大葉鑼的酚性成分及其體外抗氧化活性研究

龔 宇，羅 偉，周蕙禎，李麗梅，陳胡蘭*

1成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室，成都 611137；2西南民族大學藥學院，成都 610041

大葉鑼(DidissandrasesquifoliaC.B.Clarke.)為苦苣苔科(Gesneriaceae)漏斗苣苔屬(Didissandra)多年生草本，別名大一面鑼、白毛草，主要分布于我國的四川、貴州等西南地區，常生長在海拔900～1 600 m的山坡、路旁及峭壁等地。它是我國民間使用的藥用植物，目前多為野生，被收錄于《四川中藥志》，具有益氣補血、補腎固精的作用，主要用于治療心悸怔腫、神經衰弱、崩漏帶下、小便淋瀝等疾病[1]?？嘬奶浦参锓N類十分豐富，從該科植物如降龍草(HemiboeasubcapitataClarke)、吊石苣苔(LysionotuspauciflorusMaxim)等中發現了黃酮類、苯乙醇苷類、醌類、萜類、酚類糖苷等多種化學成分[2]?，F代藥理研究表明其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等良好生物活性，且有文獻表明苯乙醇苷類化學成分具有神經保護、降低血糖等重要作用[3，4]，從一定程度上說明該科植物是具有潛在生物學活性化合物的重要來源。迄今為止，尚未發現漏斗苣苔屬植物的化學成分以及生物活性等方面的相關報道，為了明確漏斗苣苔屬植物的化學成分以及生物活性，本研究運用多種色譜技術首次對大葉鑼的甲醇及甲醇/水提取物的化學成分進行研究。

圖1 化合物1～15的化學結構Fig.1 The chemical structures of compounds 1-15

1 儀器與材料

1.1 儀器

AVANCE III-400型核磁共振儀(德國Bruker公司)；MicrOTOF QII高分辨質譜儀(德國Bruker公司)；Varioskan Flash全波長掃描式多功能讀數儀(美國Thermo公司)；半制備色譜柱 (250 mm × 21.2 mm，10 μm，蘇州納微生物科技有限公司，250 mm × 10 mm，5 μm，日本YMC公司)；半制備液相色譜儀(伍豐LC-100)。

1.2 藥品與試劑

甲醇、乙腈、二氯乙烷、乙酸乙酯、石油醚等有機溶劑(成都科隆化學品有限公司，AR)；MeOD，DMSO-d6以及CDCl3等氘代試劑(美國Sigma-Aldrich，99.8% D)；柱色譜硅膠(100～200目和200～300目)、薄層板硅膠(254 nm)(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Sciences AB)；反相硅膠(蘇州納微生物科技有限公司)；DPPH(四川維克奇生物科技有限公司，≥ 97%)；ABTS(上海邁瑞爾化學技術有限公司，98%)；FRAP(北京百靈威科技有限公司，98.5%)。

1.3 藥材

大葉鑼植物的全草于2018年7月采自四川省都江堰市青城山，植物標本經成都中醫藥大學藥學院王光志教授鑒定為苦苣苔科漏斗苣苔屬植物大葉鑼(DidissandrasesquifoliaC.B.Clarke.)。

2 實驗方法

2.1 提取和分離

取干燥大葉鑼(全草)粗粉242.0 g，依次用甲醇(1.5 L)和70%甲醇-水(1.3 L)，在60 °C下提取3次，每次1 h，合并濾液，減壓濃縮，得總浸膏40.2 g(16.6%)。總浸膏用水分散后，進行MCI凝膠柱層析，分別以純水、20%甲醇-水、40%甲醇-水、60%甲醇-水、80%甲醇-水和純甲醇進行梯度洗脫，合并得到6個組分：純水(A，23.9 g)、20%甲醇-水(B，3.9 g)、40%甲醇-水(C，2.7 g)、60%甲醇-水(D，3.1 g)、80%甲醇-水(E，3.9 g)和純甲醇(F，3.4 g)。

