復(fù)合固相萃取凈化前處理檢測茶葉中滴滴涕的殘留

何繼東

本文采用乙腈一次性提取，復(fù)合固相萃取凈化，氣相色譜（ECD）檢測，建立了一種分析茶葉中滴滴涕各異構(gòu)體殘留量的前處理方法。實驗證明經(jīng)該前處理方法提取的樣品，平均回收率在88.2%～102.2%之間，精密度RSD在1.1%～10.5%之間，檢出限在0.0006～0.005mg/kg之間。該前處理方法具有試劑使用量少、凈化效果好、操作簡便、靈敏度高、檢出限低、重復(fù)性和回收率好等優(yōu)點。

茶葉是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的經(jīng)濟作物之一，更是大眾喜愛的傳統(tǒng)飲品，作為茶葉的國際貿(mào)易大國，潛在的農(nóng)藥殘留風(fēng)險已直接影響到我國茶葉出口，也對人類健康造成一定的影響。茶葉中含有色素、揮發(fā)性有機酸、茶多酚、茶堿等物質(zhì)，樣品成分復(fù)雜，干擾物較多，其前處理的凈化效果直接影響到農(nóng)藥殘留測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，建立一種更便捷、準(zhǔn)確的前處理方法十分重要。本實驗使用復(fù)合固相萃凈化前處理，氣相色譜檢測滴滴涕各異構(gòu)體的殘留量，取得了較好的檢測效果。

一、實驗部分

1、儀器與設(shè)備

Agilent6890N氣相色譜儀（美國Agilent公司），配備ECD檢測器;色譜柱：HP-5MS UI（30m×0.25mm×0.25um毛細柱）;電子天平（感量0.01g）;高速組織搗碎機;均質(zhì)儀（PRO 250）;高速離心機;氮吹儀;固相萃取架。

2、試劑與材料

丙酮、正己烷、乙腈和甲苯均為色譜純，無水硫酸鈉為分析純650℃灼燒4小時，儲存在干燥器內(nèi)。洗脫溶劑為乙腈+甲苯（3：1）、丙酮+正己烷（1：9）。石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱（CNWBOND GCB/NH2500mg/500mg/6mL），弗羅里硅土柱（Cleanert Florisil 1000 mg/6 mL）。滴滴涕農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品濃度為100ug/mL，均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境科研監(jiān)測所，分別為： p，p′-滴滴伊（p，p′-DDE）、o，p′-滴滴涕（o，p′-DDT）、p，p′-滴滴滴（p，p′-DDD）、p，p′-滴滴涕（p，p′-DDT）。

3、樣品前處理

（1）樣品的提取。準(zhǔn)確稱取2g樣品（精確至0.01g）于50mL離心管中加乙腈10mL提取，15000r/min均質(zhì)2min，8000r/min離心5min，取5mL上清液備用。

（2）樣品的凈化。

①將石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱放入固相萃取架，加入高約1cm的無水硫酸鈉，用4 mL乙腈+甲苯（3：1）活化，加入離心后的5ml樣品上清液過石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱，并用20mL玻璃離心管收集，用10mL乙腈+甲苯（（3：1）洗脫，收集所有洗脫液。用80℃水浴通入氮氣濃縮近干，加3mL正己烷溶解殘渣備用。

②弗羅里硅土柱放入固相萃取架，用5mL丙酮+正己烷（1：9），再用5mL正己烷活化平衡。活化液到達填充物表面時倒入“1.4.2.1”溶解液，用15mL玻璃離心管收集，用5ml正己烷+丙酮（9：1）淋洗溶解殘渣的玻璃離心管，淋洗液倒入凈化柱洗脫，然后再重復(fù)一次，收集全部洗脫液用40℃水浴通入氮氣濃縮近干。用正己烷定容至1.0ml，混勻裝瓶上機檢測。

4、色譜條件

色譜柱：HP-5MS UI（30m×0.25mm×0.25um毛細柱）;載氣：高純氮氣（99.999%）;載氣流量：1.2mL/min;隔墊吹掃3.0mL/min;尾吹58.8mL/min ;檢測器：ECD，檢測器溫度320℃;進樣口溫度270℃;進樣方式：分流自動進樣，分流比10：1;控制模式：恒定流量;升溫程序：90℃保持1.0min、以15/min升到200℃保持7.0min、以8℃/min升到230℃保持11min、以30℃/min升到310℃保持3.0min;進樣量1.0uL，峰面積外標(biāo)法定量。

二、結(jié)果與討論

1、凈化方法的選擇

茶葉中的色素、揮發(fā)性有機酸、茶多酚、茶堿等物質(zhì)會對氣相色譜檢測造成嚴(yán)重干擾，甚至影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，而常用的硫酸磺化法凈化，需多次凈化，且液液分配操作復(fù)雜。本實驗采用乙腈作提取溶液，用GCB/NH2石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱加弗羅里硅土柱復(fù)合凈化，用于去除樣品基質(zhì)中的類甾體、色素、各種有機酸、蛋白質(zhì)、糖類和脂肪酸，能夠達到良好的凈化效果（圖1復(fù)合固相萃取法凈化的茶葉基質(zhì)圖譜）。但是石墨化炭黑有較強的吸附作用，故在實驗中為了獲得較好的凈化效果和較高的回收率，對洗脫劑進行比較后，選擇用乙腈+甲苯（3：1）作為石墨化炭黑/氨基復(fù)合柱的洗脫劑，正己烷+丙酮（9：1）作為弗羅里硅土柱的洗脫劑。

2、色譜分離情況

按照上述色譜條件測試，基質(zhì)空白雜質(zhì)峰少對目標(biāo)峰無干擾，4種滴滴涕異構(gòu)體可得到良好的分離效果（見圖2? 4種滴滴涕異構(gòu)體添加樣品色譜圖）。

3、線性范圍及相關(guān)系數(shù)

線性范圍為：0.025mg/L～0.5mg/L，各濃度分別為：0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L 、0.25mg/L、0.5mg/L，按上述色譜條件進樣分析，通過計算得到相關(guān)系數(shù)、線性方程、檢出限，見表1。

4、方法的回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取2組，每組3個不含農(nóng)藥殘留的茶葉樣品，每個樣品2.00g。兩組樣品添加值分別為0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，使用上述“1.3樣品前處理”方法進行樣品提取后分析，兩組添加樣品回收率和精密度見表2，兩組添加樣品平均回收率在88.2%～102.2%之間，精密度RSD在1.1%～10.5%之間，檢測中未出現(xiàn)色譜峰干擾情況，回收率高，重復(fù)性良好。

三、結(jié)論

本文采用乙腈一次性提取，復(fù)合固相萃取凈化前處理，氣相色譜（ECD）檢測茶葉中滴滴涕的殘留。該前處理方法具有試劑使用量少、凈化效果好、操作簡便、靈敏度高、檢出限低、重復(fù)性和回收率好等優(yōu)點，能夠滿足茶葉中滴滴涕各異構(gòu)體殘留量的檢測需求。

（作者單位：236000 安徽省阜陽市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心）