電針對(duì)T10脊髓橫斷后神經(jīng)源性膀胱大鼠尿流動(dòng)力學(xué)及Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響

鄧悅寧，周達(dá)岸，馬賢德，陳 丹， 石 丹， 姜亞男

(1.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，遼寧 錦州 121000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，遼寧 沈陽 110000)

神經(jīng)源性膀胱是完全性脊髓損傷患者最常見和最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，其發(fā)病率呈逐年增長趨勢。按照損傷平面的不同，脊髓損傷可分為骶髓損傷和骶上脊髓損傷(suprasacral cord injury, SSCI)，其中SSCI患者占80%以上。完全性SSCI后出現(xiàn)神經(jīng)源性膀胱的原因是骶髓排尿中樞失去了腦橋排尿中樞的正常抑制，導(dǎo)致膀胱逼尿肌出現(xiàn)無抑制性的反復(fù)收縮，也是誘發(fā)上尿路損害及腎臟衰竭等泌尿系統(tǒng)并發(fā)癥的主要原因，嚴(yán)重者危及生命，最終成為完全性SSCI患者晚期死亡的首位原因[1-4]。針刺治療SSCI由來已久，其臨床治療作用較好[5-6]。電針治療是在傳統(tǒng)針刺的基礎(chǔ)上，進(jìn)行配伍穴位間連接電針儀正負(fù)電極，以適宜強(qiáng)度刺激穴位達(dá)到治病作用的一種療法[7-8]。電針對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)源性膀胱的療效尤為顯著[9-11]。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育的關(guān)鍵信號(hào)通路之一[12]，該信號(hào)通路在神經(jīng)損傷過程中發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞增殖和損傷修復(fù)的作用[13]。基于上述研究，本研究采用T10脊髓橫斷(spinal cord transection,SCT)后神經(jīng)源性膀胱模型大鼠為研究對(duì)象，以電針“大椎”和“次髎”穴為干預(yù)手段，通過檢測各組大鼠尿流動(dòng)力學(xué)和脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA及蛋白表達(dá)水平，探討電針“大椎”和“次髎”穴對(duì)T10 SCT后神經(jīng)源性膀胱的治療作用及其機(jī)制，為中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)治療神經(jīng)源性膀胱提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器48只SPF級(jí)SD雌性大鼠，體質(zhì)量180～220 g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(遼)2016-0001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購入后，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。抗Wnt-1(ab85060)、抗β-catenin(ab32572)和抗β-actin(ab8227)抗體(美國Abcam公司)，二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，PCR試劑盒(日本TaKaRa公司)，水合氯醛(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑沈陽有限公司)。電泳儀(DYY-6C型，北京六一儀器設(shè)備廠)，凝膠成像分析系統(tǒng)(4200SF型，中國天能公司)，數(shù)碼顯微鏡(DM2000型，德國徠卡公司)，PCR儀(Bio-Rad型，美國伯樂公司)，16通道生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(BL-420S型，成都泰盟科技有限公司)，電針治療儀(SDZ-Ⅲ型)和華佗牌針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組和模型復(fù)制方法SPF級(jí)SD雌性大鼠48只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(12只)和模型組(36只)。采用手術(shù)方式建立T10 SCT模型。采用1%戊巴比妥鈉(40 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，背部脊柱胸椎下段備皮，碘伏消毒，根據(jù)解剖定位T10椎體棘突，以其為中心沿背側(cè)正中線切開皮膚，切口長約2 cm，然后向下逐層分離皮下組織，沿椎板切開豎脊肌并向左右鈍性分離，用拉鉤左右拉開肌肉組織，暴露T9、T11胸椎的棘突和椎板。用手術(shù)刀切開T9-T10棘間韌帶，咬骨鉗自T9-T10椎板間隙緊貼椎板平行脊髓進(jìn)鉗，輕輕咬除椎板，直至咬除整個(gè)T10椎板及兩側(cè)的關(guān)節(jié)突。咬骨過程中保護(hù)脊髓硬脊膜、血管和神經(jīng)根。以手術(shù)刀柄佩戴尖刀片，于暴露的脊髓上緣橫向切斷脊髓，反復(fù)切割3～5次，以確保完全離斷。此時(shí)可見大鼠雙下肢抽搐，尾巴甩動(dòng)并松馳，提示脊髓完全橫斷。然后，用彎的眼科鑷輕輕挑起脊髓斷端，并從斷端處用顯微外科剪刀剪斷并取出1～2 mm長的脊髓組織，確保脊髓完全離斷。取出后，脊髓發(fā)生內(nèi)縮，形成1個(gè)空洞，用明膠海綿充分止血，并填充空洞，逐層縫合肌肉、皮下組織及皮膚。假手術(shù)組僅暴露T9～T11，并用咬骨鉗去除T10棘突，然后逐層縫合。模型組采用脊髓損傷行為學(xué)(Basso Beattie Bresnahan,BBB)評(píng)分和尿流動(dòng)力學(xué)對(duì)術(shù)后大鼠進(jìn)行模型評(píng)價(jià)，造模成功的大鼠再次隨機(jī)分為模型對(duì)照組、電針組和電針對(duì)照組。

