藥效學實驗結合正交試驗優選壯藥柏金顆粒的水提醇沉工藝

張雅 王一喬 馬卓雅 梅之南 滕紅麗

摘 要 目的：優選壯藥柏金顆粒的最佳水提醇沉工藝。方法：采用高效液相色譜法測定柏金顆粒組方藥材中提取物中巖白菜素的含量。以浸膏得率結合小鼠降尿酸實驗，初步篩選柏金顆粒的提取工藝路線（水煎煮、70%乙醇回流提取、水煎煮結合70%乙醇回流提取）。以浸膏得率和巖白菜素含量為指標，首先采用正交試驗考察加水量、提取時間、提取次數等3個因素的影響，優化柏金顆粒的最佳水提工藝并進行驗證試驗;然后采用正交試驗考察藥液相對密度、含醇量、醇沉時間等3個因素的影響，優選柏金顆粒的最佳醇沉工藝并進行驗證試驗。通過小鼠降尿酸實驗，比較醇沉處理前后柏金顆粒組方藥材提取物的效果差異。結果：所建立的巖白菜素含量測定方法的線性范圍為0.007 2～0.288 mg/mL，精密度、重復性、穩定性和準確度均良好。柏金顆粒的提取工藝初步篩選為水煎煮提取;最佳水提工藝為加入14倍量（mL/g）水，浸泡0.5 h后，煎煮提取3次，每次1.0 h;最佳醇沉工藝為水提液濃縮至相對密度1.0 g/mL，藥液含醇量60%，醇沉時間12 h;驗證試驗均顯示，所得浸膏得率及其巖白菜素含量的RSD均小于2%（n=3）。藥效學實驗結果顯示，水提物（醇沉前）和水提醇沉物（醇沉后）均能顯著降低高尿酸血癥模型小鼠的尿酸水平（P<0.01），且兩者降尿酸效果比較差異無統計學意義（P>0.05）。結論：采用優化的水提工藝可獲得干浸膏得率和巖白菜素含量均較高的提取物，結合醇沉工藝除雜不影響其藥效。該優化水提醇沉工藝可行，可用于柏金顆粒組方藥材的提取、除雜。

關鍵詞 壯藥;柏金顆粒;水提取;醇沉;正交試驗;藥效學;巖白菜素;高尿酸血癥

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To optimize the water extraction and ethanol precipitation technology of Zhuang medicine Baijin granules. METHODS： HPLC method was adopted to determine the content of bergenin in Baijin granules extract. The extraction routes of Baijin granules （water decoction， 70% ethanol reflux extraction， water decoction combined with 70% ethanol reflux extraction） was screened primarily with the yield of extract and the experiment of reducing uric acid of mice. The orthogonal test was adopted to optimize water extraction technology of Baijin granules with water multiple，extraction time and extraction times as factors， taking the extraction yield and the bergenin content as index， then the validation test was carried out. The orthogonal test was adopted to optimize the alcohol precipitation process of Baijin granules including the relative density of medicinal materials，alcohol content and the alcohol precipitation time， then the validation test was carried out. By the experiment of reducing uric acid， the effects of medicinal materials extract of Baijin granules extract were compared before and after ethanol precipitation. RESLUTS： Established method for content determination of bergenin with linearity range? of 0.007 2-0.288 mg/mL， had good precision， reproducibility， stability and accuracy. The initially chosen extraction process of Baijin granules was water decoction extraction. The optimal water extraction technology was soaked for 0.5 h， then decocted for 3 times with 14-fold water （mL/g） and 1.0 h each time. The optimal ethanol precipitation process was to concentrate the water extract to a relative density of 1.0 g/mL with alcohol content of liquid at 60% and precipitated for 12 h. Validation tests showed that RSDs of extract yield and beragenin content were all lower than 2% （n=3）. The experiment of pharmacodynamics showed that water extract （before ethanol precipitation） and water extract after alcohol precipitation could significantly decrease the level of uric acid in hyperuricemia model mice （P<0.01）. There was no statistical significance in the reduction of uric acid between 2 groups （P>0.05）. CONCLUSIONS： The optimized water extraction technology can obtain good extract yield and bergenin content， and combined with ethanol precipitation technology for removing excess impurities would not affect the pharmacodynamics. The water extraction and ethanol precipitation technology is feasible， and can be used for extracting the medicinal materials of? Baijin granules and its edulcoration.

