凍精制作工藝流程

方焱秋，汪雪燁，顧達夫

長春新牧科技有限公司，吉林長春 130000

1 稀釋液的配制

1.1 自配稀釋液：第一液：蒸餾水100 mL、檸檬酸鈉2.97 g，卵黃10 mL。第二液：取配好的第一液41.75 mL，加入果糖2.5 g，甘油7 mL。配置好的稀釋液，每100 mL加青霉素5～10萬U，鏈霉素5～10萬U。

1.2 進口稀釋液根據稀釋液說明進行配制。

2 器械的清洗和消毒

玻璃器皿使用前(或新購置的)，用自來水浸泡洗滌時先在加有洗滌劑的溫熱溶液中進行刷試，然后用流水反復沖洗3次以上，直到干凈為止，最后用蒸餾水沖洗，直至器皿光亮，無水滴附著。

將清洗干凈的玻璃器皿放入鼓風干燥箱，溫度設置為160 ℃，干燥箱達到160 ℃后恒溫2 h，自然冷卻后待用。

檢查精液的載玻片和蓋玻片，用水沖洗干凈后，浸泡于75%酒精后，用柔軟的布擦試干凈備用。

塑料細管、指拇管、吸頭、紗布袋、膠塞、細管用冷凍架紫外線消毒30 min后方可使用。

3 采精前的準備

3.1 各種儀器預熱調試，達到所需溫度和最佳狀態。

3.2 凡是接觸精液的器械均應放在33～35 ℃恒溫箱中，配置好的稀釋液應放在32～34 ℃恒溫水浴鍋中備用。

4 采集精液的處理

4.1 外觀檢查

主要是觀察精液有無異常現象：如血精、膿精、異物等，不正常精液棄掉。

4.2 精液量

分為測量法和稱量法兩種。

4.2.1 測量法：集精杯先通過儀器校對后，直接讀取毫升刻度數。

4.2.2 稱量法：通過稱重確定精液的量，按照精液的比重（1.04）換算成毫升。本方法是對精液的總量通過稱重確定，比目測集精管刻度確定精液的總量更為精確。

4.3 密度測定

通過專用窗口將采集的精液傳遞入精液處理室后，使用密度儀來檢測精液的密度值。

4.4 鏡檢活力

用移液器取精液中段一小滴精液置于載玻片上，加上蓋玻片，將載玻片放置在38 ℃恒溫裝置的相差顯微鏡上，通過電視熒光屏放大500倍的圖像來判定活力，鏡檢合格者方可進行下一步的稀釋。

4.5 記錄

及時記錄牛號、采精量、精子密度、精子活力、可制作細管數和所加稀釋量等有關數據。

5 稀釋

根據原精量、密度、活力、預測凍后活力等，確定稀釋液加入量。稀釋方法：用量筒先取精液的三倍稀釋液，等溫、沿集精杯壁傾斜，緩慢沖洗至少3次，至稀釋瓶中，降溫20 min后，再加入剩余稀釋液量，緩慢輕輕搖勻后，送至封裝機封裝。

6 封裝

將稀釋好的精液放在20 ℃實驗室操作臺上用噴墨打印一體機進行細管分裝操作。該設備自動化程度高，并且對細管精液的衛生質量保證極為有利。

7 平衡

將分裝好的細管精液放置于不透光的塑料盒內，然后把塑料盒放入4 ℃低溫平衡柜中平衡3～4 h。并在平衡柜邊沿蓋上毛巾，避免強光進入低溫平衡柜內。

8 精液冷凍

8.1 上架：將平衡后的細管精液，上架碼放，同時進行計數。碼放時注意細管擺放的方向一致，棉塞封口端靠近操作者，便于裝入指拇管。

8.2 冷凍：將冷凍機調至-120 ℃，將風扇轉速調至70，待冷凍機溫度降至-120 ℃時，持續5 min，風扇轉速調至30后，把以排滿待凍細管的架子，迅速放入冷凍機內蓋嚴蓋子，將風扇轉速調至70，溫度達到-120 ℃時，冷凍8 min。

9 解凍

把水浴鍋加熱至38 ℃穩定后，將冷凍后的細管精液迅速浸泡入38 ℃水中并晃動，待完全解凍后立即取出，用紗布或吸水紙擦干水珠，進行顯微鏡下檢測，活力判定在35%以上保留。

10 分裝

按包裝要求，每袋100支，填寫紗布袋標簽信息，快速包裝，包裝好的細管精液放入液氮罐中儲存，設專人保管，每周定時加氮。

11 整理計錄

生產結束后，按品種、牛號、生產量整理好原始記錄，填寫生產記錄上報，原始記錄存檔。

12 出庫

將一周生產的凍精，通過質量、數量檢查，與銷售人員通過核對后，辦理交接手續。

（注：生產技術規程按GB 4143-2008 NY/T 1234-2006 GB/ T 30396-2013執行）