EmbryoGlue移植液對胚胎移植患者臨床結局的影響

張克榮，常秀梅，鄧少婷，蔡昭煒 （廣東醫科大學第二臨床醫學院 . 婦產科與生殖醫學教研室；. 口腔醫學教研室，廣東東莞 5808；. 廣東省東莞市第三人民醫院生殖醫學中心，廣東東莞 50）

體外受精-胚胎移植(in vitrofertilization-embryo transfer，IVF-ET) 助孕失敗是國內外輔助生殖工作者面臨的主要問題之一，其原因除了影響生育的全身性疾病、生殖系統本身的疾病外，還與輔助生殖相關技術有著密切的關系[1-3]。模擬安全、穩定、高效，且類似人體輸卵管和子宮內部環境的胚胎移植液一直是生殖醫學學者的研究熱點之一。研究證實，人類輸卵管和子宮內存在透明質酸(HA)，而HA又與胚胎種植關系密切[4]。因胚胎移植液Embryo-Glue(瑞典Vitrolife公司)能夠模仿人體輸卵管和子宮內環境，且含有胚胎種植所需的HA和其他各種營養物質。本研究初步探討了EmbryoGlue移植液對胚胎移植患者臨床結局的影響，以期為輔助生殖實驗選擇更為理想的胚胎移植液提供依據。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

回顧性分析2015年2月－2016年2月在東莞市第三人民醫院生殖醫學中心接受IVF-ET或卵胞漿內單精子顯微注射技術(ICSI)治療的243例患者為研究對象，女方年齡≤40歲，患者均處于第1次IVF-ET或ICSI治療周期。選擇采用胚胎移植液EmbryoGlue的129例為試驗組，以同期使用G-2胚胎移植液的114例患者作為對照組。兩組患者的年齡、不孕原因、不孕年限等差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

1.2 方法

1.2.1 控制性超排卵 243例患者均采用經典長方案控制性超排卵治療，當B超監測至少有兩個卵泡直徑≥18 mm時，結合血黃體生成素、雌二醇、孕酮的數值，當晚肌肉注射人絨毛膜促性腺激素(HCG，麗珠制藥廠)6 000～10 000 IU；注射HCG 36～38 h后行B超引導經陰道穿刺獲取卵母細胞。

表1 兩組一般情況的比較

1.2.2 體外受精和胚胎培養 將卵丘-放射冠-卵母細胞復合物培養4～6 h，根據適應征采用IVF或ICSI；受精后16～18 h 觀察卵子受精情況，卵細胞內出現2個原核細胞為正常受精。分別于48、72 h 觀察胚胎發育情況。本研究所用胚胎培養液G-IVF、G-1和胚胎移植液G-2、EmbryoGlue均為瑞典Vitrolife公司產品。

1.2.3 胚胎評級及標準[5-6]Ⅰ級胚胎：卵裂球大小均勻，形狀規則，透明帶完整，胞質均勻、清晰，無顆粒現象，碎片少于5%；Ⅱ級胚胎：細胞大小略不均，形狀略不規則，胞質碎片占5%～20%；Ⅲ級胚胎：細胞大小明顯不均，可有明顯的不規則形狀，胞質內可有顆粒現象，碎片占21%～49%；Ⅳ級胚胎：細胞大小嚴重不均，胞質可有嚴重脫顆粒現象，碎片占50%及以上。Ⅰ、Ⅱ級胚胎為優質胚胎；Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級胚胎為可利用胚胎。受精率=受精卵數/卵母細胞總數×100%；卵裂率=卵裂數/受精卵數×100%；優質胚胎率=優質胚胎數/胚胎總數×100%；胚胎種植率=妊娠胎數/移植胚胎數×100%。

