氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定鮮猴頭菇中16種農(nóng)藥殘留

文 飛，李 志，趙 敏，羅開源，穆建穩(wěn)*

（1.六盤水市鐘山區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 六盤水 553000；2.六盤水市鐘山區(qū)都市型現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園區(qū)管理委員會(huì)，貴州 六盤水 553000；3.六盤水市山地特色生態(tài)產(chǎn)品研究中心，貴州 六盤水 553000；4.貴陽(yáng)海關(guān)出入境檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心國(guó)家果蔬檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（六盤水），貴州 六盤水 553000）

猴頭菇（Hericium erinaceus）屬于珍稀食用菌，由于食用菌中的基質(zhì)比蔬菜復(fù)雜，除含有脂肪外，還含有多糖、蛋白質(zhì)等成分[1-3]，其前處理過(guò)程比蔬菜較為復(fù)雜。由于其生產(chǎn)過(guò)程中存在病蟲害，一些菇農(nóng)為了控制病蟲害，不可避免使用各種農(nóng)藥[4-5]，從而造成食用菌農(nóng)藥殘留，影響人體健康和食用菌產(chǎn)品的出口。目前，我國(guó)在農(nóng)產(chǎn)品方面的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有氣相色譜法（gas chromatography，GC）[6-7]、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）[8-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）[11-12]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）[13-14]，前兩種方法在檢測(cè)方面存在靈敏度低和假陽(yáng)性，且對(duì)于基質(zhì)較為復(fù)雜的樣品，不能準(zhǔn)確定性、定量分析[15]，而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法不僅具有高靈敏度和高分辨的特點(diǎn)，而且能同時(shí)快速檢測(cè)多個(gè)樣品并進(jìn)行定性、定量檢測(cè)分析，極大地提高了農(nóng)殘檢測(cè)效率[16-17]。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatographic-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法已成為我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中果蔬類農(nóng)藥殘留主要方法。近年來(lái)，已有相關(guān)學(xué)者報(bào)道利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食用菌中的農(nóng)藥殘留分析研究，如戚文華等[18]利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法建立了測(cè)定鮮香菇中25種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的檢測(cè)方法；白冰等[19]采用固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）對(duì)新鮮雙孢蘑菇和香菇進(jìn)行萃取并通過(guò)氨基柱凈化方式建立了氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)雙孢蘑菇和香菇中的67種農(nóng)藥殘留分析方法。韓梅等[15]通過(guò)凝膠滲透色譜凈化，采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)香菇中6種氨基甲酸酯類（速滅威、仲丁威、抗蚜威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等）農(nóng)藥殘留。楊曉鳳等[20]報(bào)道了利用氣質(zhì)色譜聯(lián)用檢測(cè)食用菌中干木耳、干茶樹菇和鮮金針菇、鮮平菇、鮮雙胞菇的農(nóng)藥殘留。

目前關(guān)于食用菌的農(nóng)殘檢測(cè)報(bào)道主要以新鮮香菇、雙孢蘑菇、平菇、木耳、金針菇的農(nóng)殘為主，還鮮見以氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定猴頭菇中的農(nóng)藥殘留分析報(bào)道，因此，本研究以氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)猴頭菇中16種有機(jī)農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，以期為猴頭菇農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)研究提供參考，以滿足日常食用菌農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮猴頭菇：由六盤水市大河食用菌基地提供。

16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL）：中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；乙腈、正己烷、丙酮、甲苯（均為色譜純）：美國(guó)飛世爾（Fisher）公司；氯化鈉、無(wú)水硫酸鎂（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；0.45 μm有機(jī)過(guò)濾膜：美國(guó)Millipore 公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

TSQTM9000氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；TGL-16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；DLAB D-500 均質(zhì)/分散機(jī)：大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司；恒奧HSE-12B固相萃取儀：北京東南儀誠(chéng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司；DZKW-D-6數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋：上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的制備

猴頭菇樣品經(jīng)勻漿機(jī)粉碎，混勻成均勻漿狀，備用。

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取10 g勻漿試樣（精確至0.000 1 g）于50 mL的離心管中，加入15 mL乙腈、5 g氯化鈉，旋渦振蕩10 min，于5 000 r/min離心5 min，收集上清液于茄型瓶中，殘?jiān)儆?5 mL乙腈重復(fù)提取一次，離心，合并兩次上層有機(jī)相，在40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮至1 mL左右，待凈化。

