絕經前后乳腺癌患者臨床病理特征及腫瘤分子分型的相關性分析

徐玲玉 楊榮華 陳玉芳 李子燕

江蘇省常州市腫瘤醫院 1 乳腺外科 2 病理科 213000

目前，乳腺癌在全球女性惡性腫瘤中發病率和死亡率居第一位，并且有一個重要特征是年齡發病率呈現雙峰分布，我國女性發病率和死亡率在全球處于比較高的水平，并且有逐年增長的趨勢，隨著社會經濟的發展，女性生活方式發生顯著改變，乳腺癌年輕化趨勢日益顯著，流行病學相關研究顯示，在傳統確認的乳腺癌危險因素下，基于分子分型的乳腺癌病理因素研究對于正確判斷乳腺癌預后因素起著越來越重要的作用。本研究對2014年2月—2018年8月期間我院收治的49例絕經前女性與53例絕經后女性乳腺癌的臨床病理特征和腫瘤分子分型進行分析，指導臨床治療及預后判斷。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年2月—2018年8月期間我院收治的49例絕經前與53例絕經后女性乳腺癌患者。

1.2 ER、PR、HER-2、Ki-67檢測方法 (1)抗體：ER、PR為兔抗人單克隆抗體，購自西雅金橋生物有限公司，HER-2為兔抗人單克隆抗體，購自瑞士羅氏公司。(2)免疫組織化學染色。實驗方法：應用瑞士羅氏公司全自動免疫分析儀(VENTANA XT)進行檢測，以已知陽性片作陽性對照，以空白片作陰性對照，一抗選用西雅金橋生物有限公司，二抗及顯色系統均為全自動免疫染色儀自帶封閉套盒，襯染液為Gill蘇木精染色液。具體步驟如下：(1)每張石蠟切片的玻片上標記一抗名稱；(2)根據所需檢測免疫組化項目，電腦輸入免疫組化號與各一抗的名稱，Ebar條碼打印機打印出來標簽后對應貼到每張防脫片玻片上，全自動儀器不需要額外烤片；(3)仔細檢查機器自帶試劑與各散裝試劑是否足夠完整實驗；(4)將標簽表面水分與切片背面擦干，平穩放置于切片盤上；(5)將DAB試劑盒、蘇木素、返藍液等試劑置于檢測試劑架上(注意擦干條形碼上水珠)；(6)準備完畢后，電腦啟動運行程序；(7)染色完成后，打開切片盤，取出切片后先入洗潔精去玻片表面油質，然后常規脫水、透明、封片；(8)使用儀器自帶清潔功能清洗儀器。

1.3 結果判定 所有乳腺組織標本均用4%甲醛固定24h，常規石蠟包埋后連續切片，HE染色，光鏡觀察。采用免疫組化SP法染色。試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組織化學染色結果由兩名有經驗的病理科醫生閱片。(1)ER、PR的陽性標準：ER、PR均定位于細胞核，腫瘤細胞核中出現棕黃色顆粒著色即為陽性細胞。陽性細胞≥1%定義ER或PR為陽性。PgR 20%陽性作為Luminal A型和Luminal B型的臨界值。(2)HER-2的陽性標準：HER-2陽性細胞染色的信號位于胞膜，陽性標準為胞膜染色或胞膜胞漿同時染色，單獨胞漿染色不計為陽性。其中>10%的浸潤癌細胞呈現不完整的、細胞膜染色判定為(1+)，>10%的浸潤癌細胞呈現不完整和/或弱～中等強度的細胞膜染色或者≤10%的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色判定為(2+)，>10%的浸潤癌細胞呈現強、完整且均勻的細胞膜染色判定為(3+)，本研究將HER-2(2+)及以下者定義為陰性，HER-2(3+)定義為陽性。(3)Ki-67數值判定：對于陽性細胞分布較均勻的腫瘤細胞，隨機選取3個或以上浸潤性癌高倍鏡視野計數，得出平均Ki-67指數，<15%為低表達，>30%為高表達。以腫瘤細胞核呈棕色為陽性細胞，Ki-67指數指100個細胞中Ki-67陽性細胞數。每張切片于400倍鏡下選定10個視野，每個視野計數100個細胞，計算每張切片上陽性表達的細胞個數即Ki-67增殖指數。

1.4 分子分型方法 見表1。

表1 分子分型方法

1.5 統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行統計學分析，計數資料組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 絕經前、后腫瘤的病理類型、組織學分級、腫塊大小、淋巴結轉移情況 絕經前后患者在病理類型方面無明顯差異(P>0.05)，絕經前組在腫瘤組織學分級Ⅲ級、原發腫瘤直徑≥2cm、腋窩淋巴結陽性比例均較絕經后組高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 絕經前、后腫瘤的病理類型、組織學分級、腫塊大小、淋巴結轉移情況(n)