隨后，依次將A、B、C和D四個組分進行Sephadex LH-20柱層析(VMeOH∶Vwater= 1∶1)，經TLC檢測將點型相似的組分合并，分別從A中合并得到了6段流分(A1～6)，B中得到了5段(B1～5)，C中得到了3段(C1～3)，D中得到3段(D1～3)。其中，A1段經過Sephadex LH-20(VMeOH∶Vwater= 1∶1)進一步純化，得到5個流分A1-1～A1-5，A1-3經半制備液相(20%乙腈-水)，分離得到化合物3(130.0 mg，24 min)。A2經半制備液相色譜，以25%乙腈-水溶劑洗脫，得化合物2(5.1 mg，26 min)。A4經半制備液相(20%乙腈-水)制備，分離得到化合物1(15.7 mg，17 min)。B4經半制備型HPLC-YMC色譜，40%甲醇-水為洗脫劑，分離得到化合物6(243.8 mg，24 min)和化合物7(251.6 mg，27 min)。B5段經過反相柱層析(10%甲醇水→60%甲醇水)得到B5-1～B5-4四個流分，其中B5-3使用半制備型HPLC-YMC(18%乙腈-水)分離，依次得到化合物8(150.9 mg，23 min)、9(206.0 mg，26 min)、10(60.2 mg，19 min)和11(100.6 mg，34 min)。C2段經Sephadex LH-20(VMeOH∶Vwater= 1∶1)純化得C2-1～C2-4，C2-3通過半制備高效色譜(28%乙腈-水)制備，得化合物4(3.2 mg，28 min)。C3經過Sephadex LH-20(VMeOH∶Vwater= 2∶1)柱色譜純化，結合半制備高效色譜(39%乙腈-水)，分離得到化合物5(2.5 mg，17 min)。D2利用半制備型HPLC-YMC(25%乙腈-水)制備，得到化合物12(6.0 mg，27 min)。D3經Sephadex LH-20(VMeOH∶Vwater= 2∶1)純化得化合物13(5.0 mg)。E段組分經硅膠柱層析，使用石油醚-乙酸乙酯(100∶1→1∶1)梯度洗脫，合并濃縮后得E1～E6，E1經Sephadex LH-20柱(VMeOH∶VEDC=1∶1)進一步純化，得化合物14(15.4 mg)。F段經過硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯100∶1→1∶1)梯度洗脫，得到流分F1～F6，F2經反復結晶得化合物15(10.3 mg)。

2.2 體外抗氧化活性測定

2.2.1 DPPH自由基清除測定

參考Xiang[5]的方法對大葉鑼浸膏的六個不同極性組分(A～F)和6個含量較高的化學成分(化合物6～11)進行DPPH自由基清除能力的測定。將待測樣品用DMSO溶解并稀釋至一系列適當的濃度，取20.0 μL待測液與新鮮制備的DPPH溶液(160.0 μL，2.0 × 10-4mol/L)混合，搖勻后避光放置30 min。反應完畢后迅速在全波長掃描式多功能讀數儀下于515 nm處讀數，使用抗壞血酸作陽性對照，并以不同質量濃度(5.0、20.0、50.0、100.0、150.0 μg/mL)抗壞血酸的吸光度為縱軸，濃度為橫軸繪制標準曲線。結果表示為每克干燥樣品的抗壞血酸當量(mmol VCE/g)，所有試驗均重復三次。

2.2.2 ABTS+自由基清除測定

ABTS+自由基清除能力的測定參照Apea-Bah[6]所述的方法進行：將ABTS+溶液用無水乙醇適當稀釋，使得ABTS+儲備液在734 nm處的吸光度為0.7左右，然后將待測樣品(20.0 μL)加到70.0 μL的ABTS+自由基儲備溶液中，室溫下反應10 min后在734 nm處讀取吸光度。同DPPH測定法一樣，以Vc作陽性對照，并繪制標準曲線。自由基清除活性顯示為每克干樣品的抗壞血酸當量(mmol VCE/g)，所有試驗均重復三次。