凈化：在固相萃取柱中加入2 cm的無(wú)水硫酸鈉，再加入10 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液對(duì)固相萃取柱進(jìn)行活化，舍棄流出液，放入固定架上，將上述樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，用2 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液洗滌樣品瓶，并將洗滌液移入柱中，重復(fù)3次，再用25 mL乙腈-甲苯（3∶1，V/V）混合液洗滌小柱，收集上述所有洗脫液轉(zhuǎn)移至50 mL茄型瓶中，40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL左右，加入5 mL正己烷進(jìn)行溶劑交換，再次重復(fù)上述操作，混勻后，過(guò)0.45 μm有機(jī)濾膜后，定容至1 mL，待氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定分析。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻(xiàn)[21]方法進(jìn)行質(zhì)量濃度為10 μg/mL混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，定量離子對(duì)的峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。

1.3.4 氣相色譜-質(zhì)譜條件[22]

氣相色譜條件：毛細(xì)管柱DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：初始溫度40 ℃，保持1 min，以30 ℃/min的速率升溫至130 ℃，再以5 ℃/min的速率升溫至250 ℃，最后以10 ℃/min的速率升溫至300 ℃，保持5 min；載氣為氦氣（He）（純度≥99.999%），流速1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度290 ℃；進(jìn)樣量1.0 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

質(zhì)譜條件：電離方式為電子電離（electronic ionization，EI）源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；GC-MS接口溫度280 ℃；駐留時(shí)間2.5 min；溶劑延遲時(shí)間3 min；質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）參數(shù)見表1。

表1 16種農(nóng)藥組分CAS號(hào)、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式參數(shù)Table 1 CAS number and multiple reaction monitoring parameters of 16 pesticide components

2 結(jié)果與分析

2.1 16種農(nóng)藥混標(biāo)溶液總離子流色譜圖及線性回歸方程

16種農(nóng)藥的保留時(shí)間和線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)R2見表2。

表2 16種農(nóng)藥標(biāo)品的保留時(shí)間、線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 2 Retention time,linear regression equation and correlation coefficient of 16 kinds of pesticide standards

由表2可知，在確定的色譜柱及儀器分析條件下，16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在0.05～1.00 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.998，可以滿足定量分析的要求。

2.2 猴頭菇中16種農(nóng)藥殘留檢出限、精密度和回收率試驗(yàn)

以空白基質(zhì)產(chǎn)生3倍信噪比（signal-to-noise ratio，S/N）計(jì)算檢出限[24-25]。分別向空白猴頭菇基質(zhì)中添加16種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)量為0.05 mg/kg、0.20 mg/kg和0.40 mg/kg 3個(gè)水平，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，依步驟1.3利用GC-MS/MS測(cè)定，并利用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，檢出限、回收率和精密度測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留的檢出限為0.010～0.075 mg/kg，平均回收率為86.08%～93.63%，回收率符合大多數(shù)農(nóng)藥殘留70%～110%范圍之間要求，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為3.96%～8.92%。此外，16種有機(jī)農(nóng)藥中甲胺磷、敵敵畏、速滅磷、甲基嘧啶磷、殺螟硫磷、毒死蜱、喹硫磷和乙硫磷等8種有機(jī)磷類農(nóng)藥的平均回收率為86.48%～93.63%，檢出限為0.018～0.054mg/kg，RSD為4.49%～8.81%。猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留的回收率均在80%～100%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜10%，符合痕量殘留分析要求[14]。

表3 猴頭菇中16種有機(jī)農(nóng)藥檢出限、回收率和精密度試驗(yàn)Table 3 Detection limits,recovery rates and precision of 16 kinds of organic pesticides in Hericium erinaceus

2.3 實(shí)際樣品的檢測(cè)

以六盤水市當(dāng)?shù)厮a(chǎn)猴頭菇作為待測(cè)樣品，選擇3份樣品，每份10 g，按照上述所建立的檢測(cè)方法對(duì)16種農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果見表4。

表4 猴頭菇樣品的檢測(cè)結(jié)果Table 4 Determination results of Hericium erinaceus samples

由表4可知，16種農(nóng)藥殘留量檢測(cè)在六盤水市大河食用菌基地所產(chǎn)猴頭菇中均未檢出，表明該猴頭菇不含有以上農(nóng)藥殘留，為安全的食用菌農(nóng)產(chǎn)品。

3 結(jié)論

本研究建立了猴頭菇中的16種農(nóng)藥殘留氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的分析方法。在0.05～1.00 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)16種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.998。在確定的氣相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用的條件下，16種農(nóng)藥在3個(gè)加標(biāo)水平下的平均回收率為86.08%～93.63%，檢出限為0.010～0.075mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.96%～8.92%，該方法的回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合痕量殘留分析要求，說(shuō)明本方法靈敏度較高、穩(wěn)定性好，可用于猴頭菇中16種農(nóng)藥殘留分析的檢測(cè)方法。通過(guò)實(shí)際檢測(cè)，當(dāng)?shù)厮a(chǎn)新鮮猴頭菇樣品中16種農(nóng)藥殘留均未檢出，說(shuō)明本地猴頭菇為安全農(nóng)產(chǎn)品，可放心食用和流通市場(chǎng)。