高通量測序在自然流產(chǎn)遺傳學(xué)診斷中的應(yīng)用探討

曹霞

（江蘇省鹽城市射陽縣合德鎮(zhèn)衛(wèi)生院圍產(chǎn)期保健門診，江蘇 鹽城 224300）

自然流產(chǎn)主要指的是妊娠不滿28周且胎兒體重不足2斤自行終止妊娠患者，早期流產(chǎn)主要指的是妊娠12周內(nèi)終止妊娠。調(diào)查研究顯示，自然流產(chǎn)率為14%-38%，其中有90%左右自然流產(chǎn)率發(fā)生在妊娠12周內(nèi)[1]。通過檢測絨毛細胞染色體能夠有效檢測出胚胎染色體異常，而胚胎染色體異常是導(dǎo)致自然流產(chǎn)發(fā)生的主要影響因素，50%以上自然流產(chǎn)是由染色體異常所致。現(xiàn)階段來看，檢測染色體異常的重要手段是：核型分析自然流產(chǎn)絨毛、細胞培養(yǎng)自然流產(chǎn)絨毛。絨毛細胞的培養(yǎng)要求樣本無菌且新鮮，不同實驗室的細胞成功培養(yǎng)率為55%-88%，因此難以得到理想效果[2]。高通量測序具有分辨率高和準確率高等特點，可有效分析出基因圖譜，從而得到準確的基因變化信息，因此利用高通量測序技術(shù)檢測染色體具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院（在2016年5月-2019年3月）搜集的114例孕婦一般資料，平均年齡為（28.8±6.3）歲，平均孕周為（14.2±5.8）周。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)絨毛細胞、分析染色體核型 孕婦實施刮宮術(shù)后，在無菌條件下采集胚胎戎馬標本，常規(guī)培養(yǎng)4-9 d，常規(guī)消化處理細胞，分析3-5個核型。

1.2.2 提取基因組DNA 取冷凍后的流產(chǎn)絨毛組織（10-12 mg），提取基因組DNA，采用分光光度計檢測DNA濃度。

1.2.3 構(gòu)建基因組DNA小片段 將提取的基因組DNA打斷成小片段核酸，將打斷后的基因組DNA作為起始模板，構(gòu)建文庫。采用瓊脂糖凝膠切膠回收方法，選擇合適的片段加以回收。采用磁珠純化方法純化DNA文庫，去除二聚體干擾，得到DNA文庫。

1.2.4 高通量測序 使用高通量測序儀器（型號：HiSeq 2500；生產(chǎn)公司：美國Illumina公司）按照染色體異常分析DNA文庫數(shù)據(jù)量。

1.2.5 信息分析 將高通量測序結(jié)果經(jīng)過信息分析后，將測序數(shù)據(jù)匹配到相應(yīng)染色體上，再通過Z值判斷染色體異常情況。

1.3 觀察指標 分析114例孕婦的自然流產(chǎn)遺傳學(xué)診斷結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 資料分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗或精確概率法。

2 結(jié)果

高通量測序自然流產(chǎn)遺傳學(xué)診斷結(jié)果為：54例正常，所占比54（47.4）；60例異常［45，X；標本降解；14q32.13q32.33缺失片段大小為11.34 Mb；47，XN；47，XN，5p15.33p13.3缺失片段大小為33.56 Mb；5p13.3p13.2重復(fù)片段大小為2.38 Mb；dup(X)；del］（P＜0.05），所占比60（52.6），χ2=6.1252，P=0.0018。

3 討論

自然流產(chǎn)臨床多表現(xiàn)為：其一，胎兒發(fā)育停止；其二，陰道流血日益增多；其三，妊娠物部分或者全部排出。稽留流產(chǎn)主要指的是：部分胎兒死亡但是卻滯留在宮腔內(nèi)無法排出。

自然流產(chǎn)的發(fā)病因素比較多，主要有：（1）解剖因素；（2）內(nèi)分泌因素；（3）感染因素；（4）免疫因素；（5）母體出現(xiàn)全身性疾病；（6）環(huán)境因素等[3]。自然流產(chǎn)細胞遺傳學(xué)相關(guān)研究主要體現(xiàn)在：其一，胚胎染色體異常（染色體數(shù)量異常、染色體結(jié)構(gòu)異常）；其二，夫婦染色體出現(xiàn)異常。胚胎染色體數(shù)目異常表現(xiàn)為三倍體、三體等，染色體結(jié)構(gòu)異常主要包括染色體斷裂、染色體倒置、染色體缺失等。相關(guān)研究資料顯示，胎兒染色體異常在單次流產(chǎn)中起到重大作用，隨著流產(chǎn)次數(shù)的日益增加，胎兒染色體畸變幾率將顯著降低[4]。

隨著分子生物技術(shù)的日益提高，高通量測序技術(shù)和多種芯片技術(shù)應(yīng)用到自然流產(chǎn)遺傳學(xué)診斷中，CMA（染色體微陣列芯片分析技術(shù)）在發(fā)育遲緩和先天畸形疾病診斷中具有顯著效果。將染色體微陣列芯片分析技術(shù)應(yīng)用自然流產(chǎn)絨毛的染色體檢測過程中，相比起傳統(tǒng)染色體核型分析方法可發(fā)現(xiàn)更多的染色體片段的重復(fù)與缺失。高通量測序技術(shù)相比起CMA技術(shù)擁有更高通量與低成本，方法也更為靈活。實際應(yīng)用過程中，高通量測序技術(shù)通過采集母體血壓結(jié)果，繼而排除染色體微陣列芯片分析技術(shù)所帶來的影響。

綜上所述，高通量測序在自然流產(chǎn)遺傳學(xué)診斷中的應(yīng)用效果顯著。