獼猴桃真菌性軟腐病的發生規律及綜合防治技術*

李 黎，潘 慧，鄧 蕾，李文藝，馮丹丹，鐘彩虹

（中國科學院植物種質創新與特色農業重點實驗室，中國科學院武漢植物園，中國科學院種子創新研究院，中國科學院獼猴桃產業技術工程實驗室，武漢 430074）

獼猴桃富含維生素和礦質元素，被譽為“水果之王”[1]。中國是獼猴桃屬植物的原產地和獼猴桃栽培品種的發源地，目前栽培面積達26.6萬hm2，超過意大利、新西蘭及智利等國的種植面積總和，年產量占全球總產量的57%，已成為世界最大的獼猴桃生產國[2]。然而，隨著產業的迅猛發展，獼猴桃病蟲害問題日益突出，尤其是貯藏及銷售期間發生的首要病害—果實腐爛病，給獼猴桃產業造成了重大的經濟損失。

1982 年，日本首次在德島發現了獼猴桃果實腐爛病[3]，隨后該病在新西蘭、韓國、中國、智利及意大利等國陸續發生并暴發，嚴重威脅了世界獼猴桃產業的健康發展[4-5]。感病果實在貯藏前期完全無癥狀，后熟期逐漸顯現癥狀，發病部位（果蒂、果側、果臍）表皮凹陷變軟，出現圓形或橢圓形褐色病斑，病部中心果肉呈乳白色，病健交界處果肉呈黃綠色透明水漬狀。縱剖病果可見病變組織呈圓錐狀向果肉內部擴展，6～10 d 后果實完全腐爛且散發酸臭味[6]。感病果實口感風味大大降低，易使消費者誤認為是該品種或該地區獼猴桃的品質問題，直接影響獼猴桃銷售和出口，給栽培農戶及銷售廠家造成重大經濟損失[7-8]。

2015—2017 年，筆者首次對我國11 個獼猴桃主產區進行了軟腐病調研及病原菌鑒定，發現各園區平均發病率40%～50%，我國獼猴桃產業正面臨果實軟腐病的嚴峻考驗[9]。本文主要針對獼猴桃軟腐病的致病菌種類、田間侵染途徑及規律、抗性品種篩選、獼猴桃與病原菌互作機理及防治措施等方面進行了綜述，并針對獼猴桃軟腐病亟待開展的工作方向進行了探討。

1 主要致病菌類型

歷年來許多學者針對軟腐病的致病菌種類進行了研究，結果存在較大爭議。但綜合目前文獻可知，葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）和擬莖點霉菌屬（Phomopsissp.，有性態為Diaporthesp.）被認為是世界獼猴桃果實軟腐病的主要致病菌[10-13]。葡萄座腔菌在新西蘭、韓國以及我國的江西奉新、陜西周至、貴州六盤水、北京房山、浙江江山、福建建寧、安徽金寨及廣德被認為是獼猴桃軟腐病的主要致病菌[14-16]；擬莖點霉菌在智利、土耳其以及我國四川、湖南、福建等省份被鑒定為軟腐病菌[17-22]，其中包括D.nobilis、D.longicolla、D.passiflorae、D.lithocarpus、D.ambigua、D.australafricana、D.novem、D.rudis、D.hongkongensis、Phomopsis mali、Phomopsis vaccinii及D.viticola等種類；其他病原菌也在軟腐病果實上被鑒定到，如：蘋果輪紋病菌（Physalospora piricola）[23]、莖點霉菌（Phomasp.）[24]、擬盤多毛孢菌（Pestalotiopsissp.）、層出鐮刀菌（Fusarium proliferatum）、鏈格孢菌（Alternaria alternata）[25]、盤多毛孢菌（Pestalotiopsis gracilis）[26]及層出鐮刀菌（Fusarium acuminatum）[27]等。

2015—2017 年，筆者對我國獼猴桃的果實軟腐病菌進行了全面鑒定，發現軟腐病是由多種真菌引起的，包含葡萄座腔菌、盤多毛孢菌、鏈格孢菌及擬莖點霉菌屬菌株，其中擬莖點霉菌屬菌株檢出率最高且致病力最強；不同地區不同品種的致病菌存在明顯差異，如重慶和河南地區的葡萄座腔菌檢出率高，貴州、四川及江西地區的擬莖點霉菌檢出率高；菌株種類差異可能與不同栽培區域溫度濕度環境、病原菌的來源及侵染能力有關[9]。

2 田間侵染途徑及規律

早期研究普遍認為獼猴桃軟腐病是一種采后病害，采收運輸過程中的機械傷口是病原菌侵染的主要途徑[28]。但王井田等[29]研究發現，果皮較厚、毛較硬的品種，抗機械傷能力較強，但發病率仍較高，說明機械傷口不是軟腐病的主要侵染途徑。筆者在對獼猴桃品種軟腐病抗性研究的試驗中，也發現品種抗病性與果皮厚度沒有直接關系，對于中華和美味系來說，品種間也沒有直接關系[30]。

