膠質瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表達及臨床意義

朱文標　盧善明　李海南　肖煥欽　羅文娟　謝壽城　劉晉發

【摘要】 目的：探討EGFR、EGFRvⅢ蛋白在膠質瘤中的表達及其與臨床病理的相關性，研究其與膠質瘤患者預后的相關性，分析膠質瘤患者的生存影響因素。方法：選取2013年8月-2018年10月在本院經手術治療的膠質瘤病例104例，其中低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）27例，間變性膠質瘤（WHO Ⅲ級）20例，膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級）57例。存檔蠟塊免疫組化檢測EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達，收集臨床病理參數、分子標記物，并進行隨訪。結果：EGFR蛋白表達陽性率為低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）44.4%（12/27），間變性膠質瘤（WHO Ⅲ級）50.0%（10/20），膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級） 68.4%（39/57），隨著組織學級別的增加，EGFR陽性率增加，但差異無統計學意義（P>0.05）。EGFRvⅢ蛋白表達陽性率為低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）0，間變性膠質瘤（WHOⅢ級）為10.00%（2/20），膠質母細胞瘤（WHOⅣ級）為10.53%（6/57），差異無統計學意義（P>0.05）。13.1%（8/61）EGFR陽性膠質瘤表達EGFRvⅢ，EGFR陰性膠質瘤未發現有EGFRvⅢ的表達，兩者呈正相關（r=0.242， P<0.05）。EGFR表達與分子標記物1p/19q雜合性缺失有關（P=0.029），與其他臨床病理參數及其他分子標記物無關。EGFRvⅢ表達與臨床病理參數及分子標記物無關。單因素分析顯示EGFRvⅢ、年齡、組織學級別、KPS評分、治療方案、IDH1基因突變、ATRX基因突變與膠質瘤患者生存有關（P<0.05），Cox分析顯示年齡、組織學級別、治療方案及分子標記物IDH1是膠質瘤患者獨立的預后預測因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是膠質瘤患者獨立的預后因素（P>0.05）。結論：膠質瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表達具有一定的臨床意義，但不能作為膠質瘤的獨立預后因素。

【關鍵詞】 膠質瘤 EGFR EGFRvⅢ

Expression and Clinical Significance of EGFR and EGFRvⅢ Protein in Gliomas/ZHU Wenbiao， LU Shanming， LI Hainan， XIAO Huanqin， LUO Wenjuan， XIE Shoucheng， LIU Jinfa. //Medical Innovation of China， 2020， 17（10）： 0-015

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of EGFR and EGFRvⅢ protein in gliomas. Method： A total of 104 cases of gliomas were treated in our hospital from August 2013 to October 2018， including 27 cases of low-grade gliomas （WHO grade Ⅱ）， 20 cases of anaplastic gliomas （WHO grade Ⅲ） and 57 cases of glioblastoma （WHO grade Ⅳ ）. EGFR and EGFRvⅢ protein expression were detected by immunohistochemistry. The clinical pathological parameters and molecular markers were collected and all the cases were followed up. Result： The positive rate of EGFR protein expression was 44.4% （12/27） in low-grade gliomas， 50.0% （10/20） in anaplastic gliomas and 68.4% （39/57） in glioblastomas. With the increase of WHO grade， the EGFR positive rate increased， but the difference was not significant （P>0.05）. The positive rate of EGFRvⅢ protein expression was 0 in low grade gliomas， 10.0% （2/20） in anaplastic gliomas and 10.53% （6/57） in glioblastomas. The difference was not significant （P>0.05）. 13.1% （8/61） EGFR-positive gliomas expressed EGFRvⅢ， and all EGFR-negative gliomas did not show EGFRvⅢ expression. The express of EGFR and EGFRvⅢ was positive correlation （r=0.242， P<0.05）. EGFR expression was associated with co-deletion of 1q/19p （P=0.029）， while was not associated with clinicopathological parameters and other molecular markers. EGFRvⅢ expression was not associated with clinicopathological parameters and molecular markers. Univariate analysis showed EGFRvⅢ， age， WHO grade， KPS score， treatment regimen， IDH1 mutation and ATRX gene mutation were associated with survival of glioma patients （P<0.05）， Cox analysis showed age， WHO grade， treatment regimen and IDH1 mutation were independent prognostic predictors of glioma patients （P<0.05）， and EGFRvⅢ was not independent prognostic factor for glioma patients （P>0.05）. Conclusion： The expression of EGFR and EGFRvⅢ protein has certain clinical significance， but it was not independent prognostic factor for gliomas.