KEYWORDS? ?Zhuang medicine; Baijin granules; Water extraction;Ethanol precipitation;Orthogonal test; Pharmacodynamics; Bergenin; Hyperuricemia

高尿酸血癥（Hyperuricemia）是一種以血尿酸升高為特征的代謝疾病，在臨床上表現為血尿酸水平高于正常范圍（男性為420 μmol/L，女性為350 μmol/L）的異常機體狀態[1]，也是導致高血壓、高血脂、冠心病等發生的重要原因之一[2-4]，對人類健康的威脅日益加深。柏金方為廣西國際壯醫醫院的臨床經驗方，由石上柏7.5 g、鐵包金5 g、小葉金花草5 g、土茯苓5 g、蘇木5 g、廣金錢草7.5 g、益母草7.5 g、白茅根15 g、葫蘆茶5 g、矮地茶5 g、木賊15 g、甘草2.5 g共12味藥材組成，經該院多年臨床驗證適用于高尿酸血癥的治療，療效顯著。本方以壯醫藥學理論為指導，通過主藥、幫藥、帶藥進行組方，具有多靶點、多環節、整體性調節機體的特點[5-6]。方中石上柏、鐵包金、小葉金花草等3味為主藥，合用可通龍路、調氣道、解熱毒;土茯苓、蘇木、廣金錢草、益母草、白茅根、葫蘆茶、矮地茶、木賊等8味為幫藥，有加強主藥清熱除濕祛風之功效，通調三道兩路;再佐以甘草調和解毒，是為帶藥[5-7]。

柏金方原為煎煮湯劑，但湯劑存在煎煮過程繁瑣、不便于攜帶和保存、服用量大等缺點。為了解決這些問題并提高患者用藥依從性，本課題組擬對柏金方進行改進和優化，將其研制成顆粒劑。本研究以該方組方藥材提取物的浸膏得率和具有明確的抗高尿酸活性的巖白菜素（矮地茶主要活性成分[8]）的含量為指標，在單因素試驗的基礎上，采取正交設計結合藥效學實驗優選出柏金顆粒的最佳水提工藝，并采用正交設計優選出最佳醇沉工藝，再考察醇沉法除去雜質的過程對其藥效作用的影響，最終確定柏金顆粒的最佳水提醇沉工藝，為后續該顆粒劑的進一步研發提供基礎。

1 材料

1.1 儀器

1260型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司）;RE-52A型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）;SHB-Ⅲ型循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）;DGF-4AB型立式電熱鼓風干燥箱、98-1-B型電子控溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）;KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;JA2003N型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）;CP21型電子天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司];1510型全波長酶標儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司];TGL-16A型醫用離心機（湖南平凡科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

白茅根、矮地茶、木賊等3味藥材飲片均購自廣西仙茱中藥科技有限公司（批號分別為20180801、20171001、20181001）;石上柏、鐵包金、葫蘆茶、小葉金花草、土茯苓、廣金錢草、甘草、益母草、蘇木等9味藥材飲片均購自廣西華夏藥源藥業有限公司（批號分別為190101、190101、190101、190101、180601、190101、181101、190101、190101）。以上藥材飲片經中南民族大學藥學院劉新橋教授鑒定，均為真品。其中，葫蘆茶符合1977年版《中國藥典》（一部）的相關標準[9]，石上柏、鐵包金符合2011年版《廣西壯族自治區壯藥質量標準（第2卷）》的相關標準[5]，小葉金花草符合2018年版《廣西壯族自治區壯藥質量標準》（第3卷）的相關標準[10]，其余藥材均符合2015年版《中國藥典》（一部）的相關標準[7]。