近幾年，國內外針對病原菌的侵染規律陸續展開了系列研究：譬如高屋茂雄[31]、余桂萍等[32]、Zhou 等[16]認為葡萄座腔菌以菌絲體、分生孢子和子囊殼在枯枝、果梗上越冬，翌年春季恢復活動，幼果至成熟期侵染果實，5 月至7 月上旬為侵染高峰期，果底、果中部及果頂均為侵染點，感病嚴重會導致采前落果。王井田等[29]采用套袋法分析認為，擬莖點霉菌屬菌株在謝花后3 周開始侵染幼果，謝花后6 周侵染達到高峰，7 月下旬開始第2 次侵染。

為進一步明確獼猴桃軟腐病的侵染規律，筆者對8 個主要栽培品種的組織（枝條、花蕾、葉片、果實等）進行了2 周年不同時期的病菌鑒定。結果顯示：病菌以菌絲體或子實體的形式在枝條上潛伏越冬，翌年春天氣溫回升后，子囊孢子或分生孢子釋放，借風雨傳播，在早春花期時侵染花蕾，幼果形成期由花蕾轉移至幼果上，直至果實貯藏期表現軟腐癥狀。因此，提出對該病的防治關鍵時期是冬季休眠期及春季現蕾至幼果快速膨大期[33]。

3 抗性種質篩選

篩選和培育抗病種質是防治獼猴桃軟腐病的有效措施之一，因此，盡快篩選出品質高、抗性強的品種是目前亟待解決的關鍵問題。丁愛冬等[28]認為選育品質好、抗機械損傷能力強的品種是防治獼猴桃軟腐病的有效途徑。王井田等[29]人工接種葡萄座腔菌及擬莖點霉菌結果顯示，‘海沃德’‘云海1 號’和‘金艷’表現高抗。筆者利用葡萄座腔菌、盤多毛孢菌、鏈格孢菌及擬莖點霉菌4種軟腐病菌對國家獼猴桃種質資源圃中31個具有重要經濟價值的主栽品種或品系進行軟腐病抗性篩選，獲得高抗及中抗種質10 余份，結果顯示獼猴桃種質的軟腐病抗性分化明顯，‘川獼2 號’‘東紅’及‘和平1 號’等品種的抗性較強，‘紅陽’‘秦美’及‘香綠’等品種的抗性較差[30]。

4 獼猴桃與病原菌的互作機理

王瑞玲[34]研究發現，葡萄座腔菌的侵染加快了獼猴桃果實硬度的下降速度，增加了可溶性固形物和總糖含量的損失，抑制了可滴定酸含量的下降，增大了維生素C 的損失率；此外，接種葡萄座腔菌沒有顯著提高果實呼吸作用和乙烯釋放速率的峰值，但誘導了果實呼吸躍變和乙烯釋放高峰的提前，加速了果實的衰老、腐敗。此外，王晶晶[14]發現，葡萄座腔菌接種獼猴桃果實后，果實SOD、POD、CAT、PPO、PAL 及幾丁質的活性均有大幅提高；由此表明，病原菌侵染誘導獼猴桃寄主細胞提高抗氧化酶活性清除自由基，同時積累了大量Pro 以提高自身滲透調節能力，從而增強抗病能力，減輕宿主細胞受到傷害；PG 和Cx 活性也顯著升高，說明病原菌主要是通過對細胞壁的破壞導致獼猴桃發病。目前，關于擬莖點霉菌及其他致病菌與獼猴桃的互作機理還有待進一步闡明。

5 防治措施

近些年已在農業防治、園區管理及采后管理等方面開展了防治研究。李愛華等[23]認為，對該病的防治既要注意果園建園的水、土、氣條件，防止病菌蔓延，也要注意入庫前及貯藏中期的病果檢查，及時將病果揀出能有效減少病害發生率。

使用化學殺菌劑是田間防治植物真菌性病害的常用方法，而研究關鍵是篩選合適的藥劑類型及使用濃度。新西蘭、韓國學者認為，戊唑醇、撲海因、氟硅唑、苯菌靈、甲基托布津[35]對軟腐病防效明顯。國內研究認為，5%己唑醇微乳劑、10%苯醚甲環唑水分散粒劑、50%咪酰胺錳鹽可濕性粉劑、50%異菌脲懸浮劑、75%肟菌酯·戊唑醇水分散粒劑及80%甲基硫菌靈可濕性粉劑對葡萄座腔菌及擬莖點霉菌菌絲及孢子具有較好的毒殺作用[15,17,24-26,29,32]。四霉素∶戊唑醇質量配比=2∶1的組合物也可有效用于軟腐病防治[36]。近2 年，筆者運用28 種真菌殺菌劑對葡萄座腔菌、盤多毛孢菌、鏈格孢菌及擬莖點霉菌進行了室內藥劑防效測定，并在4 個地區進行田間驗證，證實防治效果最佳的4 種藥劑為45%代森銨水劑150 倍液、30%琥膠肥酸銅懸浮劑300 倍液、86.2%銅大師可濕性粉劑1 000 倍液及47%春雷王銅可濕性粉劑500 倍液[37-38]。

