12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油高效液相色譜分析

毛健偉，劉 哲，袁 媛，劉建國，張錫珍，尹方坡

(吉林省農業技術推廣總站，吉林 長春 130033)

1 前言

氟唑菌酰胺是巴斯夫公司研發的酰胺類殺菌劑，其化學名稱為3-(二氟甲基)-1-甲基-N-(3，4，5-三氟[1，1-聯苯]-2-基)-1-吡唑-4-甲酰胺。其作用機制屬于琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑，具有防效高、防治病害多、持久性好、選擇性強等特點[1-2]，被應用于水稻、黃瓜、蘋果樹等作物上[3]。氟環唑是巴斯夫公司研發的三唑類殺菌劑，其化學名稱為(2RS，3RS)-1[-3-(2-氯苯基)-2，3-環氧-2-(4-氟苯基)丙基]-1氫-1，2，4-三唑。其活性成分氟環唑抑制病菌麥角甾醇的合成，阻礙病菌細胞壁的形成，被廣泛應用于水稻、香蕉、小麥等作物上[4-5]。12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油于2016年在我國由巴斯夫歐洲公司首次取得農藥登記證，用于防治水稻紋枯病及香蕉葉斑病[3]。

目前國內關于12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油的分析方法未見公開報道。本文采用高效液相色譜法對試樣中氟唑菌酰胺和氟環唑進行定量分析，該方法操作快速、簡便、準確，分離度和精密度均能達到定量分析的要求。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；水：超純水；磷酸：分析純；氟唑菌酰胺標準品(99.5%)；氟環唑標準品(98.0%)；12%氟菌·氟環唑乳油(其中氟唑菌酰胺含量6%、氟環唑含量6%)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1100，具有二極管陣列檢測器和自動進樣器，20μL定量環；Agilent色譜工作站；色譜柱：250mm ×4.6mm(id)不銹鋼柱 Eclipse Plus C18，5μm填充物；過濾器：濾膜0.45μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)；流量：0.8mL/min；柱溫：(30±2)℃；檢測波長：210nm；進樣體積：5μL，保留時間：氟唑菌酰胺約為4.4min，氟環唑約為4.8 min。氟唑菌酰胺和氟環唑標樣色譜圖(圖1)和12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油試樣的高效液相色譜圖(圖2)。

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的配制 稱取氟唑菌酰胺和氟環唑標樣各0.02g(精確至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。

2.4.2 試樣溶液的配置 稱取12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油試樣0.33g(精確至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，確認儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化﹤1.5%后，即可按標樣、試樣、試樣、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環唑)的峰面積分別進行平均。試樣中氟唑菌酰胺(氟環唑)的質量分數數ω(%)按下式計算[6]

式中：A1—標樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環唑)的峰面積平均值；

A2—試樣溶液中氟唑菌酰胺(氟環唑)的峰面積平均值；

m1—氟唑菌酰胺(氟環唑)標樣的質量，g；

m2—氟唑菌酰胺(氟環唑)試樣的質量，g；

P—標樣中氟唑菌酰胺(氟環唑)的質量分數，%。

3 結果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過Agilent 1100高效液相色譜儀的數據采集功能，對氟唑菌酰胺和氟環唑進行掃描，獲得其紫外波長吸收光譜圖(圖3)。可以看出，氟唑菌酰胺在190～200 nm 附近有最大吸收，后在230 nm處又出現較強吸收(圖3)。氟環唑在190～210 nm附近有最大吸收?？紤]到在 190～200 nm波長下，溶劑的干擾比較明顯，為減少干擾，故選擇檢測波長為210 nm。

色譜柱選擇常規的反相填料Eclipse Plus C18柱。依據氟唑菌酰胺、氟環唑物化性質，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動相，為了得到更好的分離效果和峰形，按流動相乙腈和水不同比例進行試驗，當流動相為：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)，流速0.8mL/min時，得到滿意的分析結果，即有效成分之間及雜質能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩，峰保留時間適宜。

3.2 分析方法的線性相關性試驗 準確稱取氟唑菌酰胺和氟環唑標準品0.022 8和0.020 4g(精確至0.000 2 g)于100mL容量瓶中，加入約80mL乙腈溶解，超聲10min，恢復至室溫后用乙腈稀釋定容，搖勻備用。按2.3色譜條件進行分析，進樣量分別為1、3、5、7、9μL，以質量濃度和峰面積進行線性回歸分析，得到氟唑菌酰胺線性方程為Y=4 894.106 91X+77.122 632，線性相關系數R2=0.999 7；氟環唑線性方程為Y=5 373.135 93X+156.555 28，線性相關系數R2=0.999 1。線性相關性具體試驗結果(表1)。

表1 分析方法的線性相關性試驗結果

3.3 分析方法的精密度試驗 對同一試驗樣品按照上述方法平行測定5次。測得氟唑菌酰胺和氟環唑標準偏差分別為0.02和0.02，變異系數分別為0.31%和0.32%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗結果

3.4 方法的準確度實驗 準確稱取5個一定量的試樣，分別加入10mL 2.4.1中配制的標樣溶液，在上述色譜操作條件下進行分析，測得氟唑菌酰胺的回收率為99.83%～100.34%，氟環唑的回收率為99.83%～101.09%(表3)。

表3 分析方法的準確度試驗結果

4 結論

本工作建立了一種便捷、快速、靈敏的分析方法測定12%氟唑菌酰胺·氟環唑乳油中有效成分含量，其測試濃度范圍內線性關系符合檢測要求，同時該檢測方法具有良好的準確度和精密度，是產品質量控制的有效可行的分析方法。