分子診斷技術結合傳統分離方法在致瀉性大腸桿菌檢測中的運用分析

譚寅鳳

（吉林市人民醫院，吉林 吉林 130021）

致瀉性大腸桿菌（DEC）是引起腹瀉的主要致病菌，根據其侵襲性及毒性，臨床將其分為5類，分別為：致病性大腸桿菌（EPEC）、產毒性大腸桿菌（ETEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）和聚集性大腸桿菌（EAEC）。隨著診療技術的不斷提高，將分子診斷技術與傳統的分離方法相結合，能提高致瀉性大腸桿菌引起食物中毒的病原菌檢出率[1]，有利于臨床對癥采取治療措施，提高疾病治愈率，促使患者早日康復。下面對500份糞便樣本實施致瀉性大腸桿菌檢測，采用熒光PCR法聯合傳統分離方法，分析致瀉性大腸桿菌陽性率及各相關病原菌檢出率，具體研究內容如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 2018年6月-10月選取我省幾個具有代表性監測醫院送檢的的500份糞便樣本，均為腹瀉患者。

1.2 試劑與儀器 培養基：GN增菌液；試劑盒：熒光診斷試劑盒購自上海之江生物科技有限公司；儀器：熒光PCR儀，型號為Rotor-gene 6000（Corbett）。

檢測方法：采集的糞便采用GN增菌液，共收集1 mL增菌液，以13000 r/min進行離心處理，時間為2 min，去盡上清，混合入100 μL DNA提取液，置入沸水10 min，以13000 r/min進行離心處理，時間為5 min，取上清，以此作為RT-PCR反應的模板DNA。熒光PCR的反應體系及擴增程度嚴格按照說明書流程實施操作，其程度為，置入37oC環境中2 min，置入94oC環境中2 min，置入93oC環境中15 s轉換成60oC環境中60 s，共循環40次。

2 結果

2.1 500 份糞便樣本病原菌檢出情況 500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%，EIEC為2.40%，ETEC為1.40%，無EIEC500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%，EIEC為2.40%，ETEC為1.40%，無EIEC。

表1 病原菌檢出分布時間

2.2 病原菌檢出分布時間 致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高，為39.10%，其次為7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高，可見6月是疾病的高發期，詳見表1。

3 討論

致瀉性大腸桿菌與普通致病大腸桿菌形態及生化特征無明顯卻別，因此容易出現混淆的情況，只能從血清學角度進區分。食品標準GB 4789公布，致瀉性大腸桿菌銀從血清凝聚方面入手，將國際上常見種類加以分類，確定血清型后實施毒力試驗，但該種檢測方式耗時長且浪費人力物力，病原菌陽性檢出率也不高，不利于病原檢測工作的開展。隨著分子生物技術的發展，其運用到各種疾病的檢測中，熒光PCR法在臨床使用范圍廣泛，將其與傳統分離方法相結合，能快速獲得診斷結果，且靈敏性極高，能提高操作人員工作效率，使其勞動強度降低，簡單省時，具有極高的臨床使用價值[2]。通過本次研究結果可知500份糞便樣本，致瀉性大腸桿菌檢出95份，檢出率為19.00%，各種病原菌檢出率EPEC最高，為8.20%，其次為EAEC，7.00%；致瀉性大腸桿菌6月份檢出率最高，為39.10%，其次為7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份檢出率最高，可見6月是疾病的高發期，滿足腹瀉病的流行病學特點。

綜上所述，采用熒光PCR法聯合傳統分離方法檢測致瀉性大腸桿菌準確率高，其次，EAEC及EPEC是致瀉性大腸桿菌的主要病原菌。