1.3 模型評(píng)價(jià)術(shù)后大鼠完全蘇醒后，對(duì)各組大鼠脊髓橫斷情況采用BBB評(píng)分法進(jìn)行評(píng)價(jià)[14]。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)由0～21分組成，0分為無可見雙后肢運(yùn)動(dòng)，分?jǐn)?shù)逐漸遞增，雙后肢運(yùn)動(dòng)功能逐漸改善，21分為持續(xù)狀態(tài)的掌面移動(dòng)、協(xié)調(diào)步態(tài)、足趾抓地、軀干穩(wěn)定、尾巴翹起，活動(dòng)過程中身體與主動(dòng)爪位置始終處于平行狀態(tài)。由3人采用單盲法對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果分別進(jìn)行記錄并整理分析。大鼠T10 SCT后雙后肢呈拖動(dòng)前行狀態(tài)，無任何運(yùn)動(dòng)，計(jì)為0分，表明大鼠脊髓橫斷模型復(fù)制成功。術(shù)后大鼠正常飼養(yǎng)，模型組大鼠每日手法排尿，記錄尿量。連續(xù)2周后，大鼠排尿量穩(wěn)定，第15天測定各組大鼠的尿流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，評(píng)估T10 SCT后神經(jīng)源性膀胱大鼠的造模情況。

1.4 各組大鼠干預(yù)措施大鼠正常飼養(yǎng)至第15天，將T10 SCT后神經(jīng)源性膀胱大鼠模型復(fù)制成功后再次隨機(jī)分為模型對(duì)照組、電針組和電針對(duì)照組。

假手術(shù)組：再次分組后不做處理，正常飼養(yǎng)1周；模型對(duì)照組：再次分組后不做處理，正常飼養(yǎng)1周；電針組：以0.3 mm×25.0 mm毫針直刺，連接電針儀，正極連接“大椎”穴，負(fù)極連接“次髎”穴，電針儀參數(shù)設(shè)定為疏密波，10/50 Hz(疏波10 Hz/9 s，密波 50 Hz/5 s)，留針20 min，強(qiáng)度以針刺處出現(xiàn)規(guī)律性收縮抽動(dòng)為宜，每日1次，連續(xù)1周。參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠穴位圖譜，準(zhǔn)確定位。“大椎”穴：背部正中第 7 頸椎和第 1 胸椎間，直刺5 mm。“次髎”穴：第2、3骶骨的棘突間隙正中偏上旁開5～10 mm(左右隔日交替進(jìn)行)，直刺5～12 mm；電針對(duì)照組：針刺點(diǎn)分別選取以“大椎”和“次髎”穴為中心旁開1 cm處(遠(yuǎn)脊柱側(cè))針刺，電針儀參數(shù)同上，留針20 min，每日1次，連續(xù)1周。

1.5 尿流動(dòng)力學(xué)檢測末次電針干預(yù)完成后1 h，各組大鼠以1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40 mg·kg-1)，麻醉后手法按壓大鼠下腹部進(jìn)行輔助排尿，排空膀胱后將大鼠仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，導(dǎo)管經(jīng)三通管連接測壓通道及微量灌注泵，排空管腔氣體，導(dǎo)管潤滑經(jīng)尿道插入膀胱并固定，此時(shí)壓力值為膀胱基礎(chǔ)壓力(cmH2O)，隨后以7.5 mL·h-1的速度進(jìn)行溫生理鹽水灌注，觀察隨膀胱灌注量增加其膀胱壓力的變化。尿道口有液體流出時(shí)，即膀胱漏尿點(diǎn)壓力(cmH2O)和膀胱最大容量(mL)。漏尿后繼續(xù)灌注至逼尿肌壓力穩(wěn)定，取壓力峰值為膀胱最大壓力(cmH2O)，計(jì)算得出膀胱順應(yīng)性(mL·cm-1H2O)。膀胱順應(yīng)性=膀胱最大容量/(膀胱最大壓力-膀胱基礎(chǔ)壓力)。

