胃癌中DAB2IP、Twist的表達(dá)及其臨床意義

黃夢(mèng)君，王向陽, 蔡 威

胃癌是常見的腹部惡性腫瘤，好發(fā)年齡為50歲以上，男女發(fā)病率為2 ∶1[1]，患者隨飲食結(jié)構(gòu)變化，發(fā)病年齡趨于年輕化。DAB2IP是新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡過程中發(fā)揮重要作用[2]。Twist是在上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)型過程中占重要位置的基本螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移，研究表明Twist在多種腫瘤中高表達(dá)[3]。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SP法檢測(cè)DAB2IP和Twist在胃癌及其癌旁正常組織中的表達(dá)，分析其與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，并進(jìn)行相關(guān)性分析，以期為胃癌診斷和治療方法的選擇提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2014年8月～2015年6月湖北省武漢市中心醫(yī)院診治的52例胃癌標(biāo)本，另選取距癌組織邊緣>5 cm的對(duì)應(yīng)癌旁正常組織作為對(duì)照。所有患者均經(jīng)病理證實(shí)為胃癌，其中男性31例，女性21例，年齡49～70歲，平均(59.51±8.17)歲。收集患者臨床病理資料，包括腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織分化程度、浸潤深度等。按照國際抗癌聯(lián)盟制定的分期標(biāo)準(zhǔn)[4]分為：Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期19例、Ⅳ期15例；高分化12例、中分化10例、低分化30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)胃癌患者均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)；(2)術(shù)前未進(jìn)行放、化療及激素治療；(3)病灶無明顯壞死區(qū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)自身免疫性疾病；(2)具有明顯炎癥細(xì)胞浸潤癌旁正常組織；(3)合并其他惡性腫瘤；(4)臨床資料不完整。實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象對(duì)本實(shí)驗(yàn)同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化按照免疫組化法對(duì)胃癌組織及其癌旁正常組織進(jìn)行染色，經(jīng)沖洗、復(fù)染、脫水、封片，置于光鏡下進(jìn)行觀察。在高倍鏡下每個(gè)切片中選取5個(gè)視野，隨機(jī)挑選并對(duì)陽性染色細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.3 結(jié)果判斷(1)按陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度計(jì)分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；(2)按陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：≤3分為陰性，>3分為陽性。

1.4 隨訪術(shù)后通過電話訪問、門診復(fù)查的方式，對(duì)所有患者進(jìn)行3年隨訪，并統(tǒng)計(jì)總生存時(shí)間與中位生存時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 胃癌及癌旁正常組織中DAB2IP與Twist蛋白的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示DAB2IP蛋白陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞核，Twist蛋白陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)(圖1)。與癌旁正常組織相比，胃癌中DAB2IP陽性率降低,Twist陽性率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表1)。

2.2 DAB2IP、Twist表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系DAB2IP、Twist表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小均無關(guān)(P>0.05)；DAB2IP蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低胃癌組織中陽性率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度T1+T2、病理分期Ⅰ+Ⅱ期、分化程度中+高度患者(P<0.05)。Twist蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低胃癌組織中陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度T1+T2、病理分期Ⅰ+Ⅱ期、分化程度中+高度患者(P<0.05，表2)。

表1 胃癌及癌旁正常組織中DAB2IP、Twist的表達(dá)

圖1 A. DAB2IP在癌旁正常組織中呈陽性，SP法；B. DAB2IP在胃癌組織中呈陰性，SP法；C.Twist在癌旁正常組織中呈陰性，SP法；D.Twist在胃癌組織中呈陽性，SP法

表2 DAB2IP、Twist表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 胃癌中DAB2IP、Twist表達(dá)的相關(guān)性DAB2IP、Twist在胃癌組織中共同陽性率為19.2%(12/52)，共同陰性率為44%(23/52)。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，胃癌組織中DAB2IP與Twist表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.820，P<0.05，表3)。

表3 胃癌組織中DAB2IP、Twist表達(dá)的相關(guān)性

2.4 胃癌中DAB2IP、Twist表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系Kaplan-Meier法分析顯示，DAB2IP陽性組3年總生存率及中位生存時(shí)間遠(yuǎn)高于陰性組[(71.4%vs34.2%)、(28.93vs22.42)個(gè)月])。Twist陰性患者3年內(nèi)總生存率及中位生存時(shí)間高于陽性患者[(58.8%vs28.6%)、(25.12vs19.86)個(gè)月，圖2]。

