非小細胞肺癌患者血漿Cripto-1的水平及臨床意義

池傳珍 徐春華 朱艷梅

Cripto-1(CR-1)是表皮生長因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成員之一，其基因定位在人染色體3P21.3[1]。已經發現CR-1在人類的多種腫瘤中高表達[2-5]，它可以激活PI3K/Akt/GSK-3βc-Src和ras/raf/MAPK信號通路，介導細胞增殖和抑制細胞凋亡[6]。然而CR-1在肺癌患者血漿中的變化情況鮮見報道，我們應用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定了35例正常體檢者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血漿CR-1濃度，探討CR-1與NSCLC之間的關系以及臨床中的應用價值。

資料與方法

一、臨床資料

本次研究中選取2007年1月至2009年12月來我院接受治療的患者為研究對象，研究對象去除資料不全以及不愿意接受調查者。其中NSCLC組共有102位患者經病理組織學確診?；颊吣挲g在35～78歲之間，其中男性52例，女性50例。根據病理類型不同將患者進行劃分，發現42例鱗癌、60例腺癌；低分化癌占比較高，共有48例，其次是中分化癌40例，高分化癌14例。根據肺癌TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期30例，Ⅲ期29例，Ⅳ期30例；根據有無淋巴結轉移可以將患者分為有淋巴結轉移和無淋巴結轉移，其中淋巴結轉移患者62例。良性肺疾病組為同期住院患者40例，男25例，女15例，年齡35～74歲。健康對照組35名，均為門診健康體檢者，男25名，女10名，年齡23～69歲。3組年齡和性別之間的差異P>0.05，表明差異不具有統計學意義(見表1)。本次研究中對患者進行了為期一年的隨訪。

二、檢測方法

均空腹無菌抽取外周靜脈血2 mL，用0.11mol/L枸櫞酸鈉抗凝，3000 r/min離心10 min，收集血漿-70℃冰箱中保存便于日后檢測。收集標本時應排除接受放化治療、手術治療以及其他抗腫瘤治療的患者。通過ELISA法檢測CR-1水平，操作過程應嚴格按照CR-1檢測試劑盒上的說明書進行操作。

三、統計學處理

結 果

一、NSCLC患者和良性肺疾病以及健康對照者血漿CR-1水平比較

這一結果表明NSCLC患者血漿CR-1水平顯著高于良性肺疾病患者和健康對照者(P<0.05)；良性肺疾病和健康對照組之間的差異不具有統計學意義(見表1)。

表1 不同組別血漿CR-1水平

二、NSCLC患者血漿CR-1水平與臨床病理關系

實驗結果顯示NSCLC患者血漿中的CR-1水平和病理類型、患者的性別、年齡以及病理分級之間的差異P>0.05，表明無明顯相關性。相比之下，TNM分期與是否存在淋巴結轉移之間的差異P<0.05，表明存在顯著相關性(見表2)。

三、NSCLC患者血漿CR-1水平與患者生存時間的關系

統計所有患者生存時間，>12個月患者52例，<12個月者50例，其血漿CR-1水平分別為(3.99±2.34)ng/mL和(7.87±3.47)ng/mL，生存時間>12個月CR-1明顯低于生存時間<12個月者(χ2=3.617，P=0.001)，說明NSCLC患者血漿CR-1與患者生存時間密切相關。

血漿CR-1水平對NSCLC患者生存的影響進行單因素和多因素分析(表3)。單因素分析顯示，血漿CR-1水平與患者預后有關(P=0.005)。在多因素分析中，結果顯示血漿CR-1水平是影響NSCLC患者預后的獨立因素(P=0.03)。

表2 NSCLC患者血漿CR-1水平與臨床病理特征的關系

表3 NSCLC患者預后影響因素的Cox多因素回歸分析結果

注：*P<0.05

討 論

CR-1為表皮生長因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成員之一，是從人類的惡性畸胎瘤cDNA文庫中分離出來的188個氨基酸組成的糖蛋白，參與細胞黏附和信號轉導。生理情況下，CR-1參與胚胎的正常發育，在出生后CR-1表達降低，隨著年齡的增長，青春期后CR-1主要存在乳腺組織中，起著促進乳腺組織發育的作用。通過分析人體多種上皮惡性腫瘤后發現，CR-1高表達與腫瘤的發生、發展密切關聯[2-5]。Yoon等[7]報道口腔鱗狀細胞癌中CR-1的表達與其進展、轉移密切相關。Ertoy等[8]報道宮頸癌中CR-1蛋白的過表達與淋巴結轉移密切相關，CR-1蛋白在宮頸癌轉移淋巴結中的表達水平明顯高于原發腫瘤。Liu[5]等的研究結果顯示，CR-1蛋白在食管癌組織中的表達水平與食管癌TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移呈正相關，CR-1表達是食管癌預后的獨立指標。Gong等[9]通過免疫組織化學方法檢測乳腺癌標本中CR-1的表達情況，發現CR-1在乳腺癌組織中的陽性率為 47.5%，CR-1 表達是乳腺癌患者的獨立預后因素。Bianco 等[10]通過對健康志愿者、良性乳腺病變及乳腺癌和結腸癌患者血漿CR-1檢測發現，乳腺癌和結腸癌患者血漿CR-1水平明顯高于良性乳腺病變患者和健康者。徐春華等[11]通過Western blot檢測新鮮NSCLC組織，發現CR-1表達明顯高于癌旁正常肺組織，且肺癌細胞分化越差，CR-1陽性表達越高；該研究還發現NSCLC組織CR-1表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移、TNM分期相關。黃美歐等[12]通過免疫組織化學方法檢測CR-1蛋白在人肺癌組織中的表達，結果證實CR-1蛋白表達與腫瘤淋巴結的轉移、侵襲顯著相關。

本研究采用ELISA法對35例正常體檢者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血漿CR-1水平進行檢測。結果顯示，NSCLC患者血漿中的CR-1水平顯著高于健康對照組與良性肺部疾病組，證明通過檢測CR-1水平有利于早期診斷NSCLC。Xu等[13]的研究結果也證實了這一點，在I/Ⅱ期肺癌患者中，血漿CR-1聯合CEA，與單用CEA相比，可使診斷的敏感性提高近21%，特異性提高95%。NSCLC患者有淋巴結轉移者血漿中CR-1水平明顯高于無淋巴結轉移者；Ⅲ～Ⅳ期患者血漿CR-1水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，說明血漿CR-1水平與NSCLC患者的TNM分期、淋巴結轉移密切相關，因此可以推測血漿CR-1檢測有利于評估NSCLC病情的嚴重程度。而生存時間>12個月患者血漿CR-1明顯低于生存時間<12個月者，則可以初步推斷血漿CR-1檢測對于判定NSCLC的預后也有一定參考作用。進一步的單因素和多因素分析顯示血漿CR-1水平是影響NSCLC預后的獨立因素。

綜上所述，血漿CR-1水平可以用來評估腫瘤發生和轉移，可以作為肺癌檢測和預后的重要指標，有利于為臨床工作者提供參考作用。