1.6 脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平檢測末次電針干預(yù)后行尿流動(dòng)力學(xué)，檢測完成后，于各組大鼠中隨機(jī)抽取6只，頸椎脫位處死大鼠，于SCT處，向下截取脊髓殘端5 mm，置于1.5 mL凍存管中，凍存于-80℃冰箱中，用于Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平檢測。

采用RT-PCR法檢測各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平。Trizol裂解法提取脊髓組織中總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后再以Wnt-1和β-catenin擴(kuò)增引物為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中進(jìn)行水平電泳，凝膠成像分析系統(tǒng)中采集電泳圖像，并測定目的基因和內(nèi)參基因擴(kuò)增產(chǎn)物條帶的積分光密度(integrated optical density,IOD)值，以Wnt-1和β-catenin條帶與β-actin條帶灰度值比值表示W(wǎng)nt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平。引物序列見表1。

表1 Wnt-1和β-catenin引物序列

1.7 脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平檢測末次電針干預(yù)后行尿流動(dòng)力學(xué)，檢測完成后，于各組大鼠中隨機(jī)抽取6只，頸椎脫位處死大鼠，于SCT處，向上截取脊髓殘端5 mm，浸泡于4%多聚甲醛溶液中，常溫固定24 h以上，用于免疫熒光法檢測Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)。

常規(guī)制備石蠟切片，切片厚度為8 μm，采用免疫熒光法檢測脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平。石蠟切片經(jīng)二甲苯和梯度乙醇脫蠟至水，抗原修復(fù)后，5% BSA封閉1 h后，滴加一抗工作液(1∶300)，4℃冰箱中孵育過夜，次日洗片3次后，滴加FITC標(biāo)記的二抗工作液(1∶500)，37℃孵育1 h，洗片3次，滴加DAPI染核10 min，洗片3次，防熒光淬滅封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察Wnt-1和β-catenin蛋白陽性表達(dá)情況。隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中的陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)，以其平均數(shù)作為Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般情況術(shù)前48只大鼠經(jīng)過適應(yīng)性飼養(yǎng)后，活動(dòng)度正常，毛色潔白富有光澤。術(shù)后，假手術(shù)組大鼠活動(dòng)度減少，飲水量減少，其余未見異常；模型組大鼠雙下肢基本無活動(dòng)，當(dāng)天未出現(xiàn)死亡情況，次日死亡2只，每日手法排尿，至術(shù)后第14天，共計(jì)死亡9只，剩余27只。模型評(píng)價(jià)后將造模組隨機(jī)分為模型對(duì)照組、電針組和電針對(duì)照組，每組9只。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組剩余6只，電針組剩余8只，電針對(duì)照組剩余7只。假手術(shù)組大鼠基本恢復(fù)正常，無行動(dòng)和排尿障礙出現(xiàn)。電針組大鼠活動(dòng)度和飲水量等明顯多于模型對(duì)照組和電針對(duì)照組。

2.2 2組大鼠 BBB評(píng)分與假手術(shù)組(21.000±0.000)比較，模型組大鼠BBB評(píng)分(0.417±0.692)明顯降低(P<0.01)，證明大鼠SCT模型復(fù)制成功。

2.3 2組大鼠尿流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)水平與假手術(shù)組比較，模型組大鼠膀胱基礎(chǔ)壓力、最大壓力和漏尿點(diǎn)壓力均明顯升高(P<0.01)，大鼠膀胱最大容量和順應(yīng)性明顯降低(P<0.01)，證明SCT后神經(jīng)源性膀胱大鼠模型復(fù)制成功。見表2。

2.4 電針干預(yù)后各組大鼠尿流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)水平與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組、電針對(duì)照組和電針組大鼠膀胱基礎(chǔ)壓力和最大壓力升高(P<0.05或P<0.01)，膀胱最大容量和順應(yīng)性明顯降低(P<0.01)；模型對(duì)照組和電針對(duì)照組大鼠膀胱漏尿點(diǎn)壓力升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，電針組大鼠膀胱基礎(chǔ)壓力、最大壓力和漏尿點(diǎn)壓力明顯降低(P<0.01)，膀胱最大容量和順應(yīng)性升高(P<0.01)。與電針對(duì)照組比較，電針組大鼠膀胱基礎(chǔ)壓力、最大壓力和漏尿點(diǎn)壓力降低(P<0.05或P<0.01)，膀胱最大容量和順應(yīng)性升高(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表2 假手術(shù)組和模型組大鼠尿流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)水平

