乳腺癌組織中STING蛋白的表達及其臨床意義

張明珍，胡知齊，羅 兵，劉必勇，開金云

乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一。腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME)與乳腺癌的復發(fā)、轉移和不良預后密切相關[1]。干擾素基因刺激因子(stimulator of interferon, STING)是cGAS-STING信號通路的核心調(diào)節(jié)分子，作為細胞質(zhì)內(nèi)的DNA感受器，參與固有免疫應答，與惡性腫瘤及調(diào)節(jié)其TME中免疫細胞浸潤密切相關。目前，有關STING蛋白表達與乳腺癌的報道較少[2]。因此，本文采用免疫組化SP法檢測乳腺癌組織及其癌旁正常組織中STING蛋白的表達，分析其與乳腺癌臨床病理特征的關系，為臨床診斷與治療提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 臨床資料回顧性分析安徽省第二人民醫(yī)院普外科2016年7月～2018年6月入院乳腺癌患者的臨床資料，依據(jù)納入及排除標準選取入組病例。納入標準：本組分析對象均行外科手術，經(jīng)病理學檢查確診為乳腺癌；能夠留取完整的病理學資料，提供足夠行免疫組化檢查的癌組織和癌旁正常組織(距離癌組織2 cm)樣本。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；術前行新輔助治療者。經(jīng)篩選共入組42例，患者均為女性，平均年齡(38 ±11)歲；TNM分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期32例，Ⅲ期7例；分子分型：Lumina A型13例，Lumina B型17例，H型5例，TNBC型7例。

1.2 方法免疫組化采用SP法染色，常規(guī)行組織脫水、透明、浸蠟、包埋、切片和烤片、切片脫蠟、抗原修復，用3%的過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，并滴加正常山羊血清室溫封閉30 min。用油性筆在組織周圍畫圈標記，并滴加稀釋好的一抗(STING、CST稀釋比1 ∶1 000)，于4 ℃濕盒中孵育15 h。PBS沖洗3次，每次3 min，吸水紙擦干切片后滴加HRP標記的山羊抗兔二抗，37 ℃孵育20 min。PBS沖洗切片4次，每次3 min，吸水紙擦干切片后滴加新鮮配制的DAB顯色液；再進行復染、脫水、封固。

1.3 結果判斷STING蛋白陽性定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。免疫組化結果判斷需根據(jù)細胞著色深度和陽性細胞百分比綜合評價。(1)按陽性細胞著色強度計分：無著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。(2)按陽性細胞百分比計分：隨機選取5個視野觀察，記錄陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)的比率并取其平均值：≤5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。其中將兩者得分結果相乘為最終得分，≥1分為陽性，<1分為陰性。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比表示；多組總體比較用R×C列聯(lián)表χ2檢驗，兩組之間比較用Fisher精確檢驗；采用二元Logistic回歸模型分析各參數(shù)與乳腺癌術后是否復發(fā)之間的關聯(lián)性；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌及癌旁正常組織中STING蛋白的表達STING蛋白陽性定位于細胞質(zhì)，本組42例乳腺癌患者，其乳腺癌組織中STING蛋白陽性10例(10/42，23.8%)，癌旁正常組織22例(22/42，52.4%)，STING在乳腺癌組織中的陽性率低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.269，P<0.05，圖1、2)。

圖1 癌旁正常組織中STING蛋白呈陽性，SP法 圖2 乳腺癌組織中STING蛋白呈陰性，SP法

2.2 STING蛋白表達與乳腺癌病理特征的關系STING蛋白表達與乳腺癌Lumina分型有關(P<0.05)；STING蛋白表達與TNM分期、組織學分級無明顯相關(P>0.05，表1)。

表1 STING蛋白表達與乳腺癌病理特征的關系

2.3 多因素Logistic回歸模型分析對42例乳腺癌患者術后進行隨訪1～5年，23例乳腺癌患者發(fā)生腫瘤復發(fā)，19例乳腺癌患者未發(fā)生復發(fā)。本實驗選取患者年齡、分子分型、TNM分期、STING蛋白表達水平等為自變量進行多因素Logistic回歸模型分析，結果顯示：STING蛋白低表達是乳腺癌患者術后復發(fā)的獨立危險因素(P<0.05，表2)。

表2 乳腺癌術后復發(fā)的多因素Logistic回歸模型分析

3 討論

國內(nèi)乳腺癌發(fā)病率高居女性腫瘤發(fā)病率的首位，近年乳腺癌的發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢。依據(jù)國內(nèi)外臨床診療指南，對乳腺癌患者進行TNM分期和Luminal分型，有助于其整體治療方案的選擇和預后的判斷[3-4]。但是在實際臨床工作中卻存在一定的局限性，隨著研究的深入，一系列與分子靶向治療及免疫治療相關的蛋白分子不斷被發(fā)現(xiàn)[5-7]，如何更加準確地對乳腺癌患者進行分類逐漸成為新的挑戰(zhàn)。

環(huán)磷酸鳥苷-腺苷合成酶 —— cGAS-STING作為經(jīng)典的固有免疫應答信號通路，在先天性免疫中發(fā)揮重要作用，且被證實與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關。其核心調(diào)節(jié)分子STING存在于細胞質(zhì)內(nèi)，在人體細胞受外源性核酸污染或自身DNA損傷出現(xiàn)核泄漏時，發(fā)揮“哨兵”的作用，識別并激活下游通路產(chǎn)生INF-β，從而募集并激活免疫細胞，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[2]。

研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤組織內(nèi)STING蛋白處于低表達狀態(tài)，可能與其參與免疫抑制及免疫逃逸相關[8]。本組乳腺癌組織中的STING蛋白陽性率低于癌旁正常組織，與其他相關研究結果一致，下調(diào)的STING-TBK-l-IRF-3通路可能參與癌癥進程[9]。TME是腫瘤細胞周圍的支持組織，一般由細胞外基質(zhì)、免疫細胞、成纖維細胞等組成，其構成復雜，功能多樣，且在不同患者體內(nèi)表現(xiàn)出較大的差異性，檢測及評估TME有助于指導患者進行惡性腫瘤的精準治療[10]。目前，已有相關實驗顯示激活STING通路，可以達到上調(diào)腫瘤周圍微環(huán)境免疫細胞的功能。本組實驗結果顯示，STING蛋白低表達是乳腺癌術后復發(fā)獨立危險因素。因此，STING蛋白有望成為乳腺癌治療的潛在靶點。

本組實驗發(fā)現(xiàn)STING蛋白表達與患者的分子分型相關。有研究發(fā)現(xiàn)過表達HER-2可以激活經(jīng)典的乳腺癌HER-2-AKT1信號通路，并能夠強烈抑制cGAS-STING信號通路，產(chǎn)生相關的免疫抑制效應[11]，與本組發(fā)現(xiàn)的STING蛋白陽性率在Luminal A、Luminal B型及TNBC中低表達一致。針對這些特殊類型的乳腺癌患者，可能需要采用不同的靶向治療策略。

綜上所述，乳腺癌組織中STING蛋白表達降低，與乳腺癌患者預后相關，可能參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展進程，有助于評價腫瘤分子分型，對指導乳腺癌治療和預后判斷具有一定的參考價值。隨著醫(yī)學的發(fā)展，將從分子水平進一步研究腫瘤的發(fā)病機制，實現(xiàn)患者的個體化精準治療，為患者帶來新的機遇。