[Key words] Glioma EGFR EGFRvⅢ

First-authors address： Meizhou Peoples Hospital， Meizhou 514031， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.10.003

膠質瘤是最常見的原發性顱內腫瘤，研究發現，40%～50%的膠質瘤存在表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）異常表達，并且常伴隨基因擴增及突變，最常見的突變形式是表皮生長因子受體突變體Ⅲ（epidermal growth factor receptor variant Ⅲ， EGFRvⅢ）[1]。EGFRvⅢ尚未在正常組織中檢出，故被視為惡性腫瘤特異性表達的突變體。隨著腫瘤分子生物學的發展，分子靶向藥物治療膠質瘤是將來達到臨床治愈目標可行方案之一[1-2]。本文探討EGFR、EGFRvⅢ在膠質瘤中的表達及其與臨床病理的相關性，研究其與膠質瘤患者預后的相關性，分析膠質瘤患者的生存影響因素，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8月-2018年10在本院經手術治療的膠質瘤病例104例，其中男55例，女49例;年齡≥65歲者17例，<65歲者87例;腫瘤最大直徑<5.0 cm者46例，≥5.0 cm者58例;腫瘤位于額葉或顳葉者84例，位于其他位置者

20例。依據2016年世界衛生組織（WHO）的中樞神經系統膠質瘤分類標準進行組織學分級，低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）27例，間變性膠質瘤（WHO Ⅲ級）20例，膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級）57例。（1）納入標準：①患者均有腦腫瘤手術切除史，術后病理證實為Ⅱ～Ⅳ級膠質瘤;②手術切除后均行總劑量為50～65 Gy的放射治療;③隔3～6個月進行的MR隨訪復查中，出現異常強化病灶。排除標準：①患者<50歲或>80歲;②患者合并有肝、腎、肺等其他全身性疾病。該研究已經醫院倫理學委員會批準，且患者知情同意。

1.2 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達檢測 通過免疫組化方法檢測EGFR、EGFRvⅢ蛋白檢測，免疫組化采用S-P法，操作步驟嚴格按照試劑說明書。

1.3 EGFR、EGFRvⅢ免疫組化結果判讀 EGFR、EGFRvⅢ免疫組化染色主要定位于細胞膜和/或細胞質。染色結果判定：以細胞膜和/或細胞質中出現突出于背景的呈棕黃色或棕黑色染色的細胞判讀為陽性染色細胞。EGFR陽性判讀標準為陽性染色細胞>50%腫瘤細胞;EGFRvⅢ陽性判讀標準為陽性染色細胞>10%腫瘤細胞;即判讀為膠質瘤EGFRvⅢ表達陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS 21.0軟件進行統計學分析，計數資料采用率（%）表示，各組間比較采用，字2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier法，Cox比例風險模型應用于多因素生存分析，組間差異采用Log-rank檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EGFR、EGFRvⅢ蛋白在膠質瘤中的表達 EGFR在膠質瘤的陽性表達率為58.7%（61/104），EGFR蛋白表達陽性率為低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）44.4%（12/27），間變性膠質瘤（WHO Ⅲ級）50.0%（10/20），膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級）68.4%（39/57），隨著組織學級別的增加，EGFR陽性率增加，但差異無統計學意義（P=0.078）。EGFRvⅢ蛋白未發現其在低級別膠質瘤中有表達，EGFRvⅢ蛋白表達陽性率低級別膠質瘤（WHO Ⅱ級）為0，間變性膠質瘤（WHO Ⅲ級）為10.00%（2/20），膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級）為10.53%（6/57），差異無統計學意義（P>0.05）。EGFR陽性表達與分子標記物1p/19q雜合性缺失有關（P=0.029），與其他臨床病理參數及其他分子標記物無關。本實驗未發現EGFRvⅢ表達與臨床病理參數及分子標記物有關。見表1。

2.2 EGFR蛋白表達與EGFRvⅢ蛋白表達的關系 13.1%（8/61）EGFR蛋白陽性表達膠質瘤病例表達EGFRvⅢ蛋白，EGFR蛋白陰性膠質瘤病例未發現有EGFRvⅢ蛋白的陽性表達，兩者呈正相關（r=0.242，P<0.05）。見表2。

2.3 EGFR、EGFRvⅢ蛋白表達與膠質瘤的預后分析 用電話及智慧電子病歷系統進行隨訪，失訪7率，隨訪率93.3%;至隨訪截止日期（隨訪截止日期為2019年10月1日），本組病例死亡60例，占57.7%（60/104）。本組病例總生存期均值為（35.96±3.07）個月;中位生存期為（27.50±5.72）個月。Kaplan-Meier生存分析顯示EGFR蛋白表達與膠質瘤患者生存無關（P>0.05），EGFRvⅢ蛋白表達與膠質瘤患者生存有關（P<0.05）。年齡、組織學級別、KPS評分、治療方案、IDH1基因突變、ATRX基因突變與膠質瘤患者生存有關（P<0.05），其他與膠質瘤生存無關（P>0.05）。見表3。Cox多因素分析顯示年齡、組織學級別、治療方案及IDH1突變是膠質瘤患者獨立的預后因素（P<0.05），EGFRvⅢ不是膠質瘤患者獨立的預后因素（P>0.05）。見表4。

