探討絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法在產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

唐干平，朱素優(yōu)，曾育英

（惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001）

染色體畸形病變是遺傳疾病中占比較大的一種，此類情況會(huì)導(dǎo)致嬰幼兒智力降低、生長(zhǎng)發(fā)育速度緩慢、胎兒畸形以及器官異常等，部分胎兒還會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)或者不孕不育等，嚴(yán)重威脅著產(chǎn)婦以及胎兒的生命健康，可通過絨毛染色體分析對(duì)患者的基本情況進(jìn)行檢測(cè)和判斷[1]。基于此，共計(jì)抽取1058例患者參與本次研究，其中使用B超引導(dǎo)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的患者236例，早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者822例，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進(jìn)行檢查治療，探究產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測(cè)中絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的應(yīng)用效果，分析產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)時(shí)期絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 共計(jì)抽取1058例患者參與本次研究，患者均于2015年12月-2019年11月入我院進(jìn)行檢查治療，其中使用B超引導(dǎo)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的患者236例，孕周10-14周，平均孕周（12.1±1.2）周；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者822例，孕周5-17周，平均孕周（9.5±1.5）周；患者均無(wú)其他系統(tǒng)功能異常情況；患者均無(wú)藥物或者食物過敏情況；所有研究參與人員以及家屬對(duì)于本次研究以及參與要求均完全知曉且自愿配合。

1.2 方法 所有患者均進(jìn)行絨毛染色體檢測(cè)，兩個(gè)患者患者絨毛標(biāo)本才使用相同的方式進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和染色體制備，①培養(yǎng)方法：使用無(wú)菌生理鹽水對(duì)無(wú)菌絨毛進(jìn)行洗滌，通過顯微鏡對(duì)絨毛組織進(jìn)行挑選，選出高質(zhì)量的絨毛組織，通過手術(shù)刀將其切碎，接種在5 mL AmnioMax-II培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基需要放置在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中，靜置6-7 d之后取出，使用顯微鏡對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)觀察，觀察到梭形細(xì)胞克隆之后方可給予置換液，繼續(xù)2-3 d的培養(yǎng)，如出現(xiàn)多圓形細(xì)胞即可收獲。②G顯帶染色體的制作方式：將0.5 ng/mL的秋水仙素加入培養(yǎng)瓶之中，混合均勻后放在37oC的培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育，連續(xù)孵育2 h之后取出，使用胰蛋白酶對(duì)標(biāo)本進(jìn)行消化，時(shí)間控制在2 min，離心處理后取出上層清液，按照1:1的比例加入0.075 M KC1和1%的檸檬酸鈉混合液，低滲3-5 min之后加入2 mL 3:1 的甲醇和冰乙酸，固定液預(yù)固定30 min后進(jìn)行離心處理，去除上層清液之后制作標(biāo)本片，每管制片1-2張。

1.3 觀察指標(biāo) 詳細(xì)統(tǒng)計(jì)患者絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的檢查結(jié)果，分析產(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)時(shí)期絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 以SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

使用B超引導(dǎo)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的236例患者中培養(yǎng)成功例數(shù)為225例，培養(yǎng)失敗為11例，培養(yǎng)成功率為95.34%，11例培養(yǎng)失敗的患者中5例是由于污染影響，另外6例為細(xì)胞不貼壁生長(zhǎng)；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)822例患者培養(yǎng)成功例數(shù)為738例，培養(yǎng)失敗為84例，培養(yǎng)成功率為89.78%，84例培養(yǎng)失敗的患者中30例是由于污染影響，另外54例為細(xì)胞不貼壁生長(zhǎng)；絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中絨毛培養(yǎng)的成功率高于早孕和早中孕期自然流產(chǎn)中的成功率，經(jīng)計(jì)算χ2=6.930，P=0.008；有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。使用B超引導(dǎo)進(jìn)行產(chǎn)前診斷的236例患者中絨毛染色體異常例數(shù)為24例，異常率為10.17%；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)822例患者中絨毛染色體異常例數(shù)為477例，異常率為58.03%；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)絨毛染色體異常率與產(chǎn)前檢查相比明顯較高，經(jīng)計(jì)算χ2=168.468，P=0.000；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。產(chǎn)前診斷患者的絨毛培養(yǎng)天數(shù)為10-13 d，平均天數(shù)（11.5±1.2）d；早孕和早中孕期自然流產(chǎn)患者的絨毛培養(yǎng)天數(shù)為1-12 d，平均天數(shù)（11.4±1.4）d；經(jīng)計(jì)算t=0.997，P=0.2319；兩組患者絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的培養(yǎng)時(shí)間分組對(duì)比無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

絨毛染色體制備法首次提出于1983年，該制備方法為直接法，在實(shí)際檢測(cè)中主要通過低滲透、消化以及秋水仙素干擾的方式促進(jìn)細(xì)胞的分裂，該檢測(cè)方式在實(shí)際實(shí)施過程中的操作方式比較簡(jiǎn)單，耗費(fèi)時(shí)間比較短，臨床應(yīng)用價(jià)值較高[2-4]。本次研究中，絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中絨毛培養(yǎng)的成功率高于早孕和早中孕期自然流產(chǎn)中的成功率，孕和早中孕期自然流產(chǎn)絨毛染色體異常率與產(chǎn)前檢查相比明顯較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患者絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)法的培養(yǎng)時(shí)間分組對(duì)比無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。可見，絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)的應(yīng)用能夠?yàn)楫a(chǎn)前診斷及早孕和早中孕期自然流產(chǎn)病因檢測(cè)提供相關(guān)參照指標(biāo)，提升臨床診斷準(zhǔn)確性，同時(shí)能夠根據(jù)檢測(cè)結(jié)果了解患者的實(shí)際情況[5-6]。

綜上可知，絨毛細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)在臨床中的應(yīng)用可以作為產(chǎn)前診斷以及流產(chǎn)診斷的標(biāo)志，臨床診斷中需要確保檢驗(yàn)標(biāo)本的新鮮度以及無(wú)菌性，嚴(yán)格按照要求進(jìn)行絨毛細(xì)胞培養(yǎng)，為臨床診斷及治療提供基礎(chǔ)。