不同臨床病理特征涎腺黏液表皮樣癌中CEACAM 5與PCNA的表達及對預后的影響

馬 賽，安 峰*，劉振麗，張 璇，劉 博，張 慧

(1.河北北方學院附屬第一醫院口腔科，河北 張家口 075000；2.河北北方學院附屬第一醫院病理科，河北 張家口 075000)

涎腺黏液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma，MEC)是口腔頜面外科常見的一類惡性腫瘤，在我國北方地區發病率在口腔頜面部惡性腫瘤中位居第二[1]。癌胚抗原相關細胞黏附分子 5(carcinoembryonic antigenrelated cell adhesion molecule 5，CEACAM 5)是一種存在于哺乳動物細胞表面和細胞膜上的跨膜糖蛋白。CEACAM 1、CEACAM 6等癌胚抗原家族成員均參與惡性腫瘤的發生、發展，其表達水平直接影響腫瘤的生物學行為[2]。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)能夠反映脫氧核糖核酸生成的情況，評價細胞增殖速度，故普遍認為PCNA可以用來評價細胞的增殖活性[3]。故本研究采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶連接(streptavidin-perosidase，SP)法檢測不同臨床病理特征涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA的表達情況及其對臨床預后的影響，以期進一步提高臨床對涎腺MEC的認識。報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2004年5月—2015 年9月河北北方學院附屬第一醫院收治的涎腺MEC患者石蠟標本55例為MEC組，男性27例，女性28例，年齡15～80歲，中位年齡56歲。所有病例均有病理確診并臨床及隨訪資料完整。治療方式均為擴大切除原發灶手術，有頸淋巴結轉移者行頸淋巴結清掃術；所有病例術前均未接受放療、化療及免疫治療等。病理標本均由2名資深病理科醫師分別按照WHO 2005年涎腺腫瘤組織分類法進行診斷確認。另選取與手術同期切取的涎腺多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)組織30例作為SPA組，癌旁正常涎腺組織30例作為對照組。SPA組男性13例，女性17例，年齡22～67歲，中位年齡55歲。對照組男性14例，女性16例，年齡20～73歲，中位年齡56 歲。 3組性別、年齡差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過。

1.2標本處理及檢測方法 所有石蠟標本均嚴格按照免疫組織化學SP法處理。鼠抗人CEACAM 5單克隆抗體購于PTG公司，鼠抗人PCNA單克隆抗體購自R&D公司，SP試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3結果判定 細胞質內或細胞膜上出現棕黃色顆粒為CEACAM 5表達陽性，細胞核內出現黃色或棕色顆粒為PCNA表達陽性。參考相關文獻，并結合以往經驗，本研究以細胞染色程度及染色細胞百分率來對標本做出評定[4-5]。染色程度：基本無著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分；染色細胞百分率：無為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。染色程度得分與染色細胞百分率得分相乘：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為陽性(++)，6分以上為強陽性(+++)，將陰性和弱陽性表達定義為陰性組，陽性和強陽性表達定義為陽性組。

1.4隨訪及預后 所有患者的隨訪時間均以術后第2天開始統計，患者出院時均被告知定期來醫院復查，以便記錄隨訪結果，對于未能按時復診的患者采取電話隨訪的方式了解患者情況。失訪患者的最后觀察時間按最后一次來院復查時間為準。本研究最后觀察日期為2019年6月。

1.5統計學方法 應用SPSS 17.0統計軟件分析數據。計數資料比較采用χ2檢驗，相關性采用Spearmen檢驗，采用Kaplan-Meier分析并繪制生存曲線，應用Log-rank檢驗差異性。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.13組CEACAM 5與PCNA表達情況比較 在MEC組、SPA組及對照組中，CEACAM 5與PCNA分別呈棕黃色顆粒狀表達于細胞胞質和細胞核中(圖1～6)。MEC組CEACAM 5、PCNA表達陽性率明顯高于SPA組和對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 3組CEACAM 5與PCNA表達陽性率比較Table 1 Comparison of the positive expression of CEACAM 5 and PCNA among three groups (例數，%)

*P值<0.05與MEC組比較(χ2檢驗)

圖1 CEACAM 5在MEC組織中的表達(SP ×200)

Figure 1 Expression of CEACAM 5 in mucoepidermoid carcinoma(SP ×200)

圖2 CEACAM 5在SPA組織中的表達(SP ×200)

Figure 2 Expression of CEACAM 5 in salivary pleomorphic adenoma(SP ×200)

圖3 CEACAM 5在正常涎腺組織中的表達(SP ×200)

Figure 3 Expression of CEACAM 5 in normal salivary gland(SP ×200)

圖4 PCNA在MEC組織中的表達(SP ×200)

Figure 4 Expression of PCNA in mucoepidermoid carcinoma(SP ×200)

圖5 PCNA在SPA組織中的表達(SP ×200)

Figure 5 Expression of PCNA in salivary pleomorphic adenoma(SP ×200)

圖6 PCNA在正常涎腺組織中的表達(SP ×200)

Figure 6 Expression of PCNA in normal salivary gland(SP ×200)

