新生兒血液樣本溶血對血清NSE檢測結果的影響及其校正公式的建立

唐莉莉

（長興縣人民醫院，浙江 湖州 313100）

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集長興縣人民醫院在2015年期間出生時間小于24 h的新生兒并對其血清樣本和資料進行統計，其中男新生兒共44名，女新生兒共28名，共計72名。對起其他不同時間出生的588位新生兒血清的膽紅素進行綜合性的回顧分析來對血清當中膽紅素分布特征進行探索。

1.2 研究方法 使用文齊氏液、氰化高鐵血紅蛋白配置的標準液等材料進行血清分析，使用NSE檢測試劑和配套的全自動化學分析系統對血清當中具體成分進行深入分析，隨后根據吸光度的不同來建立起來Hb標準曲線。

1.2.1 標準曲線 利用TU-1901雙光紫外線設備，其分光度計測量50、100、150、200 g/L Hb標準也在540納米處吸光度（A）值，將A值作為縱坐標，Hb濃度則為橫坐標，獲得標準曲線。采取10分出生時間不超于24 h的新生兒全血樣本混勻以后，從中吸取20 μL加入文齊氏5 mL液體中，搖晃均勻后在15 min測量540納米處A值，利用標準曲線獲得此混合全血的Hb濃度。利用90% Nacl稀釋全血Hb濃度，分別為6、8、10 g/L。并吸取100 μL稀釋液以后，將其加入到文齊氏2.5 mL液體中，搖晃均勻以后在15 min內測量540納米的A值，將A值為縱坐標，Hb濃度為橫坐標，獲得標準曲線。

1.2.2 測定血清中NSE濃度 選擇此次研究主體出生時間不超過24 h的新生兒血液樣本，將2583×g離心5 min作為標準，血清分離，提取上層血清500 μL，將其放置于干凈的試管之內，便于檢測NES濃度；對下層紅細胞進行吸取，并取200 μL將其凍存至管內，凍存溫度控制在-80oC冰箱之內，反復3次。針對已經檢測完畢的血清樣本吸取出300 μL血清，將其放置另一只干凈的試管內，加入經凍融處理后的紅細胞10 μL，搖晃均勻后以2583×g離心5 min為標準，吸取上層血清放在干凈的試管中，對添加凍融紅細胞的進行血清NSR濃度檢測。

2 結果

出生在25-120 h的新生兒血清TB濃度為（164.5±74.4）μmol/L，與出生不超過24 h的新生兒相比（45.7±13.1）μmol/L明顯較高。在臨床上醫師出具NSE檢測醫囑的新生兒已經達到91.70%，且出生時間＜24 h。出生時間不超過24 h新生兒血液樣本有不同的溶血，其樣本溶液程度）≥2 g/L Hb，已經達到61.79%。

3 討論

NSE是一種細胞內的金屬酶，由γ-dimerα-γheterodimer組成，血清NSE檢測對HIE患兒腦損傷的嚴重程度及預后具有重要意義。經實驗，顯示血清NSE濃度的臨界值設為40 mg/L，判斷HIE及HIE是否嚴重，閾值為45.4 mg/L，用以判斷預后。因此，NSE檢測結果的可靠性對HIE的診斷尤為重要。然而，在紅細胞中存在一定數量的NSE。血樣溶血會導致NSE檢測結果的錯誤增加，這可能會影響臨床醫生的判斷，尤其是在血樣不易采集和容易溶血的新生兒中。當新生兒發生生理溶血時，NSE和Hb在體內有自己的代謝模式和半衰期，使得很難評估血清NSE結果與Hb結果之間的關系。尤其是在Hb到膽紅素的代謝過程中。本研究結果表明，新生兒血清結核濃度明顯高于出生時≤24 h的新生兒。這說明新生兒生理溶血時間或Hb代謝成膽紅素的時間可能主要在出生后24 h。

新生兒血清Hb濃度低，如果使用標準HiCN方法，溶血前后A值的差異很小，靈敏度低。因此，此次研究通過對測量方法的改進，有助于提升檢測的靈敏反應，結合新生兒血清Hb濃度建立有關標準曲線。由于中樞神經系統病變，治療窗口時間很短（平均約6 h），因此及時、正確的診斷和治療HIE預后非常重要。因此，有必要建立新生兒溶血標本的NSE檢測結果的校正公式。

總之，應該避免溶血，并且當檢測到血清NSE時丟棄溶血樣品。但是，新生兒標本采集容易發生溶血，反復采血難以避免，容易引起醫患之間的矛盾。因此，對于新生兒溶血樣品，在不能再次采集血液的情況下，可以選擇校正公式來校正NSE檢測結果，以幫助臨床評估新生兒HIE的嚴重程度和預后。