2.2.3 總還原能力測定(FRAP)

根據文獻[7]的方法，我們對各個樣品的總還原能力進行了測定。以FeSO4作為陽性對照，取10.0 μL待測液與180.0 μL反應液(TBTZ)混合，37 ℃水浴保持30 min后于593 nm處讀數。結果以不同濃度的FeSO4(50.0、100.0、200.0、300.0、400.0、500.0 μg/mL)做標準曲線，計算每克樣品中的FeSO4當量(mmol FeSO4/g)，所有試驗均重復三次。

3 實驗結果

3.1 化合物的結構鑒定

化合物1白色粉末(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：6.96(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，6.64(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，3.51(2H，t，J= 7.2 Hz，H-2′)，2.59(2H，t，J= 7.2 Hz，H-1′)。經與文獻[8]比對基本一致，鑒定該化合物為對羥基苯乙醇。

化合物2白色粉末(MeOH);1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.44(1H，d，J= 8.6 Hz，H-6)，7.42(1H，s，H-2)，6.85(1H，d，J= 8.6 Hz，H-5)，3.80(3H，s，OCH3)。經與文獻[9]比對基本一致，鑒定該化合物為香草酸。

化合物3黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈黃色。ESI-MS：m/z478.92 [M-H]-；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.42(1H，d，J= 4.7 Hz，H-2′)，7.35(1H，dd，J= 9.1，4.7 Hz，H-6′)，6.93(1H，s，H-8)，6.88(1H，d，J= 9.1 Hz，H-5′)，6.70(1H，s，H-3)，5.10(1H，d，J= 6.0 Hz，H-1″)，3.26～3.88(m，Glu-H)。經與文獻[10]比對基本一致，鑒定該化合物為6-hydroxyluteolin-7-O-glucuronide。

化合物4黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈黃色。ESI-MS：m/z463.08 [M+H]+，301.02 [M - Glc+H]+；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：8.05(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2′，6′)，7.19(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3′，5′)，6.96(1H，s，H-8)，6.83(1H，s，H-3)，5.03(1H，d，J= 7.2 Hz，Glc-H-1)，3.92(3H，s，OCH3)，3.72～3.17(m，Glc-H)。經與文獻[11]比對基本一致，鑒定該化合物為stachannin A。

化合物5黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈黃色。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ：7.89(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2′，6′ )，6.92(2H，d，J= 8.6 Hz，H-3′，5′)，6.83(1H，s，H-8)，6.63(1H，s，H-3)。與文獻[12]比對基本一致，鑒定該化合物為野黃芩素。

化合物6棕黃色固體(MeOH-Water);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色→淡黃綠色。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ：7.63(1H，d，J= 14.9 Hz，H-7″)，7.06(1H，d，J= 1.4 Hz，H-2″)，6.97(1H，dd，J= 8.1，1.4 Hz，H-6″)，6.80(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5″)，6.70(1H，d，J= 2.3 Hz，H-2)，6.67(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，6.58(1H，dd，J= 8.2，2.3 Hz，H-6)，6.26(1H，d，J= 14.9 Hz，H-8″)，5.35(1H，d，J= 1.5 Hz，Api-H-1)，4.40(1H，d，J= 7.9 Hz，Glc-H-1)，4.04(1H，m，H-8)，3.90(1H，d，J= 1.4 Hz，Api-H-2)，3.42～3.77(m，Api/Glc-H)，2.80(2H，m，H-7)；13C NMR(100 MHz,MeOD)δ：131.4(C-1)，114.9 (C-2)，146.1(C-3)，144.7(C-4)，116.5(C-5)，121.2(C-6)，36.5(C-7)，72.2(C-8)，127.6(C-1″)，115.1(C-2″)，146.8(C-3″)，149.7(C-4″)，117.1(C-5″)，123.1(C-6″)，147.7(C-7″)，116.3(C-8″)，168.3(C=O)，104.1(C-1′)，75.8(C-2′)，81.4(C-3′)，70.6(C-4′)，75.9(C-5′)，62.3(C-6′)，111.5(C-1′″)，78.2(C-2′″)，80.6(C-3′″)，75.12(C-4′)，65.6(C-5′)。經與文獻[13]比對基本一致，鑒定該化合物為calceolarioside E。

