利拉魯肽注射液在正常動物及糖尿病模型動物中降血糖作用的評價

王菲，王洪領，姚曦冉，邢銳

（1.通化東寶藥業股份有限公司，吉林 通化 134000；2.北京昭衍新藥研究中心股份有限公司，北京 100176）

1980 年，世界衛生組織（WHO）估計有1.08億人患有糖尿病，在2014年這個數字增加了4倍[1]。國際糖尿病聯盟報告，目前18-99歲成年人的糖尿病患病率約為8.4%，預計到2045年將上升至9.9%[1]。GLP-1受體激動劑可有效降低血糖，并有顯著降低體重和改善TG、血壓、和體重的作用。單獨使用GLP-1受體激動劑不會增加低血糖風險[2]。并有研究報道，在伴有心血管病史或心血管危險因素的2型糖尿病患者中使用，具有有益的作用及安全性[3]。

本研究通過對正常ICR小鼠單次皮下注射不同劑量的利拉魯肽注射液，及對II型糖尿病db/db小鼠及KKay小鼠多次皮下注射不同劑量的利拉魯肽注射液，觀察其降糖作用，并與諾和力進行比較，旨在為其在臨床中的應用提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 正常ICR小鼠（24.3-35.0 g）購自北京維通利華實驗動物有限公司，許可證編號SCXK（京）2012-0001，飼養于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級動物房。

II型糖尿病db/db小鼠（36.4-48.0 g）購自北京大學醫學部，許可證編號SCXK（京）2011-0012，飼養于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級動物房。II型糖尿病KKAy小鼠（30.3-48.3 g）購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證編號SCXK（京）2014-0004，飼養于北京昭衍新藥研究中心股份有限公司SPF級動物房。

利拉魯肽注射液（批號LU12016050012，3 mL:18 mg）和溶媒（批號MLU12016050012）由通化東寶藥業股份有限公司生產，2-8oC保存；諾和力（Victoza，批號EP51492-1，3 mL:18 mg）由諾和諾德生產，2-8oC保存。

主要儀器有：德國羅氏診斷有限公司生產的卓越精采型血糖儀及配套試紙。

1.2 實驗方法

1.2.1 利拉魯肽注射液對正常ICR小鼠非禁食血糖PBG和糖耐量OGTT血糖變化的影響：動物在SPF級動物房適應性飼養后，按照體重采用隨機分組為7組（n=20），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對照組）。每組10只動物于實驗前禁食過夜，自由飲水，尾尖采血，測定空腹血糖FBG（0 h），單次皮下注射給藥，分別在藥后3 h、6 h、24 h進行糖耐量OGTT檢測，在糖負荷前0 min、糖負荷后30 min、60 min和120 min采血，測定血糖。每組另外10只動物單次皮下注射給藥，在給藥后1 h、3 h、6 h、10 h、24 h采血測定非禁食血糖。

1.2.2 利拉魯肽注射液對II型糖尿病db/db小鼠糖耐量OGTT后血糖變化的影響：動物在SPF級動物房適應性飼養后，在分組前檢測空腹血糖并稱重，選擇血糖和體重相近的10只C57BL/6小鼠作為正常對照組，選擇血糖和體重相近的70只db/db小鼠隨機分為7組（n=10），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對照組）。皮下注射給藥，每天給藥1次，連續給藥42 d。D1、D4、D7、D14、D21、D28、D41進行口服糖耐量實驗（OGTT）并計算葡萄糖曲線下面積（G-AUC）。D20進行口服胰島素耐量實驗（ITT）。于給藥后1周內進行攝食量和攝水量測定。

1.2.3 利拉魯肽注射液對II型糖尿病KKAy小鼠糖耐量OGTT后血糖變化的影響：動物在SPF級動物房適應性飼養后，在分組前檢測空腹血糖并稱重，選擇血糖和體重相近的10只C57BL/6小鼠作為正常對照組，選擇血糖和體重相近的70只KKAy小鼠隨機分為7組（n=10），分別為利拉魯肽注射液（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組、諾和力（0.03、0.1、0.3 mg/kg）組及溶媒組（模型對照組）。皮下注射給藥，每天給藥1次，連續給藥42 d。D1、D4、D7、D14、D21、D28、D41進行口服糖耐量實驗（OGTT）并計算葡萄糖曲線下面積（G-AUC）。

1.3 統計學方法 使用統計學軟件SPSS13.0對數據進行處理，以（Mean±SD）來表示。用單因素方差分析（ANOVA）進行統計分析，如果ANOVA 有統計學意義（P＜0.05）且方差齊性，用 LSD test進行組間比較分析。

2 結果

2.1 利拉魯肽注射液對正常ICR小鼠非禁食血糖PBG和OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組比較，利拉魯肽注射液0.03、0.1、0.3 mg/kg 皮下注射后均能夠降低ICR小鼠PBG，與相同劑量的諾和力比較，降低作用和作用特點相似。利拉魯肽在3 h、6 h的OGTT荷糖后G-AUC呈現出明顯的劑量依賴性降低，藥后24 h各給藥組對G-AUC的降低作用出現回落（圖1和2）。

2.2 利拉魯肽注射液對II型糖尿病db/db小鼠OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力組的血糖和G-AUC在各時間點均呈劑量依賴性降低，降低幅度隨時間推移有逐漸減小的趨勢，相同劑量下供利拉魯肽注射液和諾和力組間無明顯差異（圖3）。利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組攝食量和攝水量均低于模型對照組且呈現明顯劑量依賴關系（圖4）。胰島素耐量實驗結果顯示，與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組均出現劑量依賴性顯著降低（P＜0.05），與相同劑量的諾和力比較，降低作用和作用特點相似（圖5）。

2.3 利拉魯肽注射液對II型糖尿病KKAy小鼠OGTT后血糖變化的影響 與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力組的血糖和G-AUC在各時間點均呈劑量依賴性降低，相同劑量下利拉魯肽注射液和諾和力組間無明顯差異（圖6）。與溶媒組相比，利拉魯肽注射液和諾和力各劑量組G-AUC均出現劑量依賴性降低。

3 討論

利拉魯肽是在胰高血糖素樣肽-1（GLP-1，7-37）基礎上進行修飾的產物，是一個長效GLP-1類似物，與天然人GLP-1就有97%的同源性，并可避免被DPP-4酶水解。利拉魯肽降糖和減肥適應證，都已被美國食品藥品監督管理局FDA批準[4]。

GLP-1受體激動劑作用機制：（1）降糖作用機制，包括促進胰島素生物合成和分泌、抑制胰升血糖素分泌、保護β細胞、抑制肝臟葡萄糖生成、抑制食欲、延緩胃排空和胃腸蠕動；（2）減重作用機制，包括增加飽食感、增加能量消耗、作用于胃腸道。利拉魯肽作為新型的2型2型糖尿病治療手段，在臨床上應用越來越廣泛?！吨袊?型糖尿病防治指南（2017年版）》也將其列入二聯降糖治療選擇之一[5]。

本研究中的利拉魯肽注射液在0.03-0.3 mg/kg劑量范圍內能夠降低正常ICR小鼠、II型糖尿病db/db小鼠和KKAy小鼠OGTT后的血糖和AUC，提示其能控制糖尿病患者的餐后血糖，且血糖的降低作用及作用特點，包括起效時間、作用強度和時程等都與相同劑量的諾和力相當。