評價熒光定量PCR技術在痰結核菌檢測中的應用

陳文龍

【摘 ?要】目的：探討在痰結核細菌檢測中應用熒光定量PCR檢測方式的臨床效果。方法：建立檢測痰結核熒光定量PCR技術，對多種敏感性和特異性進行檢驗，通過對150例住院患者痰結核細菌檢測，得出相關數據，并進行對比分析。結果：使用熒光定量PCR技術的患者標本陽性檢出率為35.33%。培養法的患者標本陽性檢出率為17.33%，涂片法的患者標本陽性檢出率為12.00%。熒光定量PCR技術均優于培養法和涂片法，更能有效檢測出結合桿菌，數據比較存在顯著差異性，P<0.05。結論：熒光明顯定量PCR技術明顯優于傳統的結合桿菌監測方式，敏感性和檢出率均較高，且具有特異性，診斷價值更高，可有效診斷患者結核疾病，尤其對涂片染色和結核陰性結核病有良好的診斷效果。

【關鍵詞】熒光定量PCR;痰結合菌;診斷價值

【中圖分類號】R440??????【文獻標識碼】A??????【文章編號】1672-3783（2020）03-0039-01

結核病屬于臨床常見感染性疾病，全球均具有較高的感染率，是一種單一病原體疾病，死亡率極高，嚴重威脅患者的身體健康，因此目前采取有效措施，及時診斷結核疾病，做好結核疾病的防控工作^[1]。目前，比較常見的結核疾病診斷方式為傳統培養法和涂片法，但是此種診斷方式存在很多弊端，準確性和特異性不高。基于此，本研究對痰結核細菌標本進行熒光定量PCR診斷，對此種診斷方式的診斷價值進行評估。

1 資料與方法

1.1一般資料

本文從2014年6月至2017年7月，收治的150例住院患者作為研究對象，這些研究對象均為結核患者，患者最大年齡為66歲，最小年齡為19歲，其中包括50例女性患者和100例男性患者。

1.2方法

采集標本。所有患者均按照結核病細菌學診斷操作流程進行診斷;首先需采集患者痰液，痰液采集時間為每日清晨，采集劑量為4毫升。若患者患有胸膜炎，則還需對患者胸水進行采集，然后將采集的標本處理過后進行實驗室診斷，診斷期間需利用涂片抗酸染色和結核細菌培養方式診斷。診斷程序包括編號標本和化驗單，其余診斷操作方式均嚴格按照流程進行規范操作;與此同時采用熒光定量PCR技術對標本進行檢驗，檢驗試劑為MX300P，試劑產自中山達安基因股份有限公司。在痰液標本中加入4倍體積4%氫氧化鈉，搖勻后將其放置實驗室內，待30分鐘后痰液會形成液體，然后將其中1毫升液體放置在離心管中，離心管長度為1.5毫升，5分鐘后離心棄上清。待其沉淀過后，利用無菌生理鹽水進行清洗，其于體液標本也依次方式進行處理。

1.3數據處理

利用專業的統計學軟件SPSS19.0對熒光定量PCR技術診斷價值進行分析和統計，陽性、陰性檢出率為計數資料，采用（n，%）表示和卡方檢驗，計量資料采用（）表示和T檢驗，若P<0.05則數據對比差異性顯著。

2 結果

涂片法陰性患者標本共有150例，呈陽性的有18例，陰性的有132例，陽性檢出率為12.00%（18/150）。

培養法取150例結核疾病患者，標本呈陽性的有26例，呈陰性的有124例，陽性檢出率為17.33%（26/150）.

熒光定量取150例結核疾病患者，標本呈陽性的有53例，呈陰性的有97例，陽性檢出率為35.33%（53/150）.三種監測方式最終檢出的陽性標本例數為450例，呈陽性的有97例，呈陰性的有353例，陽性檢出率為61.33%。

3 討論

結核病目前比較準確的分離方式為結核菌分離培養，傳統的分離檢測方式主要包括涂片法和培養檢測法，可通過實驗人員的檢測實現結核疾病的診斷，但是此種方式往往需要很多人員方能實現檢測和診斷的目的，診斷花費時間較長，不僅使檢測結核細菌的效率受到影響，還在一定程度上降低陽性檢出率，存在診斷結核菌不準確現象，有一定的檢測弊端，其次此種診斷方式無法準確判斷細菌的染色和生長特異，容易發生誤診現象，不僅會延誤病情，還在一定程度上增加患者病情惡化的概率，使患者錯過最佳時間，嚴重威脅患者的生命安全。因此為了克服傳統檢測方式的弊端，需采取更先進的結核菌檢測技術^[2]。

熒光定量PCR屬于一種新型診斷方式，彌補了傳統檢測方式的優勢，可縮短檢測時間，提高檢測效率，同時具有敏感度、特異度等優勢，能夠快速培養生長緩慢細菌。其次此種檢測方式完全是在密閉系統中擴張完成，不僅可實現實時測定，還能降低污染的可能性，以免患者痰核細菌因污染物增長呈假陽性;也能最大程度的降低誤診概率，提高檢測的準確性，診斷價值較高，檢測效率高，檢測結果好，廣受結核疾病患者的歡迎和喜愛，可作為臨床檢測結核桿菌的主要診斷方式^[3]。

熒光定量診斷方式還具有以下幾方面優勢：（1）可快速解決污染問題，此種方式檢測完全在單管中進行，期間不需要打開管蓋，可杜絕污染物入侵，降低污染的發生概率。（2）此種檢測方式自動化程度高，結核細菌反應完全是由計算機完成，不僅高效、快速，還可減少相關人員接觸致癌物質，降低細菌的傳播概率。（3）此種檢測方式具有敏感性、特異和準確性。（4）此種診斷方式可實現對結核細菌的實施檢測，彌補了傳統定量只能檢測最終結果的局限性，可對每個樣品進行CT計算，獲得定量結果準確性更高^[4-5]。

經實驗研究表明，熒光定量PCR技術明顯優于傳統的痰液涂片和培養方式，此種檢測方式能夠提高結核桿菌的檢出率，并根據檢測結果快速為患者治療針對性的檢驗方式，及時控制病情，為患者贏得最佳治療時間，降低患者病死率，保證患者的身體健康。

參考文獻

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