巖白菜素對照品（批號：Y24A8Y17096，純度：≥98%）、氧嗪酸鉀（批號：R10J8X39379，純度：>98%）、別嘌醇（陽性對照，批號：Y27O8C46913，純度：>98%）均購自上海源葉生物科技有限公司;尿酸檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20181017）;酵母膏（北京奧博星生物技術有限責任公司，批號：20180328）;羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，國藥集團化學試劑有限公司，化學純，批號：20140520）;0.9%氯化鈉注射液（武漢濱湖雙鶴藥業有限責任公司，批號：1807110908，規格：500 mL ∶ 4.5 g）;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 動物

SPF級ICR小鼠，雄性，體質量18～20 g，購自遼寧長生生物技術股份有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（遼）2015-0001。

2 方法與結果

2.1 柏金顆粒組方藥材提取物中巖白菜素的含量測定

參照文獻方法[11]，采用HPLC法測定柏金顆粒干浸膏中巖白菜素的含量。

2.1.1 柏金顆粒干浸膏的制備 按柏金方處方比例，稱取藥材飲片共200 g，按照相應工藝提取后，在70 ℃條件下將提取液減壓濃縮至清膏;將上述清膏在80 ℃的條件下烘干成干浸膏，置于干燥器中冷卻1 h，稱定質量，研磨，過三號篩，備用。

2.1.2 對照品溶液的制備 取巖白菜素對照品適量，精密稱定，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.05 mg巖白菜素的對照品溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取“2.1.1”項下所得柏金顆粒干浸膏粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲（功率：200 W，頻率：40 kHz）處理40 min，放冷，再次稱定，用甲醇補足減失的質量，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.1.4 缺矮地茶陰性樣品溶液的制備 根據處方比例稱取除矮地茶外的其余藥材，按“2.1.1”項下方法制得陰性干浸膏粉末，再按“2.1.3”項下方法制成缺矮地茶陰性樣品溶液。

2.1.5 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Agilent Pursuit 5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：甲醇-水（15 ∶ 85，V/V）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：275 nm;柱溫：25 ℃;進樣量：5 μL。取“2.1.2”～“2.1.4” 項下對照品溶液、供試品溶液、缺矮地茶陰性樣品溶液進樣分析，記錄色譜圖，詳見圖1。結果，各色譜峰分離良好，理論板數按巖白菜素峰計算不低于1 500，陰性樣品不干擾測定，表明方法適用性良好。

2.1.6 線性關系考察 精密稱取巖白菜素對照品0.018 0 g，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇制成質量濃度為0.36 mg/mL的對照品貯備液。分別精密吸取該對照品貯備液0.2、1、2、4、6、8 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以巖白菜素質量濃度為橫坐標（x）、色譜峰面積為縱坐標（y）繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=6.966x+3.685 8（r=0.999 9）。結果表明，巖白菜素檢測質量濃度的線性范圍為0.007 2～0.288 mg/mL。

2.1.7 精密度試驗 取“2.1.2”項下對照品溶液適量，按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定6次，記錄色譜圖。結果，巖白菜素峰面積的RSD為0.81%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.8 重復性試驗 精密稱取同一批柏金顆粒干浸膏粉末（編號：180101）約0.4 g，共6份，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法計算巖白菜素含量。結果，巖白菜素的平均含量為3.157 mg/g（RSD=1.43%，n=6），表明該方法重復性良好。

2.1.9 穩定性試驗 取同一供試品溶液（編號：180101），分別于室溫放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時，按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果，巖白菜素峰面積的RSD為1.87%（n=8），表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性良好。

2.1.10 加樣回收率試驗 稱取已知巖白菜素含量的干浸膏粉末（編號：180101）約0.1 g，共6份，精密稱定，分別精密加入“2.1.6”項下0.288 mg/mL的巖白菜素對照品溶液1.0 mL，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，計算加樣回收率。結果，巖白菜素的平均加樣回收率為98.12%（RSD=2.08%，n=6），表明該方法準確度良好。

2.1.11 干浸膏樣品的含量測定 精密稱取柏金顆粒提取干浸膏樣品適量，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.5”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法計算巖白菜素含量。每批樣品平行測定2次，取平均值作為測定結果。

