抗凝血酶III（AT III）測(cè)定試劑盒在Sysmex CS5100的性能驗(yàn)證

陳德祥，李程程

（1.大方縣中醫(yī)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，貴州 畢節(jié) 551600；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 產(chǎn)前診斷中心，貴州 貴陽(yáng) 550001）

0 引言

抗凝血酶III（Antithrombin III，AT III）由肝細(xì)胞分泌產(chǎn)生，是機(jī)體中主要的抗凝血因子，監(jiān)測(cè)抗凝血酶III的水平在臨床上有著極為重要的意義。根據(jù)ISO15189和美國(guó)《臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案》（CLIA’88）的規(guī)定，需要在使用新診斷試劑盒前對(duì)其各項(xiàng)性能指標(biāo)進(jìn)行逐一驗(yàn)證[1]。故本試驗(yàn)將對(duì)Sysmex抗凝血酶III測(cè)定試劑盒在我院Sysmex CS5100的性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，以判斷是否滿(mǎn)足試劑說(shuō)明書(shū)及相關(guān)法規(guī)的要求。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

根據(jù)WS/T406-2012[2]和CLSI EP文件制定性能驗(yàn)證方案。試劑與儀器:Sysmex抗凝血酶III測(cè)定試劑盒、Sysmex CS5100。

1.2 方法

（1）最低檢測(cè)限測(cè)定:采用同一批號(hào)試劑，重復(fù)測(cè)定接近零濃度樣本10次，計(jì)算變異系數(shù)（CV）值，以CV不大于10%為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（2）精密度測(cè)定:參考CLSI EP5-A2文件[3]和WS/T406-2012文件要求，批內(nèi)精密度測(cè)定采用同一批產(chǎn)品，測(cè)定兩個(gè)濃度水平的血漿標(biāo)本，要求其中一個(gè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果在參考值范圍，而另一個(gè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果為異常值。每個(gè)標(biāo)本連續(xù)重復(fù)測(cè)定11次，計(jì)算批內(nèi)精密度CV，以正常水平不高于6%，異常水平不高于12%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)；批間精密度測(cè)定采用同一批產(chǎn)品，測(cè)定兩個(gè)濃度水平的血漿樣本，連續(xù)測(cè)定20天，每天測(cè)一次，計(jì)算批間變異系數(shù)CV，以正常水平不高于9%，異常水平不高于15%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（3）正確度相對(duì)偏差:取10份參考區(qū)間內(nèi)的標(biāo)本，每個(gè)測(cè)2次，計(jì)算20次以上檢測(cè)結(jié)果的均值，以通過(guò)ISO 15189實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定均值為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算偏差，以不高于10%作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（4）線(xiàn)性范圍:選取一份接近預(yù)期上限的高濃度血漿（H），分別按100%、80%、60%、40%、20%和10%的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定2次，將實(shí)測(cè)值與理論值作比較，驗(yàn)證線(xiàn)性范圍。以試劑說(shuō)明書(shū)規(guī)定的R＞0.975，a=1±0.05為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（5）參考區(qū)間:參考NCCLS C28-A2文件[4]，選擇20個(gè)能夠代表實(shí)驗(yàn)室的健康總體的樣本進(jìn)行測(cè)試，20個(gè)參考個(gè)體的檢測(cè)值在驗(yàn)證參考區(qū)間之外的樣本應(yīng)不超過(guò)1例。

1.3 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Microsoft 2013及SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用K-S正態(tài)分布檢驗(yàn)來(lái)檢查數(shù)據(jù)正態(tài)性，以P＞0.05表示數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，正態(tài)分布資料以（）表示。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05表示相關(guān)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。線(xiàn)性回歸采用簡(jiǎn)單線(xiàn)性回歸分析，P＜0.05表示回歸具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 最低檢測(cè)限測(cè)定

重復(fù)檢測(cè)接近零濃度的樣本10次，結(jié)果分別為16%、14%、14.8%、14.9%、14.1%、14.7%、14.8%、13.7%、15.6%、14.5%，CV=4.78%，CV ≤10%，符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定，驗(yàn)證通過(guò)。

2.2 精密度測(cè)定

結(jié)果如表1所示，批內(nèi)精密度測(cè)定兩個(gè)濃度水平的CV分別為0.44%、0.89%，均分別小于6%和12%；批間精密度兩個(gè)濃度水平的CV分別為為4.34%、6.14%，均分別小于9%和15%。以上結(jié)果說(shuō)明精密度驗(yàn)證通過(guò)。

表1 精密度的測(cè)定

2.3 正確度相對(duì)偏差測(cè)定

如表2所示，以比對(duì)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，得出的相對(duì)偏差小于規(guī)定值10%，驗(yàn)證通過(guò)。

2.4 線(xiàn)性范圍測(cè)定

如表3所示，在7.7-96.25%區(qū)間內(nèi)，獲得線(xiàn)性回歸方程y=0.9585x+1.1552，相關(guān)系數(shù)r=0.9985，a=0.9585，均符合試劑說(shuō)明書(shū)規(guī)定的r＞0.975，a=1±0.05。

2.5 參考區(qū)間

表2 正確度相對(duì)偏差測(cè)定

表3 線(xiàn)性范圍驗(yàn)證

如表4所示，超出參考區(qū)間的樣本數(shù)為1例（參考范圍:75-125%），符合說(shuō)明書(shū)規(guī)定，驗(yàn)證通過(guò)。

表4 參考區(qū)間驗(yàn)證

3 討論

檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性是對(duì)所有臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的基本要求，也是所有臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所必須重視的。為了獲得準(zhǔn)確和可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，檢驗(yàn)科在引入新的檢測(cè)試劑時(shí)，即使試劑廠商已提供了符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的性能檢測(cè)指標(biāo)，也要在實(shí)驗(yàn)室對(duì)試劑進(jìn)行性能驗(yàn)證[5]。

本試驗(yàn)對(duì)我檢驗(yàn)科新引入的Sysmex AT III進(jìn)行最低檢測(cè)限、精密度、正確度、線(xiàn)性范圍及參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，以判斷該試劑是否滿(mǎn)足要求。結(jié)果表明，該檢測(cè)試劑盒各項(xiàng)性能指標(biāo)均符合產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。說(shuō)明Sysmex AT III檢測(cè)試劑在Sysmex CS5100全自動(dòng)凝血分析儀上表現(xiàn)出較好的性能狀態(tài)，能滿(mǎn)足醫(yī)院臨床需求。