涎腺腺樣囊性癌中CXCR1、N-cadherin、Ki-67和vimentin的表達及其與淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲的關系

杜洪亮，車銀富，于 濤，陶 峰，何等旗

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)是發(fā)生于涎腺常見的惡性腫瘤，占涎腺惡性腫瘤的7.5%～10%[1]，具有沿神經(jīng)侵襲性進展，易遠處轉(zhuǎn)移、復發(fā)的特性，神經(jīng)侵襲是其重要的生物學特性[2-3]。近年多種細胞蛋白的表達被認為與腫瘤相關，包括CXCR1、VEGF、N-cadherin、YAP、vimentin、MYB、Survivin等[4-7]。CXCR1是趨化因子CXCR家族的重要成員，研究顯示其異常表達與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關[8]。N-cadherin介導細胞與細胞之間的黏附，其表達增加可促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[9]。Ki-67是細胞增殖活性的標志物[10]，vimentin穩(wěn)定表達于間葉細胞，其異常表達與細胞發(fā)生間葉表型轉(zhuǎn)變有關[11]。目前，CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin在SACC中的表達及其與淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲的關系尚不清楚。本文通過檢測CXCR1、N-cadherin、Ki-67和vimentin蛋白在SACC中的表達，分析其與臨床病理特征、淋巴結轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵襲的關系，為SACC相關機制分析提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集蘭州大學第一醫(yī)院口腔頜面外科2013年1月～2018年12月病理確診的SACC蠟塊標本39例。納入標準：(1)發(fā)生于大涎腺或小涎腺；(2)臨床病理資料完整；(3)術前均未接受放、化療，并均在我院接受手術治療；(4)蠟塊標本合格。SACC中男性19例，女性20例，年齡21～87歲，平均50歲。腫瘤位于大涎腺26例(腮腺14例、舌下腺9例、頜下腺3例)，位于小涎腺13例(上腭10例，頰腺2例，顳下窩1例)。另選取10例癌旁正常涎腺組織作為對照。本實驗獲蘭州大學第一醫(yī)院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法免疫組化采用SP法染色，試劑購自北京中杉金橋公司。兔抗人CXCR1、N-cadherin多克隆抗體，購自Santa Cruz公司；鼠抗人Ki-67單克隆抗體，購自北京中杉金橋公司；鼠抗人vimentin單克隆抗體(檢測包含腫瘤細胞及腫瘤間質(zhì))，購自Bio Genex公司；具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 結果判斷免疫組化染色評估由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法進行。首先進行定性分析抗體染色表達模式的差異，然后進行定量分析。兩名病理醫(yī)師判斷的差異通過討論解決，有爭議標本請第三名病理科醫(yī)師閱片。CXCR1陽性為胞質(zhì)或胞核中呈棕黃色顆粒。N-cadherin陽性為細胞膜和(或)細胞質(zhì)中呈棕黃色。Ki-67陽性為細胞核內(nèi)呈棕黃色顆粒。vimentin陽性主要定位于胞質(zhì)，靠近胞膜，呈棕黃色顆粒。每個標本隨機取5個100倍視野，按細胞著色強度計分：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽性細胞百分數(shù)計分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分， 51%～75%為3分，>75%為4分；兩項得分結果相加< 2分為(-)，2～3分為(+)，4～5分為()，6～7分為()，本實驗將0～3分定義為陰性，4～7定義為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。CXCR1、E-cadherin、Ki-67、vimentin在SACC與癌旁正常組織之間表達的差異采用χ2檢驗，CXCR1、E-cadherin、Ki-67、vimentin的表達與臨床病理特征的關系及其與淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲的關系采用Fisher確切概率法分析，檢驗水準為α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin在SACC和癌旁正常組織中的表達CXCR1在癌旁正常組織中極少表達，在SACC組織細胞中大量表達，且陽性染色主要定位于細胞質(zhì)，細胞核中較少表達。N-cadherin陽性染色主要定位于細胞膜。Ki-67陽性染色主要定位于細胞核。vimentin陽性染色定位于細胞質(zhì)。SACC中CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin的陽性率分別為66.67%、74.36%、56.41%、71.79%，與癌旁正常組織相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0. 05，表1，圖1～4)。

圖1 A.CXCR1在癌旁正常組織中的表達，SP法；B.CXCR1在SACC組織中的表達，SP法 圖2 A.N-cadherin在癌旁正常組織中的表達，SP法；B.N-cadherin在SACC組織中的表達，SP法 圖3 A.Ki-67在癌旁正常組織中的表達，SP法；B.Ki-67在SACC組織中的表達，SP法

圖4 A.vimentin在癌旁正常組織中的表達，SP法；B.vimentin在SACC組織中的表達，SP法

表1 SACC和癌旁正常組織中CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin的表達[n(%)]

