為82.1%～98.5%。

3 ?結語

采取高效液相色譜-串聯質譜法來進行處理，操作簡單便捷，對結果干擾性較小，可以加以廣泛應用。

參考文獻

[1] 寧霄，金紹明，高文超，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法測定動物源性食品中氟蟲腈及其代謝物殘留[J].分析化學，2018，46（8）：1297-1305.

[2] 周廣運，王桂姬，任皓威，等.超高效液相色譜-串聯質譜法鑒定豬肉的特異性肽生物標志物[J].分析化學，2017，45（2）：205-210.

[3] 李文廷，瑞雨，師真，等.桑椹中11種真菌毒素的檢測分析[J].環境化學，2018，37（1）：185-187.

[4] 周理，鄒宇聰，張佩，等.急性非特異性腰痛的腰肌橫截面積、脂肪浸潤與不對稱性及其臨床意義[J].中國疼痛醫學雜志，2017，23（2）：148-151.

[5] 吳紅然，陳雪曉，宋學琴，等.肯尼迪病一例患者的臨床表現、肌肉病理、基因檢測及其家系遺傳學分析[J].腦與神經疾病雜志，2017，25（2）：107-110.

[6] 周艷芬，王芳煥，王澤嵐，等.串聯雙柱固相萃取-高效液相色譜-電噴霧多級質譜法測定鹽酸二甲雙胍制劑中的鹽酸二甲雙胍及殘留物三聚氰胺和雙氰胺[J].色譜，2018，36（2）：159-166.