膿毒癥患者血清lncRNA IFNG?AS1的表達及臨床意義

吳斌 梁文啟 王美堂

上海長海醫院急診科（上海200082）

膿毒癥是一種由感染引起的全身炎癥反應綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）［1-3］。我國膿毒癥的發病率高，病死率也高［4-5］。雖然抗生素、血管活性劑和腎透析在膿毒癥治療中的應用使疾病預后得到了極大改善，但膿毒癥的病死率仍較高［6-7］。因此，在膿毒癥中尋找新的有效的生物學標記物，對于提高診斷敏感性、監測疾病進展和改善預后是必要的。

研究表明，通過調控炎癥相關基因的表達，多種lncRNA參與了對微生物感染的急性炎癥反應［8］。而且，血清lncRNA ITSN1?2［9］、lncRNA NEAT1［10］和lncRNA ZFAS1［11］已被發現可作為生物學標志物用于膿毒癥診斷及評估疾病嚴重程度和患者預后。XU等［12］報道循環lncRNA IFNG?AS1的表達與冠狀動脈疾病患者疾病風險增加、疾病嚴重程度增加和炎癥因子升高相關，然而IFNG?AS1在膿毒癥中的作用尚不清楚。因此，本研究基于以往對IFNG?AS1相關研究，進一步探究IFNG?AS1在膿毒癥患者血清中的表達，了解其表達的意義及相應的臨床應用價值。

1 資料和方法

1.1 樣本采集 本研究共采集了70例膿毒癥患者和60例健康對照者（HC）的外周血并分離血清，樣本均在患者入院后24 h內采集。本研究由本院研究倫理委員會批準，所有參與本研究的研究對象均簽署了知情同意書。

1.2 血清RNA提取及qRT?PCR 血清IFNG?AS1的表達采用qRT?PCR實驗進行檢測。血清樣品中的RNA使用Trizol LS試劑（Invitrogen）提取。逆轉錄反應和qPCR反應分別采用PrimeScript RT Reagent Kit試劑盒（Takara）和TB Green Fast qPCR Mix試劑盒（Takar）進行。引物序列，IFNG?AS1?F：5′?AAACGCTGGAGGAGAAGTCA?3′，IFNG?AS1?R：5′?GCCCCTCCAGGTCTAAATAA?3′；GAPDH為 內參，GAPDH?F：5′?GAGTCAACGGATTTGGTCGT?3′，GAPDH?R：5′?TTGATTTTGGAGGGATCTCG?3′。

1.3 炎性細胞因子檢測 血清炎性細胞因子TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8和IL?10的濃度使用酶聯免疫檢測試劑盒（R&D公司）測定。

1.4 統計學方法 數據采用SPSS 20.0軟件對統計分析，結果以均數±標準差表示。組間比較使用t檢驗，采用Spearman法進行相關性分析，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 基線資料比較 膿毒癥患者與健康對照者的性別、年齡和BMI差異無統計學意義（P>0.05）。膿毒癥患者APACHEⅡ評分均值為（15.76±6.83）。見表1。

表1 膿毒癥患者與健康對照者臨床因素比較Tab.1 Comparison of clinical factors between sepsis patients and healthy controls M（P25，P75）

2.2 膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達及作為診斷標志物的價值 qRT?PCR檢測發現，膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達明顯高于健康對照者（圖1A，P＜0.05）。ROC曲線結果表明IFNG?AS1的對于診斷膿毒癥具有較高價值（圖1B，P＜0.001）。AUC=0.780，約登指數最大為0.460，此處敏感度和特異性分別為74.3%和71.7%。因此，IFNG?AS1有作為診斷膿毒癥的血清標志物的潛力。

圖1 膿毒癥患者和健康對照者血清IFNG?AS1表達及ROC曲線Fig.1 Serum IFNG?AS1 expression and ROC curve of sepsis patients and healthy controls

2.3 IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分、CRP和炎性細胞因子的相關性 相關性分析發現，IFNG?AS1的表達與APACHEⅡ評分顯著正相關。同時，IFNG?AS1的表達與炎癥標志物CRP及炎性細胞因子TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8呈正相關，而與IL?10呈負相關。見表2。

表2 IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分、CRP和炎性細胞因子的相關性分析Tab.2 Correlation analysis of IFNG?AS1 expression with APACHEⅡscore，CRP and inflammatory cytokines

2.4 IFNG?AS1表達對膿毒癥患者預后的預測價值 70例膿毒癥患者中，有49例患者生存，21例患者死亡。死亡患者的IFNG?AS1表達顯著高于生存患者（圖2A）。ROC曲線結果表明IFNG?AS1可以作為區分膿毒癥生存患者和死亡患者的標志物（圖2B，P＜0.001），AUC=0.763，約登指數最大為0.374，此處敏感性和特異性分別為90.5%和46.9%。

3 討論

目前研究［13-18］表明，長非編碼RNA參與膿毒癥病理過程，包括NEAT1、ZNFX1、MALAT1等。本研究表明，膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達高于對照者，并且ROC曲線分析顯示IFNG?AS1對于診斷膿毒癥的最高敏感度和特異性可高達74.3%和71.7%。筆者認為IFNG?AS1可作為一個很好的血清標志物在臨床上用于膿毒癥的診斷。

圖2 膿毒癥生存患者和死亡患者血清IFNG?AS1表達及ROC曲線Fig.2 Serum IFNG?AS1 expression and ROC curve of survival and death patients with sepsis

此外，本研究通過相關性分析發現，血清IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分和CRP、TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8呈正相關，而與而與IL?10呈負相關。APACHEⅡ評分為急性生理與慢性健康評分，是對疾病嚴重程度的評估［19］。CRP為感染性炎癥標志物，TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8為促炎細胞因子，IL?10為抗炎細胞因子［20］。因此，血清IFNG?AS1水平可用于評估膿毒癥的嚴重程度及機體的炎癥反應狀態。

在膿毒癥患者中，死亡患者血清IFNG?AS1的水平明顯高于生存患者，ROC分析顯示IFNG?AS1表達能夠區分死亡患者者和生存患者。此結果說明IFNG?AS1對于膿毒癥患者的預后具有較好的預測價值。本研究的新穎之處在于發現了可作為膿毒癥血清標志物的新基因——IFNG?AS1，且分析了其與臨床因素的相關性。本研究仍有不足之處，未研究IFNG?AS1高表達的機制及其在疾病進程中的作用，這也是下一步的研究方向。

綜上，在膿毒癥患者中，血清IFNG?AS1表達升高，可作為診斷膿毒癥的潛在生物學標志物；IFNG?AS1的表達水平與疾病嚴重程度、促炎細胞因子的表達以及疾病的預后相關。