由于化學殺菌劑可能會對食品安全和環境保護帶來潛在隱患，物理防治及生物農藥已成為采后病害控制的研究熱點。臭氧及新型TiO2光催化臭氧化方法被證實可有效控制軟腐病菌侵染，有顯著延緩發病的作用[16,31-39]。木霉菌（Trichodermaspp.）如橘綠木霉、哈茨木霉及其發酵產物能導致軟腐病菌菌絲斷裂，原生質外滲形成空腔，使菌絲生長受到抑制[40-44]。此外，多種芽孢桿菌、酵母菌及其分泌發酵液和抗菌活性成分被證實可顯著抑制軟腐病菌的菌絲生長和孢子萌發，如西姆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、多粘芽胞桿菌、側孢短芽孢桿菌[45-46]、異常威克漢姆酵母、費比恩賽伯林德納氏酵母[47]、拮抗酵母[48]。

在植物源生物藥劑方面，姜黃、丁香、肉桂及黃芩等中藥提取物對葡萄座腔菌及擬莖點霉菌抑菌效果明顯，處理后果實發病率減少了35%左右[49-53]。此外，幼果期和壯果末期噴施殼聚糖復合保護膜劑，可顯著降低丙二醛積累，提高果實的SOD、POD 和CAT 的酶活性，降低發病率，誘導增強果實的抗病性，且具有改善獼猴桃品質，延長貯藏期的作用[12,54]。茉莉酸甲酯（MeJA）可破壞葡萄座腔菌的細胞壁結構完整性，降低軟腐病發生；用一定濃度的茉莉酸甲酯熏蒸獼猴桃果實，可提高獼猴桃果實POD、SOD、CAT、PPO 和APX等防御酶活性，提高病程相關蛋白CHI、GLU 酶活，提高植保素類物質總酚的含量，增強果實抗逆性，且能改善果實外形與品質，延長貯藏期[55-56]。采前噴施草酸和鈣結合萘乙酸，也能提高獼猴桃貯藏期的抗病性[57]。因此，未來運用更安全有效的植物源藥劑或誘抗劑進行防治，也將是獼猴桃腐爛病防治的重要方向。

筆者綜合軟腐病菌侵染規律及防治藥劑篩選結果，對果實軟腐病菌的綜合防治措施提出如下建議：加強田間管理，冬季及時修剪，清除感病枯枝、落果，噴施5 波美度石硫合劑，徹底清園；同時，在花蕾期、露瓣期、謝花后15 d 內及軟腐病菌孢子大量飛散的5—7 月，噴施30%琥膠肥酸銅懸浮劑300 倍液、45%代森銨水劑150 倍液、47%春雷王銅可濕性粉劑500 倍液等真菌防治藥劑；6—7 月，對果實進行套袋，注意套袋前對果實、樹體噴施殺菌劑和殺蟲劑。采收及采后運輸過程中盡量減少獼猴桃果實的機械損傷，用3.5%特克多（噻菌靈）煙劑，按100 kg 鮮果100 g 制劑的藥量熏蒸；入庫前嚴格挑選；1～3 ℃低溫貯藏有利于抑制該病的發生，盡可能保證采收后24 h 內入冷庫；對冷藏果及時挑揀傷果、病果，減少相互感染。

6 討論與展望

隨著我國獼猴桃產業的迅猛發展，獼猴桃軟腐病逐步得到重視。目前，國內外已在該病的病原菌鑒定、田間侵染途徑及規律、抗性種質篩選及互作機理研究、防治藥劑篩選方面取得了一些成果。然而，目前國內對病原菌的采前侵染機理及獼猴桃受到病原菌侵染后的應答機制研究不足，以致無法針對性開展抗性育種及防治技術研發。筆者認為應從以下4 個方面展開系統研究，最終控制或減少病害的發生。第一，繼續對各主產區的軟腐病感病情況進行調研，全面了解該病在國內的發生情況、感病面積及程度；加強病原菌種類的鑒定，以確定是否還存在新的致病菌種類；針對目前已確定的致病菌設計特異性引物，進行早期快速診斷。第二，利用熒光菌/顯微技術結合組學技術進一步揭示病原菌的侵染機制，闡明主要致病菌的侵染時間、途徑等，以便后期制定準確的防治方案。第三，繼續篩選抗性種質，并結合組學技術闡明獼猴桃在病原菌侵染后的應答機制，挖掘抗性基因，以期后期進行分子抗性育種。第四，加強軟腐病菌的防治技術研究，篩選出安全高效的化學防治藥劑，并開發綠色環保的物理及生物防治藥劑，重點加強現蕾期至套袋期的田間防效驗證，檢測殘留性和安全性。以上問題的深入揭示將為我國獼猴桃軟腐病防治提供參考，盡可能減少該病對獼猴桃產業造成的經濟損失。