子宮頸小細(xì)胞癌中INSM1的表達(dá)及其臨床意義

高 華，胡桂明，趙 梅

子宮頸小細(xì)胞癌(small cell carcinoma of the cervix, SCCC)屬于罕見的子宮頸惡性腫瘤，占子宮頸癌的1%～5%，具有高度侵襲性。早期可發(fā)生盆腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差[1-3]。由于該類腫瘤與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌及子宮頸腺癌臨床表現(xiàn)有相似性，但預(yù)后差異較大，因此進(jìn)行鑒別診斷尤為重要。文獻(xiàn)報(bào)道INSM1在肺小細(xì)胞癌中有較高的診斷價(jià)值。本文收集18例SCCC，探討INSM1在SCCC中的診斷及鑒別診斷價(jià)值，旨在提高臨床與病理醫(yī)師對(duì)該腫瘤的診斷水平。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集河南省省立醫(yī)院、鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院2016年11月～2018年11月存檔的SCCC手術(shù)標(biāo)本18例，子宮頸鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本32例，子宮頸腺癌手術(shù)標(biāo)本24例。所有組織標(biāo)本均由專科病理醫(yī)師經(jīng)免疫組化染色明確診斷。

1.2 方法手術(shù)切除組織均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色，光鏡觀察組織學(xué)形態(tài)。免疫組化染色采用EnVision兩步法，DAB顯色。INSM1抗體(1 ∶400)購(gòu)自Santa Cruz公司；p16、CD56、Syn、CgA抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物公司；EnVision試劑盒購(gòu)自福州邁新生物公司。

1.3 結(jié)果判斷p16陽性為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均著色；INSM1定位于細(xì)胞核；CD56定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)；CgA和Syn定位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的染色陽性比例進(jìn)行免疫組化結(jié)果判斷：陽性細(xì)胞<5%為陰性，≥5%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；采用χ2檢驗(yàn)比較INSM1蛋白在三種不同子宮頸組織中陽性率的差異，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 SCCC、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和子宮頸腺癌組織中INSM1、CD56、Syn、CgA蛋白的表達(dá)SCCC鏡下形態(tài)與小細(xì)胞肺癌相似，細(xì)胞圓形或梭型，體積較小且大小一致，呈片狀或者彌漫性分布(圖1)。細(xì)胞質(zhì)缺乏，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀，核仁不明顯且染色深，核分裂象多見。免疫表型：INSM1陽性定位于細(xì)胞核(圖2)，在三種不同子宮頸組織中陽性率依次為94.4%(17/18)、3.1%(1/32)、4.2%(1/24)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，表1)。神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物CD56、Syn、CgA在SCCC中陽性率依次為83.3%(15/18)、77.8%(14/18)、50.0%(9/18)。其中，Syn(圖3)、CgA多為部分或局灶陽性，CD56多為彌漫陽性(圖4)。其他標(biāo)志物p16在SCCC中的陽性率為83.3%(15/18)(圖5)。此外，CD56、Syn在三種不同子宮頸組織中陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CgA在子宮頸非神經(jīng)內(nèi)分泌癌中無表達(dá)。

2.2 INSM1、CD56、Syn、CgA在SCCC中診斷的靈敏度與特異度INSM1、CD56、Syn及CgA在SCCC診斷中的靈敏度分別為94%、83%、78%、50%，特異度分別為100%、50%、80%、82%；在SCCC的診斷中，INSM1的靈敏度與特異度明顯高于CD56、Syn和CgA。

3 討論

SCCC是一類較為罕見的惡性腫瘤，占子宮頸癌的1%～5%，IB1期5年生存期僅有55%～63%。與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和子宮頸腺癌相比，SCCC侵襲性更強(qiáng)。患者多為中青年，主要表現(xiàn)為陰道不規(guī)則出血，與其他子宮頸腫瘤臨床表現(xiàn)極為相似。目前認(rèn)為子宮頸癌最重要的病因與HPV感染有關(guān)[4]，且p16呈陽性。SCCC早期較少侵犯黏膜表層上皮，多為彌漫性浸潤(rùn)生長(zhǎng)，細(xì)胞學(xué)檢查不易發(fā)現(xiàn)，易漏診。

表1 SCCC、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌及子宮頸腺癌中INSM1、CD56、Syn、CgA的表達(dá)[n(%)]

圖1 SCCC細(xì)胞體積較小且大小一致,呈片狀或彌漫性分布 圖2 SCCC中IN-SM1呈細(xì)胞核強(qiáng)陽性,EnVision兩步法 圖3 SCCC中Syn呈細(xì)胞質(zhì)彌漫陽性,En-Vision兩步法 圖4 SCCC中CD56呈彌漫陽性,EnVision兩步法 圖5 SCCC中p16呈陽性,EnVision兩步法

常用神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物Syn、CD56、CgA在SCCC中呈不同程度的陽性。Conner等[5]對(duì)23例SCCC進(jìn)行免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，Syn和CgA陽性率分別為56.5%和43.5%。Albores-Saavedra等[6]研究發(fā)現(xiàn)，CD56最敏感，陽性率達(dá)88%(22/25)。本組實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD56、Syn、CgA在SCCC中的表達(dá)，陽性率依次為83.3%(15/18)、77.8%(14/18)、50.0%(9/18)。其中Syn和CgA的陽性率略高于文獻(xiàn)報(bào)道，可能與選用抗體不同有關(guān)；CD56敏感性較高，陽性率與文獻(xiàn)報(bào)道較一致，但其特異性較差，不能單獨(dú)作為診斷子宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌癌的標(biāo)志物；而CgA特異性較高，但敏感性較差，陽性率低。因此，傳統(tǒng)的內(nèi)分泌標(biāo)志物存在低靈敏度和特異度等缺點(diǎn)，尚有待于發(fā)現(xiàn)新的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)志物。

INSM1是一類與神經(jīng)內(nèi)分泌有關(guān)的鋅指轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白[7]，在腸道和胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞、腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞以及基底神經(jīng)祖細(xì)胞的發(fā)育過程中起重要作用。INSM1在胎兒發(fā)育中的神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中大量表達(dá)，但在成人組織中顯著減少或表達(dá)受限。最近發(fā)現(xiàn)，INSM1在很多神經(jīng)內(nèi)分泌和神經(jīng)上皮腫瘤中也有表達(dá)，如小鼠或大鼠垂體腺瘤和甲狀腺髓樣癌細(xì)胞系[7]，人或小鼠的成神經(jīng)管細(xì)胞瘤組織[8]。Fujino等[9]對(duì)27例小細(xì)胞肺癌進(jìn)行染色發(fā)現(xiàn)，INSM1在細(xì)胞核中表達(dá)，陽性率為100%(27/27)。INSM1在胃腸道和胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤[10-12]中的陽性率分別為95%(40/42)和90%(19/21)。此外，在胸腔神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷中，INSM1比傳統(tǒng)的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物更敏感、更特異[13]。但在SCCC中，INSM1的表達(dá)卻未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)18例SCCC、32例子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和24例子宮頸腺癌組織中INSM1蛋白的表達(dá)。在三種不同子宮頸組織中，INSM1的陽性率依次為94.4%(17/18)、3.1%(1/32)、4.2%(1/24)。因此，INSM1在SCCC的診斷與鑒別診斷中有較高的靈敏度與特異度，優(yōu)于傳統(tǒng)標(biāo)志物CD56、Syn、CgA。

綜上所述，INSM1作為一種與神經(jīng)內(nèi)分泌有關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，在SCCC的診斷與鑒別診斷中具有較高的靈敏度與特異度，可用于SCCC的診斷與鑒別診斷。