圖2 A.胃癌患者DAB2IP表達(dá)的生存分析；B. 胃癌患者Twist表達(dá)的生存分析

3 討論

近年隨著飲食結(jié)構(gòu)改變、工作壓力的增大，胃癌患者發(fā)病逐漸呈年輕化趨勢(shì)。胃癌早期癥狀與胃炎、胃潰瘍等類似，易被忽略。DAB2IP已被證實(shí)屬于腫瘤抑制基因，有研究表明DAB2IP在肝癌患者中表達(dá)異常[5]。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤不良預(yù)后的重要原因，而上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。研究表明Twist可誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，且有研究顯示，Twist在胃癌中異常表達(dá)[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)觀察胃癌組織及其癌旁組織中DAB2IP和Twist蛋白表達(dá)，并分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

人DAB2IP基因定位于9q33.1～9q33.3。DAB2IP由2002年Chen等在酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中首次發(fā)現(xiàn)，表明DAB2IP通過與DAB2/DOC2的N端結(jié)合，作為DAB2信號(hào)通路的下游效應(yīng)分子。DAB2/DOC2是一種在絲裂原信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起連接作用的蛋白，在抑制腫瘤細(xì)胞生長方面具有重要意義[7]。Shen等[8]研究表明，DAB2IP在胃癌組織中低表達(dá)，敲除DAB2IP后胃癌細(xì)胞的體外生長與轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示胃癌組DAB2IP蛋白陽性率顯著低于癌旁正常組織，提示DAB2IP表達(dá)與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。觀察DAB2IP與臨床病特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：DAB2IP與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織分化程度、浸潤深度均有關(guān)，與高、中分化的癌組織相比，低分化組織DAB2IP陽性相對(duì)較低，與Ⅰ+Ⅱ期患者相比，Ⅲ+Ⅳ期患者DAB2IP的陽性率顯著降低，說明DAB2IP表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)。Kaplan-Meier法分析顯示DAB2IP陽性組總生存率顯著高于陰性組，提示DAB2IP表達(dá)與胃癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。

Twist在多種惡性腫瘤中均有高水平的表達(dá)，如小葉性乳腺癌、前列腺癌、肝細(xì)胞癌以及結(jié)直腸癌[9-12]。研究表明轉(zhuǎn)錄因子Twist可誘導(dǎo)上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，正常生理狀態(tài)下Twist處于“沉默”狀態(tài)，當(dāng)發(fā)生癌癥時(shí)被激活[13]。Twist的高表達(dá)導(dǎo)致E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附丟失、使間充質(zhì)標(biāo)志物活化，并增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲和遷移能力，促進(jìn)胃癌的浸潤與轉(zhuǎn)移[14]。Tao等[15]發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中Twist的高表達(dá)與腫瘤的侵襲能力及患者的預(yù)后有顯著相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，胃癌組織中Twist蛋白陽性率顯著高于癌旁正常組織，提示Twist與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。臨床病理特征的關(guān)系研究表明，Twist與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、浸潤深度均顯著相關(guān)，與嚴(yán)慧等在胃癌中的結(jié)果一致。Xu等通過細(xì)胞學(xué)研究證實(shí)Twist在具有低分化細(xì)胞株MKN45細(xì)胞內(nèi)呈高表達(dá)，而在人胃癌高分化細(xì)胞株MKN28細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平則較低，提示Twist可能與細(xì)胞的分化程度及轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)也表明低分化時(shí)，胃癌組陽性率顯著高于癌旁正常組織。Kaplan-Meier法分析顯示Twist陰性組總生存率顯著高于陽性組，提示Twist陽性不利于胃癌患者的預(yù)后。同時(shí)Spearman分析表明DAB2IP、Twist在胃癌組織呈負(fù)相關(guān)，結(jié)合兩者與臨床因素中的表達(dá)，推測(cè)胃癌的發(fā)生、發(fā)展可能是DAB2IP降低和Twist升高的共同作用結(jié)果，但兩者之間的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步分析。

綜上所述，胃癌組織中DAB2IP陽性率下降，Twist陽性率升高，DAB2IP、Twist與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。但本實(shí)驗(yàn)也存在一定不足，其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。