高效液相色譜法分析遵義引種的栝樓籽游離氨基酸含量

梁光平，楊俊，陳榮華，劉亮，丁麗娜，萬路平，陳東林*

(1.遵義醫藥高等專科學校 藥學系，貴州 遵義 563006；2.貴州省野生藥用植物資源持續利用協同創新中心，貴州 遵義 563006；3.遵義市農業農村局，貴州 遵義 563000)

栝樓籽是葫蘆科植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)的成熟干燥種子，又稱瓜蔞子、吊瓜子。性甘、寒，歸肺、胃、大腸經，具有潤肺化痰，滑腸通便的功效[1]。在江浙地區，炒熟的栝樓籽也作為休閑品嘗的時尚禮品受到人們的喜愛，屬于新興的藥食同源品種。由于栝樓籽資源需求量越來越大，本課題組前期從浙江紹興引進5個品種的栝樓籽到貴州遵義進行育苗、栽培，并通過原產地與引種地栝樓籽所含藥效成分、微量元素、重金屬，以及總蛋白、多糖、脂肪等營養成分的分析，初步優選出其中的2號栝樓籽(越蔞2號)為適宜在貴州遵義栽培的品種[2-4]。為進一步探討該品種在貴州遵義栽培的可行性，本研究在前期研究的基礎上，對引種地越蔞2號及其原產地種子16種游離氨基酸的含量進行了分析比較。現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

原產地越簍2號栝樓籽由浙江省紹興市農業科學研究院提供，將該種子引種至貴州省遵義市，經過育苗、栽培、采收加工和干燥等工序即得引種地栝樓籽。

安捷倫公司16種氨基酸混合對照品，包括苯丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、絲氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、組氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸。異硫氰酸苯酯、三乙胺、乙腈、醋酸、正己烷等試劑均為分析純，未經進一步純化處理直接使用。

液相色譜系統(LC-2030，日本島津公司)，超聲波清洗儀(QTSXR10260，天津瑞普生物技術股份有限公司)，原位冷凍干燥機(SCIENTZ-100F，寧波新芝生物科技股份有限公司)，電子天平(ATY224，日本島津公司)，超純水儀(WP-UP-WF-30，四川沃特爾水處理設備有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 供試液的制備

游離氨基酸樣品溶液的制備：精密稱取引種地栝樓籽粉末1.0 g，加水20 mL浸泡2 h后，超聲提取1 h，抽濾，濾液采用冷凍干燥法進行干燥，加水定容至10 mL備用。

樣品衍生：參照文獻[5]的方法并稍作修改，吸取樣品1 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，從中取500 μL稀釋后置于具塞試管中，加入異硫氰酸苯酯的乙腈溶液250 μL，三乙胺-乙腈溶液250 μL，搖勻，室溫放置1 h后，加入50 μL醋酸，搖勻。

萃取凈化：向上述衍生后的溶液中加入1.0 mL正己烷，渦旋混合器振蕩1 min，靜置分層后，棄去上層正己烷溶液，重復此操作2次，合并下層溶液，用0.45 μm濾膜過濾，濾液用于液相色譜測定。

原產地栝樓籽和16種氨基酸混合對照品溶液按照相同的方法進行處理。以不加樣品的溶液空白為對照。

1.2.2 色譜條件

PhenomenexTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動相A(無水硫酸鈉+三乙胺混合水溶液)與流動相B(甲醇-乙腈-水)根據文獻[5]的方法進行配制。檢測波長為254 nm，進樣量10 μL，柱溫30 ℃。

2 結果與分析

對引種地和原產地栝樓籽的氨基酸成分進行比較，結果如表1所示。2個樣品都檢測出了16種游離氨基酸，引種地與原產地栝樓籽游離氨基酸相對含量均超過5.0%的有脯氨酸、精氨酸、谷氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸等7種，其中以脯氨酸的相對含量最高，均超過了30%。2種栝樓籽樣品中16種氨基酸的相對含量基本一致。引種地栝樓籽必需氨基酸占總氨基酸的21.92%，原產地的占20.77%，兩者百分比也基本接近。在引種地栝樓籽中，有13種游離氨基酸的含量高于原產地栝樓籽樣品，丙氨酸、異亮氨酸、脯氨酸的含量低于原產地栝樓籽。其中，脯氨酸的相對含量降低最明顯，下降了2.94百分點。

表1 引種地與原產地16種游離氨基酸含量

注：*為必需氨基酸，含量變化為引種地相對含量減去原產地相對含量。

3 小結

藥用植物引種既保護了瀕危植物，又確保了藥用植物可持續利用，還在一定程度上解決了由于產地局限造成的資源緊張[6]。本文研究的栝樓籽是從浙江紹興引種至貴州遵義，屬跨域引種，該引種方式具有較強的探索性。同時也對引種研究者在評價引種藥材質量方面提出了更高的要求。引種地栝樓籽16種游離氨基酸的相對含量與原產地栝樓籽的含量基本一致，說明在貴州遵義引種栽培的栝樓籽與原產地區的差異不明顯，表明越蔞2號栝樓可以在貴州遵義地區進行大量栽培。