1.2.4 胚胎移植 試驗組取卵后第2天將1 mL胚胎移植液EmbryoGlue放入37 ℃、6%CO2培養箱內平衡過夜；第3天將胚胎移植液EmbryoGlue倒入雙凹皿的內凹內，外凹倒入2 mL平衡過夜的30%G-2用于沖洗挑選的移植胚胎；將挑選的胚胎移入胚胎移植液EmbryoGlue內培養待移植。用一次性注射器抽取0.3 mL的G-2，連接移植管并在顯微鏡下排空移植管內的空氣，然后小心依次吸入少量空氣(形成隔離兩種液體的空氣柱)、胚胎移植液EmbryoGlue和胚胎，最后再吸入少量的移植液EmbryoGlue，盡量將胚胎置于移植液EmbryoGlue的正中位置，封管。對照組采用G-2作為移植液，其余步驟同試驗組。

1.2.5 隨訪 胚胎移植后給予黃體酮注射液(浙江仙琚制藥公司)和(或)戊酸雌二醇(Schering，法國)進行黃體支持；14 d 后驗血和尿HCG，確定是否妊娠；HCG陽性者為生化妊娠，移植后4周行B超檢查，見宮內孕囊及心血管搏動為臨床妊娠。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0軟件包進行統計學分析，計數資料用率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

兩組患者的受精數、卵裂數、優質胚胎數、移植胚胎數、異位妊娠率和多胎妊娠率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。試驗組的胚胎種植率和臨床妊娠率均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

3 討論

人類輔助生殖技術已有40多年的發展歷史，但助孕失敗依然是輔助生殖技術面臨的最大挑戰之一。影響IVF-ET臨床結局的因素眾多，除了年齡、卵巢儲備、母體對胚胎的免疫應答、子宮內膜容受性、胚胎質量外，還與促排卵方案、胚胎移植技術及移植管類型等因素有密切關系。胚胎移植過程中，不同移植液必然對胚胎的種植和臨床妊娠率產生一定的影響。

HA是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺組成一種黏多糖，主要分布于宮頸黏液、卵丘、卵泡液和精漿中，在胚胎種植期，輸卵管和子宮內的含量顯著增加，故推測它對胚胎的種植起積極作用。基于此，瑞典Vitrolife公司模擬輸卵管和子宮內環境，開發出胚胎移植液EmbryoGlue(含有透明質酸0.5 g/L和重組人白蛋白2.5 g/L等營養物質)，以提高胚胎種植率和臨床妊娠率。胚胎移植液EmbryoGlue能否提高胚胎種植率和臨床妊娠率，學者持不同的觀點[7-9]。本研究回顧分析了234例接受IVF-ET或ICSI治療的不孕癥患者，觀察不同移植液對其胚胎種植率和臨床妊娠率的影響。結果發現，采用胚胎移植液EmbryoGlue的患者，其胚胎種植率和臨床妊娠率均明顯高于使用G-2移植液的患者，差異有統計學意義(P<0.05)。可能的原因是胚胎移植液EmbryoGlue中的HA能使宮腔內分泌物相關成分進入細胞間隙，與蛋白質結合形成蛋白凝膠，將細胞粘附在一起，保護細胞不受病原菌侵害，并加速胚胎在官腔內的發育和種植[4,10-12]。同時，HA是增殖細胞和遷移細胞胞外基質的主要成分，HA及其降解產物可以對這個過程進行免疫調節，促進著床部位血管的生成，從而提高胚胎的種植能力[13]。在胚胎組織中，HA具有抗病毒和抗免疫排斥的作用，保護胚胎在種植過程中免受母體對半異體的免疫排斥。本研究中，雖然試驗組的多胎妊娠率高于對照組，異位妊娠率則低于對照組，但兩組間差異無統計學意義(P>0.05)，原因可能與樣本量較少有關。

表2 兩組相關參數和妊娠結局的比較 例(%)

綜上所述，EmbryoGlue移植液在胚胎移植過程中起著一定的積極和促進作用，能夠改善胚胎移植患者的臨床結局，提高患者的胚胎種植率和臨床妊娠率，值得臨床推廣應用。