2.2 柏金顆粒提取工藝路線的初步篩選

2.2.1 提取工藝路線的設計 根據文獻報道，本方藥材提取中主要有水煎煮提取和乙醇回流提取方法[12-15]，本研究以此為基礎，初步篩選設計了3條工藝路線。（1）工藝Ⅰ：方中所有藥材混合后，加入14倍量（mL/g，下同）水煎煮提取2次，每次1 h，合并提取液。（2）工藝Ⅱ：方中所有藥材混合后，加入14倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液。（3）工藝Ⅲ：將石上柏、益母草混合后，加入14倍量水煎煮提取2次;其余藥材混合后，加入14倍量70%乙醇回流提取2次，每次均為1 h，合并提取液。

2.2.2 不同提取工藝浸膏得率的比較 根據處方比例稱取全部藥材的混合物200 g，共9份，先用水浸泡0.5 h后，分別按“2.2.1”項下3種工藝路線提取，每種工藝平行3份。所得提取液在70 ℃下減壓濃縮成清膏后，轉移至已稱定質量的蒸發皿中，在80 ℃下干燥至恒定質量，再置于干燥器中冷卻1 h，稱定質量，計算浸膏得率。結果，按平均浸膏得率高低排序依次為：工藝Ⅰ>工藝Ⅲ>工藝Ⅱ，即將所有藥材混合后加水提取獲得的浸膏得率最高，詳見表1。

2.2.3 不同提取工藝提取物的降尿酸作用比較 采用酵母膏灌胃聯合氧嗪酸鉀腹腔注射法建立高尿酸小鼠模型[16-18]。選取小鼠48只，隨機分為陰性對照組、模型組、陽性對照組和工藝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ提取物組（分別選用180101、180201、180301批樣品給藥），每組8只。各組小鼠均按體質量灌胃或注射給藥。陰性對照組小鼠每天上午9點、下午3點（以下同）各灌胃1次相應體積的水;模型組和各給藥組小鼠每天上午均灌胃酵母膏水溶液（10 g/kg），灌胃體積為20 mL/（kg·d）;模型組和陽性對照組小鼠每天下午灌胃水10 mL/（kg·d）;工藝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ提取物組小鼠每天下午灌胃“2.2.2”項下3種不同工藝提取物水溶液[其中，180101批樣品劑量為3.762 g/kg（人日服生藥量為1.21 g/kg，以臨床2倍劑量換算成小鼠的灌胃生藥量為22 g/kg[19]，再以浸膏得率計算，即得，下同）;180201批樣品劑量為3.612 g/kg;180301批樣品劑量為3.711 g/kg]，灌胃體積均為10 mL/（kg·d）。各組小鼠連續灌胃7 d。于第8天時，小鼠提前禁食不禁水12 h，稱定體質量后，陰性對照組小鼠腹腔注射0.8%CMC-Na溶液15 mL/kg，模型組和各給藥組小鼠腹腔注射氧嗪酸鉀溶液（600 mg/kg，以0.8%CMC-Na溶液為溶劑）15 mL/kg。腹腔注射1 h后，陽性對照組小鼠一次性灌胃別嘌醇混懸液（0.005 g/kg[20]，以0.8%CMC-Na溶液為溶劑），工藝Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ提取物組小鼠則分別最后一次灌胃3種不同工藝提取物水溶液，灌胃體積均為10 mL/（kg·d）。末次給藥結束后1 h時，于小鼠眼眶靜脈叢采血，靜置1 h，以4 000 r/min離心10 min，取上清液，按尿酸試劑盒說明書操作，并采用酶標儀測定血清中尿酸水平。采用SPSS 19.0統計學軟件處理所得數據，以P<0.05為差異有統計學意義，結果見表2。

由表2結果可知，與陰性對照組相比，模型組小鼠血清尿酸水平顯著升高（P<0.01），表明高尿酸模型復制成功;與模型組比較，各給藥組小鼠血清尿酸水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），即3種工藝提取物對高尿酸模型小鼠均有顯著的降尿酸效果。

2.2.4 提取工藝初步篩選分析結果 結合“2.2.2”“2.2.3”項下浸膏得率和小鼠藥效學實驗結果可知，工藝Ⅰ浸膏得率最高，3種工藝提取物對高尿酸模型小鼠均具有顯著的降尿酸效果。本課題組考慮到乙醇作為提取溶劑雖然沒有毒性，但是提取物中葉綠素含量較高，且后續純化工作復雜[13]，再結合生產實際，因此選擇工藝Ⅰ作為本研究的提取工藝，即所有藥材混合后以水進行煎煮提取。