化合物7棕黃色固體(MeOH-Water);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ：7.48(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，6.93(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2″)，6.83(1H,dd，J= 8.2，1.9 Hz，H-6″)，6.66(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5″)，6.57(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2)，6.54(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，6.42(1H，dd，J= 8.2，1.9 Hz，H-6)，6.13(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，5.05(1H，s，Rha-H-1)，4.70(1H，t，J= 9.7 Hz，Glc-H-4)，4.25(1H，d，J= 7.9 Hz，Glc-H-1)，3.80～3.17(m，H-8 or Rha/Glc-H)，2.65(2H，m，H-7)，0.95(3H，d，J= 6.2 Hz，Rha-CH3)；13C NMR(100 MHz,MeOD)δ：131.4(C-1)，117.1(C-2)，144.6(C-3)，146.0(C-4)，116.5(C-5)，121.3(C-6)，36.5(C-7)，72.3(C-8)，127.6(C-1″)，115.2(C-2″)，149.7(C-3″)，146.8(C-4″)，116.3(C-5″)，123.2(C-6″)，148.0(C-7″)，114.6(C-8″)，168.3(C=O)，104.1(C-1′)，76.1(C-2′)，81.7(C-3′)，70.5(C-4′)，75.9(C-5′)，62.3(C-6′)，103.0(C-1′)，72.2(C-2′)，72.0(C-3′)，73.8(C-4′)，70.4(C-5′)，18.4(C-6′)。經與文獻[14]比對基本一致，鑒定該化合物為verbasoside。

化合物8深棕綠色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.49(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.05(1H，s，H-2″)，6.99(1H，d，J= 7.7 Hz，H-6″)，6.75(1H，d，J= 7.7 Hz，H-5″)，6.64(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.62(1H，s，H-2)，6.48(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，4.63(1H，t，J= 9.4 Hz，Glc-H-4)，4.27(1H，d，J= 7.7 Hz，Glc-H-1)，3.06～3.89(m，H-8/Glc-H)，2.68(2H，m，H-7)；13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ：129.2(C-1)，116.3(C-2)，145.5(C-3)，145.0(C-4)，114.9(C-5)，119.6(C-6)，35.1(C-7)，70.3(C-8)，125.5(C-1″)，115.5(C-2″)，145.7(C-3″)，148.6(C-4″)，115.8(C-5″)，121.4(C-6″)，143.6(C-7″)，113.9(C-8″)，166.0(C=O)，102.8(C-1′)，74.1(C-2′)，74.7(C-3′)，71.3(C-4′)，73.6(C-5′)，60.9(C-6′)。經與文獻[15]比對基本一致，鑒定該化合物為calceolarioside A。

化合物9棕綠色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.44(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.05(1H，s，H-2″)，6.96(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6″)，6.74(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5″)，6.60(1H，s，H-2)，6.57(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.44(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6)，6.27(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，4.37(1H，d，J= 11.7 Hz，Glc-6′a)，4.22(1H，d，J= 7.6 Hz，Glc-H-1)，4.14(1H，dd，J= 11.7，6.0 Hz，Glc-6′b)，2.97～3.77(m，H-8/Glc-H)，2.65(2H，m，H-7)；13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ：129.4(C-1)，116.1(C-2)，145.3(C-3)，143.8(C-4)，116.6(C-5)，119.7(C-6)，35.4(C-7)，70.5(C-8)，125.6(C-1″)，114.0(C-2″)，145.9(C-3″)，148.9(C-4″)，115.7(C-5″)，121.7(C-6″)，145.3(C-7″)，115.1(C-8″)，166.8(C=O)，103.2(C-1′)，73.6(C-2′)，76.7(C-3′)，70.3(C-4′)，74.0(C-5′)，63.8(C-6′)。經與文獻[16]比對基本一致，鑒定該化合物為calceolarioside B。