組間比較，*P<0.05

2.2 CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin的表達與SACC臨床病理特征的關系CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin表達與患者年齡、性別、發(fā)生部位、浸潤深度，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CXCR1、N-cadherin、Ki-67表達與腫瘤大小，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，vimentin表達與腫瘤直徑≥3 cm和<3 cm，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011)。Ki-67在低分化組與中+高分化組的表達，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CXCR1、N-cadherin和vimentin在低分化組和中+高分化組的表達，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017，P=0.002，P=0.011，表2)。

2.3 CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin的表達與淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲的關系CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin表達與有無淋巴結轉(zhuǎn)移，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CXCR1和vimentin表達與有無神經(jīng)侵襲，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。N-cadherin和Ki-67表達與有無神經(jīng)侵襲，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017，表3)。

3 討論

SACC是具有神經(jīng)侵襲和遠處轉(zhuǎn)移特性的涎腺惡性腫瘤[12]。多種趨化因子和蛋白的表達與SACC的神經(jīng)侵襲和遠處轉(zhuǎn)移相關[13-15]。CXCR1是CXC趨化因子受體家族的重要成員，主要表達于中性粒細胞、淋巴單核細胞等各種炎癥細胞表面，大量研究發(fā)現(xiàn)，CXCR1與多種腫瘤的發(fā)生、增殖、生長、侵襲轉(zhuǎn)移等發(fā)揮重要作用[16-17]。亦有研究顯示，CXCL12/CXCR4可能與SACC嗜神經(jīng)侵襲有關[18]。本組CXCR1在SACC組織細胞中大量表達，且陽性染色主要定位于細胞質(zhì)，且CXCR1在SACC的表達比癌旁正常涎腺組織明顯增高；提示CXCR1的表達與SACC相關，同時發(fā)現(xiàn)CXCR1在低分化組的表達明顯高于中+高分化組，與Xue等[19]的研究一致，但未發(fā)現(xiàn)CXCR1的表達與患者年齡、性別、發(fā)生部位、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲，差異有無統(tǒng)計學意義。

表2 SACC中CXCR1、E-cadherin、Ki-67、vimentin表達與臨床病理特征的關系

a為Fisher精確概率檢驗

表3 淋巴結轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵襲與CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin表達的關系

a為Fisher精確概率檢驗

鈣黏蛋白轉(zhuǎn)化是上皮細胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition, EMT)的重要機制之一，表現(xiàn)為E-cadherin向N-cadherin轉(zhuǎn)化[20]。研究顯示，N-cadherin表達的增高與多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程密切相關[21]。本組N-cadherin的表達在SACC組織中明顯升高。同時發(fā)現(xiàn)N-cadherin在低分化組的表達高于中+高分化組，且存在神經(jīng)侵襲SACC中N-cadherin的表達明顯增高，與Yi等[22]的研究一致， N-cadherin在膽囊癌低分化組的表達高于中+高分化組，且存在侵襲組N-cadherin的表達明顯增高；提示N-cadherin高表達與SACC的神經(jīng)侵襲和分化程度有關。

Ki-67是細胞增殖相關的核蛋白，其與腫瘤增殖、侵襲、預后密切相關[10]。本組Ki-67在SACC中的表達高于癌旁正常組織，且在有神經(jīng)侵襲的SACC中的表達明顯增高；提示Ki-67與SACC的神經(jīng)侵襲可能有關。Ki-67表達增多說明細胞增殖活躍，提示腫瘤細胞增殖與神經(jīng)侵襲可能相關。目前，Ki-67表達與神經(jīng)侵襲之間的關系，國內(nèi)外研究尚未見報道。

研究顯示，EMT是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。vimentin作為EMT過程中的重要因子，參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移等復雜過程[23]。本組vimentin在SACC中的表達明顯增高，且其高表達與腫瘤大小、腫瘤分化程度相關。有研究表明，vimentin可以控制細胞增殖，如一些促進細胞增殖的因素：血小板衍生生長因子、胰島素和表皮生長因子可以增加小鼠3T3細胞中vimentin mRNA的水平[24]。vimentin的丟失可以減少成纖維細胞的增殖，降低EMT的主要起始物TGF-β1的水平[25]。

綜上所述，CXCR1、N-cadherin、Ki-67、vimentin的表達與SACC發(fā)生、發(fā)展相關。N-cadherin和Ki-67與SACC的神經(jīng)侵襲相關。CXCR1、N-cadherin和vimentin與SACC的細胞分化程度相關。目前，其具體機制尚不清楚，需更深入的分析CXCR1、N-cadherin、Ki-67和vimentin與SACC臨床病理特征的關系。