2.3 正交設計優選柏金顆粒的水提工藝

2.3.1 正交設計與試驗 在前期單因素考察的基礎上，以浸膏得率、巖白菜素含量為評價指標[21-22]，以加水倍量（A，mL/g）、提取時間（B，h）、提取次數（C，次）為因素，按處方比例稱取9份藥材混合物，每份200 g，采用L9（34）表進行正交試驗設計。水提工藝因素與水平見表3，正交試驗設計與結果見表4，方差分析結果見表5。

由表4、表5可見，以浸膏得率為考察指標，各因素影響作用大小排序為C>A>B，其中因素C對浸膏得率的影響有統計學意義（P<0.05），因素A、B的影響則無統計學意義（P>0.05）;以巖白菜素含量為考察指標，各因素影響作用大小排序為C>B>A，但這3個因素對巖白菜素含量的影響均無統計學意義（P>0.05）。綜合考慮后，優選出最佳工藝為A2B1C3，即加入14倍量的水，煎煮提取3次，每次1.0 h。

2.3.2 水提工藝驗證 按照處方比例，稱取藥材混合物100 g，按照“2.3.1”項下優選的最佳水提工藝加水浸泡0.5 h后，煎煮提取，合并提取液，旋轉減壓蒸發濃縮至清膏后轉入已稱定質量的蒸發皿中，在80 ℃下烘干成干浸膏，置于干燥器中冷卻1 h，稱定質量，計算浸膏得率，并按“2.1.11”項下方法評定巖白菜素含量。平行操作3次。結果，平均浸膏得率為20.48%（RSD=1.53%，n=3），平均巖白菜素含量為3.144 mg/g（RSD=1.26%，n=3），表明優選的水提取工藝穩定、可行。

2.4 柏金顆粒的醇沉工藝優化

2.4.1 醇沉提取物的制備 按處方比例稱取各藥材飲片，按照“2.3”項下優選的最佳水提工藝進行提取，濃縮至一定密度，再根據一定工藝進行醇沉，抽濾，將濾液減壓濃縮至清膏后轉入已稱定質量的蒸發皿中，在80 ℃下烘干成干浸膏，置于干燥器中冷卻1 h，稱定質量，計算浸膏得率，研磨，過三號篩，備用。

2.4.2 正交試驗優化醇沉工藝 在前期單因素考察的基礎上，以浸膏得率、巖白菜素含量為評價指標，選定藥液相對密度[A，g/mL（以生藥量計）]、含醇量（B，%）、醇沉時間（C，h）為考察因素[21-22]，采用L9（34）表進行正交試驗。醇沉工藝因素與水平見表6，正交試驗設計與結果見表7，方差分析結果見表8。

由表7、表8可見，以浸膏得率為考察指標，各因素影響作用大小排序為B>A>C，但這3個因素對醇沉效果的影響均無統計學意義（P>0.05）;以巖白菜素含量為考察指標，各因素影響作用大小排序為C>A>B，其中因素C對醇沉效果的影響有統計學意義（P<0.05），而因素A、B的影響則無統計學意義（P>0.05）。綜合考慮，優選出最佳醇沉工藝為A2B1C1，即水提液濃縮至相對密度為1.0 g/mL，藥液含醇量為60%，醇沉時間為12 h。

2.4.3 醇沉工藝驗證 按照處方比例，稱取藥材混合物100 g，按“2.3”項下優選的最佳水提工藝進行提取后，再按“2.4.2”優選的最佳醇沉工藝進行醇沉處理后，抽濾，將濾液旋轉減壓蒸發濃縮至清膏后轉入已稱定質量的蒸發皿中，在80 ℃下烘干成干浸膏，置于干燥器中冷卻1 h，稱定質量，計算浸膏得率并按“2.1.11”項下方法測定巖白菜素含量。平行操作3次。結果，平均浸膏得率為11.01%（RSD=1.77%，n=3），平均巖白菜素含量為3.634 mg/g（RSD=1.60%，n=3），表明優選的醇沉工藝穩定、可行。