化合物10深墨綠色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.43(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.05(1H，s，H-2″)，6.98(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6″)，6.75(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5″)，6.63(1H，s，H-2)，6.62(1H，d，J= 8.3 Hz,H-5)，6.47(1H，d，J= 8.3 Hz，H-6)，6.24(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，4.88(1H，t，J= 9.3 Hz，Glc-H-3)，4.32(1H，d，J= 7.7 Hz，Glc-H-1)，3.86～3.77(m，H-8/Glc-H)，2.65(2H，m，H-7)；13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ：129.2(C-1)，116.4(C-2)，145.2(C-3)，143.6(C-4)，115.9(C-5)，119.6(C-6)，34.7(C-7)，70.2(C-8)，125.7(C-1″)，115.5(C-2″)，145.7(C-3″)，148.4(C-4″)，115.5(C-5″)，121.3(C-6″)，144.8(C-7″)，114.8(C-8″)，166.2(C=O)，102.6(C-1′)，71.5(C-2′)，77.8(C-3′)，68.0(C-4′)，76.7(C-5′)，60.7(C-6′)。經與文獻[17]比對基本一致，鑒定該化合物為plantainoside A。

化合物11棕黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈紅色→淡黃綠色。1H NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ：7.44(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7″)，7.05(1H，s，H-2″)，6.95(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6″)，6.74(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5″)，6.60(1H，s，H-2)，6.57(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，6.44(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，6.27(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8″)，5.22(1H，d，J= 1.5 Hz，Api-H-1)，4.35(1H，d，J= 11.3 Hz，Glc-H-1)，4.19(1H，m，H-8)，3.99(1H，d，J= 1.4 Hz，Api-H-2)，3.15～3.88(m，Api/Glc-H)，2.67(2H，m，H-7)；13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ：129.1(C-1)，116.3(C-2)，145.6(C-3)，143.6(C-4)，115.5(C-5)，119.5(C-6)，34.9(C-7)，70.4(C-8)，125.4(C-1″)，114.9(C-2″)，145.4(C-3″)，148.6(C-4″)，115.8(C-5″)，121.5(C-6″)，145.0(C-7″)，113.8(C-8″)，166.6(C=O)，102.8(C-1′)，73.5(C-2′)，81.7(C-3′)，68.5(C-4′)，73.6(C-5′)，63.7(C-6′)，109.2(C-1′″)，76.0(C-2′″)，79.1(C-3′″)，73.3(C-4′″)，63.0(C-5′″)。經與文獻[18]比對基本一致，鑒定該化合物為isonuomioside A。

化合物12黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈黃色。ESI-MS:m/z485.09 [M+Na]+，323.15 [M - Glc+Na]+，301.16 [M - Glc+Na]+；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.97(H，d，J= 8.7 Hz，H-2′，6′)，6.93(2H，d，J= 8.7 Hz，H-3′，5′)，6.93(1H，s，H-8)，6.84(1H，s，H-3)，5.03(1H，m，Glc-H-1)，3.90(3H，s，OCH3)。與文獻[19]比對基本一致，鑒定該化合物為7-O-甲基黃芩素-6-O-葡萄糖苷。

化合物13黃色固體(MeOH);5%硫酸-乙醇顯色劑呈黃色。ESI-MS：m/z485.12 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：7.86(2H，d，J= 8.3 Hz，H-2′，6′)，6.86(2H，d，J= 8.3 Hz，H-3′，5′)，6.60(1H，s，H-8)，6.38(1H，s，H-6)，5.41(1H，br s，Glc-H-1)，3.83(3H，s，OCH3)。與文獻[20]比對基本一致，鑒定該化合物為鼠李檸檬素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物14橙紅色晶體(CHCl3);5%硫酸-乙醇顯色劑呈橙紅色。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ：13.33(1H，s，1-OH)，12.94(1H，s，4-OH)，8.35(2H，m，H-6，7)，7.86(2H，m，H-5，8)，7.44(1H，s，H-3)，4.86(2H，s，2-CH2)。與文獻[21]比對基本一致，鑒定該化合物為1，4-二羥基-2-羥甲基蒽醌。