2.2不同臨床病理特征涎腺MEC組織中CEACAM 5與PCNA的表達情況比較 病理分級Ⅲ級涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于病理分級Ⅰ+Ⅱ級，TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結轉移涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率均明顯高于無淋巴結轉移者,差異有統計學意義(P<0.01)；不同性別、年齡、部位涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA表達陽性率差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征涎腺MEC中CEACAM 5、PCNA的表達情況比較Table 2 Comparison of CEACAM 5 and PCNA expression and clinicopathological characteritics in MEC of salivary glands (例數，%)

2.3涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA表達的相關性 涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA的表達呈正相關(P<0.05)。見表3。

表3 在涎腺MEC組織中CEACAM 5和PCNA 表達的相關性Table 3 Correlation of the expression of CEACAM 5 and PCNA in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands (n=55,例數)

2.4涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA的表達對臨床預后的影響 55例涎腺MEC患者隨訪時間為42～121個月，平均隨訪時間79個月，失訪9例，其中因MEC因素死亡14例，死于其他原因3例。所有隨訪患者的病理標本中CEACAM 5、PCNA表達陽性者術后的平均生存時間分別為(78.921±3.090)個月、(78.762±3.239)個月，中位生存時間分別為(81.000±5.552)個月、(77.000±6.422)個月，CEACAM 5、PCNA表達陰性者術后的平均生存時間分別為(94.773±1.813)個月、(94.391±1.801)個月，中位生存時間為(95.000±1.868)個月、(95.000±2.377)個月，CEACAM 5與PCNA表達陰性者的生存時間均明顯長于表達陽性者(P<0.05)。見圖7，8。

圖7 CEACAM 5表達陽性/陰性組生存曲線

Figure 7 The survival curve of the positive/negative expression groups of CEACAM 5

圖8 PCNA表達陽性/陰性組生存曲線

Figure 8 The survival curve of the positive/negative expression groups of PCNA

3 討 論

CEACAM 5基因又稱為CD66e，其表達產物為CEACAM 5蛋白。CEACAM 5蛋白是一種黏附在細胞膜表面的跨膜糖蛋白分子。在正常組織內，細胞間黏附分子表達水平的改變可使細胞與細胞之間的緊密連接關系發生變化，而在惡性腫瘤組織內這種變化通過其抗失巢凋亡的功能影響著惡性腫瘤的分化和侵襲[6]。在胃腸、胰腺等部位惡性腫瘤的研究中發現，CEACAM 5參與了多種惡性腫瘤的惡性化進程，腫瘤組織中CEACAM 5的表達水平與患者的生存時間密切相關[7-9]；另外，CEACAM 5在腫瘤細胞內表達于細胞膜時對良、惡性腫瘤的鑒別意義更大，而當CEACAM 5表達于細胞質內時對腫瘤的浸潤和轉移有較強的指向作用。為了了解CEACAM 5在涎腺MEC的診斷與預后評估方面是否也能發揮作用，本研究檢測了CEACAM 5在涎腺MEC組織中的表達情況，結果證實涎腺MEC組織中CEACAM 5的表達水平明顯高于SPA組和對照組，其表達水平高標志著腫瘤的惡性程度高、浸潤性強、轉移的潛能強。通過分析CEACAM 5蛋白的表達情況與患者生存時間的關系，證實了CEACAM 5蛋白低表達患者的預后明顯好于高表達患者。說明在涎腺MEC組織中CEACAM 5基因同樣發揮著促癌基因的作用。

惡性腫瘤的增殖活性能夠反映其惡性程度，故細胞的增殖活性評估是臨床對惡性腫瘤組織學分級的重要依據。PCNA是一種只存在于增殖期細胞內的多肽，PCNA的表達水平可以反映細胞增殖能力和所處的細胞周期。因此，臨床病理學中把檢測PCNA的表達水平作為評價惡性腫瘤惡性程度和增殖潛能的重要手段[10-13]。本研究檢測了PCNA在涎腺MEC組織中的表達情況，結果證實涎腺MEC組織中PCNA的表達水平明顯高于SPA組和對照組，其表達水平與MEC的惡性程度、浸潤性、轉移潛能呈正比。已有研究顯示，PCNA在卵巢癌癌、肺癌、骨肉瘤等腫瘤組織內的表達水平越高，患者的臨床預后越差，生存時間越短[14-15]。本研究分析了PCNA表達與涎腺MEC患者生存時間的關系，研究結果與以往結果一致。通過分析CEACAM 5與PCNA表達的相關性發現，在涎腺MEC中CEACAM 5與PCNA的表達呈正相關，對腫瘤的增殖起到協同作用，說明調節細胞增殖是CEACAM 5影響涎腺MEC生物學行為的方式之一。

綜上所述，涎腺MEC組織中CEACAM 5、PCNA高表達預示腫瘤惡性程度高、侵襲性強、淋巴結轉移率高、預后差。進一步研究CEACAM 5與PCNA在涎腺MEC組織中發揮作用的具體機制及方式，有望為涎腺MEC的治療、預防其轉移及改善預后提供可靠的基因靶位，為腫瘤的精準化治療提供科學依據。