2.5 藥效學實驗比較柏金顆粒提取工藝醇沉處理前后的差異

取小鼠40只，隨機分為陰性對照組、模型組、陽性對照組、水提物組、水提醇沉物組，每組8只。按照“2.2.3”下方法進行造模和給藥。其中，水提物組灌胃劑量為4.52 g/kg，水提醇沉物組大鼠灌胃劑量為2.39 g/kg（均以提取物計算，按不同工藝得率換算后相當于等量生藥材），灌胃體積均為10 mL/（kg·d）。同法測定大鼠血清中尿酸水平并進行統計學比較，結果見表9。

由表9可知，與陰性對照組比較，模型組小鼠血清尿酸水平顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組小鼠血清尿酸水平均顯著降低（P<0.01），且水提物組與水提醇沉物組小鼠尿酸水平比較差異無統計學意義（P>0.05），即醇沉處理后提取物藥效并未受到影響，因此選擇水提醇沉法作為本方的最佳提取工藝。

3 討論

3.1 藥效學模型的建立

本研究在前期藥效學預實驗中嘗試過不同造模劑誘導的高尿酸血癥小鼠模型[23-24]：腺嘌呤聯合乙胺丁醇、次黃嘌呤聯合氧嗪酸鉀、酵母膏聯合氧嗪酸鉀;也比較過誘導7 d和誘導14 d對小鼠尿酸水平的影響。經過對比后發現，酵母膏聯合氧嗪酸鉀誘導7 d可復制出較為穩定的高尿酸小鼠模型，且對小鼠腎功能影響較小，因此本研究最終選擇酵母膏灌胃聯合氧嗪酸鉀腹腔注射的造模方法。

3.2 工藝優化中評價指標的選擇

柏金方中含有黃酮類、生物堿類、香豆素類等多種類型化學成分[25-27]，但是有關其治療高尿酸血癥的有效成分研究較少。根據文獻記載，目前比較明確的是矮地茶中的巖白菜素和土茯苓中的落新婦苷為降尿酸的主要有效成分[7]，二者對黃嘌呤氧化酶均有抑制活性，能促進腎臟尿酸排泄、改善腎功能，而黃嘌呤氧化酶是尿酸生成的關鍵酶[8，28]。然而前期研究發現，本方中含有落新婦苷、夏佛塔苷、芹菜素、槲皮素等大量黃酮類成分，彼此干擾很大，較難建立專屬性強、穩定性好的HPLC分析檢測方法。因此，本課題最終選取巖白菜素作為矮地茶藥材的含量測定指標。此外，干浸膏是復方制劑中發揮臨床作用的物質基礎，浸膏得率的高低可在很大程度上反映出制劑工藝的優劣。因此，本研究最終選擇浸膏得率和巖白菜素含量作為正交試驗的評價指標。

3.3 制劑工藝的篩選及優化

本研究在預試驗中對預浸泡時間、加水量、提取時間、提取次數進行了單因素考察，發現浸泡時間對浸膏得率并無影響，因此并未將其納入正交設計的因素篩選范圍，而是按照中藥材常規提取流程進行預浸泡0.5 h。本研究選取藥效學作為評價指標，結合浸膏得率和巖白菜素含量進行提取工藝的初步篩選，確定全方采用水提工藝后，再通過正交試驗優選出最佳的水提工藝。由于水提物中含有鞣質、淀粉等大量雜質，為了富集有效成分、降低出膏率，減少患者每日服用量，本課題組考慮在不影響藥效的情況下，采取醇沉法除去多余雜質，在借助正交試驗優化最佳醇沉工藝的基礎上，采用藥效學實驗比較醇沉前后提取物的降尿酸作用。結果顯示，醇沉工藝對其降尿酸藥效作用無顯著影響。綜上，優化的水提醇沉工藝可用于柏金顆粒組方藥材的提取、除雜。

參考文獻

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（收稿日期：2019-11-04 修回日期：2020-03-13）

（編輯：段思怡）