GroupnBladder base pressure(cmH2O)Bladder maxpressure(cmH2O)Bladder leakage point pressure(cmH2O)Bladder max capacity(V/mL)Bladder compliance(mL·cm-1H2O)Sham operation1219.800±1.91438.025±2.71837.325±2.8975.100±1.4210.292±0.062Model 2736.907±2.472?60.344±2.967?53.815±2.721?0.701±0.164?0.044±0.016?

*P<0.01 compared with sham operation group.

表3 電針干預(yù)后各組大鼠尿流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)水平

GroupBladder base pressure(cmH2O)Bladder maxpressure(cmH2O)Bladder leakage point pressure(cmH2O)Bladder max capacity(V/mL)Bladder compliance(mL·cm-1H2O)Sham operation19.833±3.08437.967±2.81936.633±6.5344.800±1.3670.316±0.153Model control 35.850±4.756??58.883±6.030??52.817±6.703??0.593±0.185??0.043±0.030??Electro-acupuncture control 33.883±5.622??53.067±5.183??50.033±7.784??0.653±0.195??0.050±0.023??Electro-acupuncture 26.400±3.166?△##44.267±5.655?△##40.333±7.557△#1.832±0.271??△##0.162±0.074??△#

*P<0.05,**P<0.01 compared with sham operation group;△P<0.01 compared with model control group;#P<0.05,##P<0.01 compared with electro-acupuncture control group.

2.5 各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組、電針組和電針對(duì)照組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)；與電針對(duì)照組比較，電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)。見圖1和表4。

M：250 bp marker；Lane 1：Sham operation group；Lane 2：Model control group；Lane 3：Electro-acupuncture group；Lane 4：Electro-acupuncture control group.

圖1 各組大鼠脊髓組織Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)電泳圖

Fig.1 Electrophoregram of expressions of Wnt-1 and β-catenin mRNA in spinal cord tissue of rats in various groups

表4 各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平

GroupWnt-1 mRNAβ-catenin mRNASham operation0.210±0.0330.222±0.034Model control0.323±0.037?0.346±0.069?Electro-acupuncture control0.349±0.063?0.328±0.059?Electro-acupuncture 0.491±0.092?△#0.469±0.048?△#

*P<0.01 compared with sham operation group;△P<0.01 compared with model control group;#P<0.01 compared with electro-acupuncture control group.

2.6 各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組、電針對(duì)照組和電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)；與電針對(duì)照組比較，電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)。見表5、圖2(插頁一)和圖3(插頁一)。

3 討 論

電針治療脊髓損傷后神經(jīng)源性膀胱的療效明確[15-16]。但以往治療中取穴繁多，形成多條電流刺激作用在模型大鼠體內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)選取“大椎”和“次髎”兩穴，從西醫(yī)講，完全性SSCI后神經(jīng)源實(shí)驗(yàn)大鼠T10 SCT后，模型組大鼠BBB評(píng)分平均為0.417分，明顯低于假手術(shù)組，無可見大鼠雙后肢運(yùn)動(dòng)，證明SCT模型制備成功；在此基礎(chǔ)上，模型組術(shù)后第15天經(jīng)尿流動(dòng)力學(xué)檢測形成高容量、低順應(yīng)性神經(jīng)源性膀胱(逼尿肌反射亢進(jìn))模型大鼠。電針干預(yù)后模型大鼠膀胱基礎(chǔ)壓力、最大壓力和漏尿點(diǎn)壓力均較模型對(duì)照組明顯降低，膀胱最大容量和順應(yīng)性明顯升高，結(jié)果證明電針干預(yù)SCT后神經(jīng)源性膀胱模型大鼠，其尿流動(dòng)力學(xué)檢測指標(biāo)明顯改善，形成“低壓儲(chǔ)尿”膀胱，有效改善了T10 SCT后神經(jīng)源性膀胱大鼠的排尿功能。為了探討可能的作用機(jī)制，對(duì)各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測。

表5 各組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin蛋白表達(dá)水平

GroupWnt-1 proteinβ-catenin proteinSham operation14.667±3.32715.667±3.141Model control24.333±3.077?24.667±2.944?Electro-acupuncture control24.000±2.449?25.667±2.066?Electro-acupuncture 40.000±6.066?△#44.500±6.348?△#

*P<0.01 compared with sham operation group;△P<0.01 compared with model control group;#P<0.01 compared with electro-acupuncture control group.