3 討論

EGFR是一種相對分子質量為170KD的跨膜蛋白受體，由三個功能區組成：胞外配體連接區、單鏈跨膜區和胞內酪氨酸激酶區。其配體有表皮生長因子、轉化生長因子、雙向調節因子及神經調節蛋白等，一旦胞外區與配體連接，就會發生同源或異源二聚化，導致胞內區中酪氨酸殘基自體磷酸化，激活下游的信號通路，調控細胞的增殖、分化和凋亡，并參與腫瘤細胞的遷移、侵襲、轉移和血管發生等。EGFRvⅢ是EGFR的胞外區框內缺失性突變，其胞外部分的2-7號外顯子缺失，導致801個堿基對缺失，使外顯子1和外顯子8相連接并融合產生一個新的氨基酸--甘氨酸，即為EGFRvⅢ突變。EGFRvⅢ突變體喪失了連接配體的功能，但可以在不依賴配體的情況下組成型激活酪氨酸激酶，產生自體磷酸化、誘發下游信號傳導通路、引起級聯反應，參與腫瘤的進程[1，3]。

本文的數據顯示EGFR蛋白過表達與膠質瘤患者的預后無關，而EGFRvⅢ表達與膠質瘤患者的不良預后相關，提示EGFR/EGFRvⅢ基因擴增/突變可能僅僅是評估預后的一項因素，本文數據不支持EGFRvⅢ為獨立的顯著的不良預后的預測因素。

EGFR/EGFRvⅢ基因擴增/突變參與膠質瘤的發生發展已取得了廣泛共識[1-3]。但其在膠質瘤患者中的預后意義一直存在爭議，許多研究報告了關于EGFR/EGFRvⅢ作為預后標志的相互矛盾的證據[4-9]，例如Shinojima等[4]研究表明EGFR擴增是一個獨立的、顯著的、負性生存預測因子，尤其對于<60歲的膠質母細胞瘤患者;EGFR擴增的膠質母細胞瘤中，EGFRvIII的過度表達是不良生存預后的獨立的顯著的預測指標。Lv等[5]認為EGFR擴增與無進展生存期相關，而不能預測總生存期。Hobbs等[6]的資料則認為EGFR的預后價值與基因擴增強度相關，EGFR基因高度擴增組總生存期明顯優于低度擴增組及無擴增組。Bieńkowski等[7]研究認為EGFR的預后價值需與其他分子標記物聯合評估，例如EGFR擴增合并CDKN2A缺失預后較好;而EGFR擴增合并7號染色體多體則預后差;Heimberger等[8]認為EGFR/EGFRvⅢ基因擴增/突變均不能獨立預測膠質母細胞瘤患者的總生存期;但對于生存期大于等于1年的患者，EGFRvⅢ蛋白表達是一個顯著的獨立的負性預后指標。van den Bent等[9]的隨機臨床試驗發現EGFRvⅢ蛋白表達與較長的無進展生存時間相關;部分研究則提示EGFRvⅢ蛋白擴增與預后無關[4，8]。研究結果的不一致可能與不同的EGFR/EGFRvⅢ檢測技術及評估標準、不完全的臨床資料、研究人員的主觀性、腫瘤異質性等有關。本研究中的樣本數量較少，研究對象為可手術治療的膠質瘤患者，而忽略了那些不能接受手術治療的患者，可能會對實驗結果產生影響。目前報道的多為單中心小樣本的研究，因此，需闡明EGFR/EGFRvⅢ基因擴增/突變對預后的預測價值，多中心大樣本的研究必不可少。

EGFR/EGFRvⅢ蛋白表達和基因異常是膠質瘤靶向治療中的重要靶點，尤其是EGFRvⅢ只在惡性腫瘤中表達，利用EGFRvⅢ單抗可特異識別膠質瘤細胞，同時可以發揮靶向治療的作用。然而在膠質瘤患者的臨床試驗中，EGFR/EGFRvⅢ靶向治療的效果尚不滿意[1-3，5，9-10]，寄予重望的EGFRvⅢ重排疫苗制劑Rindopepimut在Ⅲ期臨床試驗中不得不在試驗中期分析后終止[11]。EGFR/EGFRvⅢ靶向治療的臨床應用尚需更深入的基礎與臨床研究。

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（收稿日期：2019-11-27） （本文編輯：周亞杰）