防風(fēng)種子生活力快速測(cè)定方法的研究

常麗君

摘 要 試驗(yàn)先采用不同濃度TTC溶液對(duì)防風(fēng)種子進(jìn)行生活力測(cè)定，篩選出防風(fēng)種子生活力測(cè)定所用的最佳TTC溶液濃度；再用該濃度不同染色時(shí)間對(duì)防風(fēng)種子進(jìn)行生活力測(cè)定，篩選出最佳染色時(shí)間。結(jié)果表明，適宜防風(fēng)種子生活力測(cè)定的條件為1.0%TTC溶液染色3h。

關(guān)鍵詞 防風(fēng)；種子；生活力

防風(fēng)為傘形科防風(fēng)屬多年生草本植物，春、秋二季采挖未抽薹植株的根，除去須根和泥沙，曬干后入藥。最早收載于《神農(nóng)本草經(jīng).上品》，具有祛風(fēng)解表，勝濕止痛等功效，主產(chǎn)于我國(guó)黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、寧夏、甘肅、陜西、山西等地。近年來，在中醫(yī)藥現(xiàn)代化和中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的推動(dòng)下，防風(fēng)種植面積逐年增大，防風(fēng)都是以種子繁殖的，種子的生產(chǎn)在實(shí)際生產(chǎn)過程中一直不被重視，基本上是藥材生產(chǎn)的副產(chǎn)品，還處于農(nóng)戶自繁自售的狀態(tài)，其生產(chǎn)缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)規(guī)程，從而導(dǎo)致防風(fēng)種子質(zhì)量層次不齊、商品種子慘偽等現(xiàn)象嚴(yán)重。這不但增加了投入成本，而且嚴(yán)重影響了防風(fēng)種苗質(zhì)量，并最終影響藥材的質(zhì)量和品質(zhì)。因此，根據(jù)防風(fēng)種子生產(chǎn)的現(xiàn)狀和問題，應(yīng)該制定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，使得在進(jìn)行種子檢驗(yàn)時(shí)，有一定的參考依據(jù)，同時(shí)也有利于加強(qiáng)市場(chǎng)的規(guī)范化，從而保障消費(fèi)者的利益。

種子生活力是指種子胚胎在一定的環(huán)境下，通過一定的刺激，其萌芽的潛在能力。它也是衡量種子品質(zhì)和價(jià)值的主要參考依據(jù)，種子生活力越高，在之后生長(zhǎng)過程中，其潛力越大。對(duì)藥用植物來說，種子質(zhì)量的好壞，活力的高低更為重要，它不僅會(huì)影響植物的生長(zhǎng)，而且直接影響到藥材質(zhì)量和品質(zhì)。為了確定防風(fēng)種子生活力的最佳染色濃度和時(shí)間，該實(shí)驗(yàn)用TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）對(duì)防風(fēng)種子進(jìn)行染色，希望通過該實(shí)驗(yàn)可以有效的為防風(fēng)種子的檢測(cè)制定相關(guān)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

防風(fēng)種子于2019年10月采自甘肅省隴西縣首陽中藥材產(chǎn)業(yè)園區(qū)，種子采集后在隴西縣中醫(yī)藥研究院種子種苗檢測(cè)中心進(jìn)行生活力測(cè)定。

2 試驗(yàn)方法

四唑法（TTC）測(cè)定種子生活力的原理：有生命活力的種子會(huì)進(jìn)行呼吸代謝，代謝過程中產(chǎn)生的氫可以將TTC由無色變?yōu)榧t色。

由以上原理可以進(jìn)行判定，如果TTC被染成了深紅色，可以推斷，該種子進(jìn)行了呼吸代謝，從而可以判斷種子生活力相對(duì)較強(qiáng)，反之則不具備種子生活力。

本試驗(yàn)主要研究了不同TTC濃度和不同染色時(shí)間兩個(gè)因素對(duì)防風(fēng)種子生活力測(cè)定的影響。

3 試驗(yàn)步驟

3.1 試劑配制

第一步，在小燒杯中分別放入已經(jīng)稱取好的TTC粉末，質(zhì)量分別是0.5g、1.0g、1.5g、2.0g；第二步，在每一個(gè)燒杯內(nèi)都加入濃度為95%的乙醇進(jìn)行溶解；第三步，依次在加入乙醇后的燒杯內(nèi)加入20毫升蒸餾水進(jìn)行搖勻，并通過0.1mol/L的氫氧化鈉溶液將溶液PH調(diào)到中性；最后一步，再次利用蒸餾水進(jìn)行稀釋定容，這樣就配好了不同濃度的TTC溶液。

3.2 操作步驟

先將防風(fēng)凈種子放在35℃水浴鍋中浸泡24h使種子充分吸脹，然后根據(jù)種子外形沿胚著生部位縱向切開種子（兩部分均含胚和胚乳），棄去一半后將另一半種子置于染色盤中，加入TTC溶液后于35℃恒溫箱中進(jìn)行染色后觀察染色結(jié)果（TTC溶液以剛好浸沒種子為宜）。每個(gè)處理做2次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100粒種子。

3.3 結(jié)果觀察

染色結(jié)束后倒出TTC溶液，再用蒸餾水將種子清洗2-3次，觀察種胚的染色情況（必要時(shí)可借助放大鏡或低倍顯微鏡）。凡種胚全部或2/3部分被染成紅色或淡紅色即為具有生活力的種子，種胚不被染色的即為死種子。

4 結(jié)果分析

4.1 種子生活力對(duì)不同濃度TTC溶液的不同反應(yīng)

表1是我們將處理好的防風(fēng)種子浸泡在不同濃度的TTC溶液中五個(gè)小時(shí)所得的結(jié)果。根據(jù)表1數(shù)據(jù)，我們可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)TTC的濃度為0.5%時(shí)，種子生活力為74%，當(dāng)TTC濃度達(dá)到1%時(shí)，種子生活力大幅度增加，所以TTC濃度為0.5%被排除。我們?cè)偻ㄟ^表一可以觀察，濃度逐漸增長(zhǎng)，但是種子生活力卻沒有大幅度增長(zhǎng)，反而濃度為1.5%到濃度2%時(shí)，種子生活力不變，這樣通過我們分析可以得出，測(cè)定防風(fēng)種子生活力TTC的最佳濃度為1%。

4.2 不同染色時(shí)間對(duì)種子生活力測(cè)定的影響

將處理好的種子放到最佳濃度的TTC溶液中，并每隔一個(gè)小時(shí)進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)所得出的。表2中我們可以得知，當(dāng)染色一小時(shí)之后，種子生活力為70.5%；染色兩小時(shí)后，種子生活力為75%；到了第三個(gè)小時(shí)之后，種子生活率達(dá)到了81%，再往后隨著時(shí)間的增加，種子生活力并沒有明顯的增加。所以，可以推斷出防風(fēng)種子生活力測(cè)定的最佳染色時(shí)間為三個(gè)小時(shí)。

5 結(jié)論

首先，本實(shí)驗(yàn)排除其他可能影響的原因，對(duì)最佳濃度進(jìn)行選擇。通過將種子放置在不同濃度的TTC溶液中，從而得出TTC溶液最佳濃度為1%。其次，實(shí)驗(yàn)在將種子放置在1%的TTC溶液中，每隔一小時(shí)，進(jìn)行記錄，最終確定，染色時(shí)間為3小時(shí)效果最佳。綜上所述，測(cè)定防風(fēng)種子生活力的最佳條件為1%的TTC溶液進(jìn)行染色三小時(shí)。