2.2 絕經前、后腫瘤的分子分型情況 絕經后組Lumina型比例較三陰性或HER-2陽性型高于絕經前組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 絕經前、后腫瘤的分子分型情況(n)

2.3 絕經前、后腫瘤組織ER、HER-2表達與腋窩淋巴結轉移情況 絕經前組HER-2陽性且淋巴結陽性者比例較ER陽性且淋巴陰性高于絕經后組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 絕經前、后腫瘤組織ER、HER-2表達與腋窩淋巴結轉移情況(n)

3 討論

流行病學調查發現，乳腺癌在45歲左右發病率隨年齡增長迅速增高，全球約70%的乳腺癌發生在45歲以上，我國45歲以上女性乳腺癌占所有病例的69.75%[1]，我國乳腺癌地區分布差異明顯，主要由社會經濟發展和生活方式差異解釋，大城市20余年的上升幅度達到100%～150%[2]。乳腺癌流行病學的一個重要特征就是年齡發病率呈現明顯的雙峰，絕經期前峰值明顯高于絕經期后，這種分布反映了乳腺癌具有較高的異質性。乳腺癌的分子分型改變了乳腺癌流行病學的研究和認識模式，基于分子分型的乳腺癌流行病學中，對傳統確認的乳腺癌危險因素，在乳腺癌不同的亞型中的作用具有顯著差異。2000年Perou等[3]的研究成果對于乳腺癌分子分型具有劃時代意義，通過對基因表達譜的聚類分析將乳腺癌分成Lumina A、Lumina B、HER-2陽性和三陰性。流行病學對乳腺癌的發病危險因素的認識基本清楚，而預后因素卻較為模糊，比較公認的預后因素主要受患者的臨床病理特征影響，如腫瘤的組織學分級、腫塊大小，淋巴結轉移情況，而不同分子分型的乳腺癌預后也有顯著差異，相關研究表明，Lumina型[4-5]預后最好，其構成占全部乳腺癌的50%左右，但三陰性乳腺癌預后最差，占全部乳腺癌的10%左右，在臨床工作中，我們發現絕經前后乳腺癌的病理特征及分子分型方面也有顯著的差異，本研究針對此點進行分析，希望為臨床個體化治療和預后判斷提供理論依據。

目前研究[6-7]普遍認為絕經前乳腺癌特別是35歲以下乳腺癌分化低，腫瘤直徑大，易出現腋窩淋巴結轉移，預后差，ER陰性率高及HER-2陽性率高。本研究發現絕經前患者在腫瘤組織學分級Ⅲ級、原發腫瘤直徑≥2cm、腋窩淋巴結陽性比例均高于絕經后患者，差異有統計學意義(P<0.05)，與國內外多數文獻報道一致。

如今通過免疫組化分析得出的分子分型已經廣泛應用于臨床，指導乳腺癌患者的綜合治療，包括手術方式的制定、化療方案的選擇、是否需要行內分泌治療及靶向治療，并對乳腺癌患者的預后進行評估。相關研究[8]報道，不同的分子分型顯著影響乳腺癌的預后，其中Lumina亞型與HER-2陽性和三陰性的DFS和OS曲線截然分開，提示前者預后較好。

Lumina型乳腺癌發展相對較慢，內分泌治療效果好，術后5年內復發率相對較低。本研究中發現絕經后組Lumina 型比例高于絕經前組，差異有統計學意義(P<0.05)。提示絕經后患者較絕經前預后相對較好。三陰性乳腺癌因其特殊的病理特征和較差的預后，成為研究的熱點，研究表明[9]，三陰性乳腺癌中位腫瘤大小為2cm，約50%伴隨淋巴結轉移，且組織學分級多為3級，不適合接受針對受體陽性患者的內分泌治療及針對HER-2陽性患者的靶向治療，放化療成為其術后的主要治療方式，且術后5年內復發率高。近年來隨著驅動基因重要性的不斷加強，Her-2狀態成為分子分型的重要原則，Her-2是乳腺癌明確的預后指標，與乳腺癌的發生發展密切相關，相關研究[10-11]表明：HER-2陽性與乳腺的預后和患者生存率呈負相關。本研究中發現絕經前乳腺癌患者腫瘤組織HER-2陽性同時伴有淋巴結轉移比例高于絕經后患者，差異有統計學意義(P<0.05)。提示絕經前患者較絕經后預后相對較差。不同亞型乳腺癌惡性程度差異較大，有針對性的加強絕經前后乳腺癌亞型的研究，可以提高乳腺癌防治的效率，減少過度診斷和治療的發生，加強個體化的治療。