Rh陰性無償獻血者表型分布調查及意義研究

孔曉紅

（新疆阿勒泰市地區阿勒泰地區中心血站，新疆 阿勒泰 836500）

在人類多態性血型系統中Rh血型系統較特殊，位居ABO血型系統之后。極易出現新生兒溶血病、溶血性輸血反應等情況[1]。D抗原屬于Rh系統中十分重要的抗原。紅細胞表面存在D抗原，檢測為Rh陽性，如不存在D抗原，檢測為Rh陰性。獻血者Rh表型和陰性頻率經檢測，形成并完善Rh稀有血型內容，針對同種抗體采取預防方法，有效的保證臨床供血質量[2]。在相關研究中，針對稀有血型進行篩選，并建立相關滿足阿勒泰地區的稀有血型庫，進而將面臨的稀有血型不足、不良輸血反應等相關問題予以解決，將輸血效果予以提升。

1 數據與方法

1.1 基本數據 在2019年1月-2020年1月期間選取127例Rh陰性無償獻血人員，其中男性患者有89例，女性患者有28例，年齡選自18-60歲，年齡均值為（48.54±2.15）歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑為單克隆抗A抗B血型定型試劑、人ABO血型反定型為紅細胞，使用上海血液生物制藥有限公司生產的試劑；RhD血型、ABO檢測卡主要為長春博迅生物技術有限責任公司生產；抗D（IgM/IgG）是加拿大Dominion公司生產和德國BIO公司生產；抗c、抗C、抗e、抗E等單克隆抗體和多特異抗人球蛋白試劑均屬于上海血液生物制藥有限責任公司提供；使用北京金豪制藥股份有限公司生產的血型鑒定和不規則抗體篩查質控品。

1.2.2 儀器 使用湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司生產的cence TDZ5-WS儀器進行檢測；使用江蘇新康醫療器械有限公司生產的37oC和56oC電熱恒溫水浴箱；使用日本奧林巴斯生產的CHK型雙目生物顯微鏡

1.2.3 檢驗方法 檢測無償獻血者Rh血型：使用加拿大Dominion公司生產和德國BIO公司生產提供的抗-D，使用上海生物科技有限公司生產的抗-A、抗-B標準血清，抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e以及抗人球蛋白；使用cence湘儀TDZ5-WS離心機輔助檢查。

表1 Rh陰性表型分析

篩選和確認RhD陰性：使用微量板鹽水法初篩所有標本，需將濃度為3%的被檢紅細胞懸液與單克隆IgM抗-D試劑，離心使用平板離心機，觀察離心結果，針對不凝集人群，將其判定為RhD陰性。陰性標本主要采取2種單克隆IgG抗-D試劑檢測間接抗人球蛋白試驗。在37oC下孵育半小時，將濃度為3%的50 u和100 u抗-D被檢紅細胞混合，并使用生理鹽水對其進行洗滌4-5次，加入100 u抗人球蛋白，觀察離心結果。對于凝集的患者確診為弱D，對于不凝集的患者確認為IAT陰性[3]。

利用試管法對RhCcEe抗原檢測：利用4支干凈試管，并對其進行詳細標記，分別為抗-C、抗-次、抗-E、抗-e，取1滴相應的抗血清試劑分別放在每個試管中，1滴被檢人員的紅細胞懸液，濃度為2%-5%，將其充分混勻，并采取及時處理，離心時間在15 s左右，重新懸浮細胞扣，觀察凝集反應，紅細胞凝集人員稱為陽性，其紅細胞中存在相應的抗原，針對紅細胞不凝集人員，需在37oC之下對其進行孵育，孵育時間為15 min，并離心15 min，對其懸浮細胞扣凝集反應進行觀察，如紅細胞一直不凝集，定為陰性，證實無相應抗原存在，相反存在抗原。

1.3 判定指標 對其進行正規試驗，有效的鑒定Rh陰性無償獻血者的表型，并使用微板法診斷RhD，使用間接抗球蛋白試驗確認Rh（D）陰性確認試驗。檢測IAT，并明確RhD陰性情況，行常規血清學方法診斷，ABO血型、RhCcEe抗原情況。

2 結果

200 例Rh陰性無償獻血人員，其中60例ABO血型中包含16例A型（26.67%）、19例B型（31.67%）、17例O型（28.33%）、8例AB型（13.33%）；13例RhCcEe表型包含6例ccdee型（46.15%）、3例Ccdee型（23.08%）、2例ccdEe型（15.38%）、1例CCdee型（7.69%）、1例CcdEe型（7.69%）。見表1。

2 討論

Rh血型系統存在D、C、c、E、e抗原，其中免疫原性較強的抗原為D，RhD抗原需依照表位數量和質量進行不同區分，主要表現為正常、D弱、D部分、D、DEL。其中DEL、弱D等均可造成免疫應答，進而出現同種抗-D，對供者的Rh血型進行準確測定，將同種免疫予以避免[4]。

Rh血型研究逐漸加深，Rh表型屬于基因分型技術，與血清學分型比較，其優點為操作簡單，不需要采取特殊儀器和設備，在輸血前檢查工作中具有重要意義。Rh表型檢測的最終結果為制定合適的輸血方法，對獻血者定型檢測時，需使用不同來源的抗-D試劑，盡最大可能檢驗出弱D抗原，防止Rh陰性受血者攝入此類血液。

綜上所述，在輸液工作中，對Rh陰性獻血者血清學表型進行有效調查，防止出現相應的溶血反應，將血液供需矛盾予以解決，為臨床用血提供有效證據。