性膀胱是低級(jí)排尿中樞失去了高級(jí)排尿中樞的抑制，形成“高壓、低容量、低順應(yīng)性”膀胱，逼尿肌反射亢進(jìn)[17]。“大椎”穴位于脊髓上端，電流從該穴向下傳導(dǎo)，作用在脊髓損傷處，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，改善低級(jí)排尿中樞的失控狀態(tài)[18]。“次髎”穴位于第2骶后孔處，其內(nèi)有骶神經(jīng)通過，電針該穴可調(diào)節(jié)逼尿肌的協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，改善模型大鼠的排尿功能[19]；從中醫(yī)講，脊髓損傷病在督脈，致腎陽虧虛，膀胱氣化失司，出現(xiàn)“遺溺”等癥狀。電針“大椎”和“次髎”穴，可使經(jīng)絡(luò)通利，陽氣溫煦，恢復(fù)膀胱氣化功能。由此確定主要治療穴位點(diǎn)，并采用尿流動(dòng)力學(xué)進(jìn)行檢測。

Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在神經(jīng)損傷過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控細(xì)胞增殖和損傷修復(fù)的作用[20]。目前研究較多的是有β-catenin參與的經(jīng)典Wnt信號(hào)通路[21-22]。Wnt-1是經(jīng)典通路的配體，在神經(jīng)發(fā)生的過程中起到非常重要的作用[23]。Wnt-1配體與細(xì)胞膜受體結(jié)合后，β-catenin能夠在胞內(nèi)短暫集聚并移至核內(nèi)，具有促進(jìn)受損組織細(xì)胞修復(fù)的功能[24]。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平明顯高于假手術(shù)組，表明SCT后Wnt-1/β-catenin信號(hào)通路被激活，此結(jié)果與其他研究者[25]的研究結(jié)果一致。電針組大鼠脊髓組織中Wnt-1和β-catenin mRNA表達(dá)水平明顯高于模型對(duì)照組，表明電針“大椎”穴和“次髎”穴可強(qiáng)化Wnt-1/β-catenin信號(hào)通路的活化作用，進(jìn)一步促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化，增強(qiáng)脊髓組織修復(fù)作用[26]，恢復(fù)腦干排尿中樞對(duì)骶髓排尿中樞的控制作用，從而改善SCT后神經(jīng)源性膀胱大鼠的排尿功能。

內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維成分包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)2種，兩者作用相互拮抗。膀胱逼尿肌亢進(jìn)是由于SCT后副交感神經(jīng)刺激增加和(或)交感神經(jīng)刺激減少所致。胸髓中間外側(cè)核為交感神經(jīng)低級(jí)中樞，本實(shí)驗(yàn)選取T10脊髓組織檢測目標(biāo)蛋白。分析尿流動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示交感神經(jīng)為興奮表現(xiàn)。免疫熒光檢測結(jié)果顯示：Wnt-1表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞漿，β-catenin表達(dá)于細(xì)胞核，陽性表達(dá)細(xì)胞的形態(tài)可能是交感神經(jīng)細(xì)胞，由此推測Wnt-1和β-catenin表達(dá)與交感神經(jīng)的興奮可能具有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示：假手術(shù)組偶見Wnt-1和β-catenin弱陽性表達(dá)細(xì)胞，模型對(duì)照組和電針對(duì)照組可見少量Wnt-1及β-catenin陽性表達(dá)細(xì)胞，電針組Wnt-1和β-catenin陽性表達(dá)細(xì)胞明顯增多。提示SCT后，機(jī)體應(yīng)激性上調(diào)Wnt-1和β-catenin的表達(dá)，以拮抗膀胱副交感神經(jīng)興奮而導(dǎo)致膀胱逼尿肌亢進(jìn)；電針能夠明顯上調(diào)Wnt-1和β-catenin蛋白的表達(dá)水平，提示電針的作用機(jī)制與該作用密切相關(guān)。

綜上所述，電針的作用機(jī)制可能與其上調(diào)Wnt-1和β-catenin蛋白在交感運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá)、增加交感神經(jīng)的興奮密切相關(guān)，進(jìn)一步活化Wnt-1/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化，發(fā)揮調(diào)控逼尿肌收縮功能，從而改善神經(jīng)源性膀胱的臨床癥狀。