化合物15橙紅色晶體(CHCl3);254 nm處有紫外吸收，5%硫酸-乙醇顯色劑呈橙紅色。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ：13.37(1H，s，1-OH)，12.99(1H，s，4-OH)，8.37～8.34(2H，m，H-6，7)，7.84～7.82(2H，m，H-5，8)，7.18(1H，q，H-3)，2.38(3H，d，J= 0.7 Hz，CH3)。與文獻[22]比對基本一致，鑒定該化合物為1，4-二羥基-2-甲基蒽醌。

3.2 體外抗氧化活性的測定

植物能夠產生高度多樣化的天然抗氧化劑，這些物質在防止或延緩活性氧和非自由基對脂質、蛋白質和核酸的氧化損傷中起著重要作用，因此對植物中化合物進行抗氧化活性的測定是非常必要的。本實驗測定了大葉鑼總浸膏A～F六個組分以及化合物6～11的體外抗氧化活性，結果如圖2所示。每個化合物均表現出一定的抗氧化能力，DPPH測定的變化范圍為0.02～0.35 mmol VCE/g，ABTS為0.25～4.28 mmol VCE/g，FRAP為0.29～18.16 mmol FeSO4/g。

DPPH自由基抗氧化能力測試結果表明，化合物10(5.35±0.04 mmol VCE/g)的DPPH自由基清除能力最強，各個化合物DPPH自由基清除活性順序如下：10>9>11>6>7>8。其中化合物9(5.14±0.36 mmol VCE/g)和10的DPPH自由基清除活性略小于陽性對照組(5.68±0.10 mmol VCE/g)，并且表現出比酪醇(EC50= 11.74 mg/mL)更強的抗氧化活性[23]?；衔?和10在ABTS自由基清除測定和FRAP測定中同樣也顯示出更高的抗氧化活性，且化合物6～11的總還原能力均大于FeSO4(6.58 mmol/g)，顯示出了良好的抗氧化活性。有文獻報道多個酚羥基的出現，尤其是存在鄰二羥基構象的排列是具有良好自由基清除活性的重要結構特征[24]。從大葉鑼中分離得到的化合物6～11皆具“鄰二羥基構象”的咖啡酸和羥基酪醇片段，進一步證明了該類化合物具有較高體外抗氧化活性的結構基礎。

同時，各組分的體外抗氧化活性測定的結果表明，B(3.58±0.00 mmol VCE/g)、C(2.75±0.07 mmol VCE/g)和D(3.41±0.01 mmol VCE/g)組分的DPPH、ABTS自由基的清除能力優于其他組分，按以下順序排列：B > C > D > A > E > F。結合該植物各極性段所含化合物類型情況，具有強抗氧化性的苯乙醇苷類和黃酮類化合物主要來源于B、C和D這三段，由此可以說明這類化合物的存在是其高抗氧化性的主要貢獻者。

圖2 大葉鑼化學成分及浸膏的抗氧化活性測定結果Fig.2 Antioxidant activity of chemical constituents and different extracts from D.sesquifolia.

4 結論

本研究從大葉鑼植物全草的甲醇以及甲醇-水提取物中共分離鑒定了15個化合物，所有化合物均首次從漏斗苣苔屬植物中分離得到。結果顯示大葉鑼的酚性成分主要為苯乙醇苷類和黃酮類化合物，首次揭示了漏斗苣苔屬植物成分多樣性。此外，體外抗氧化活性研究結果表明，各組分以及主要化合物均具有抗氧化活性。其中苯乙醇苷類化合物9和10的抗氧化活性最為優異，為大葉鑼提取物的抗氧化活性提供了物質基礎。截至目前國內外對大葉鑼的研究甚少，本次研究補充了該植物在化學成分以及抗氧化活性方面的知識，為其在天然抗氧化劑的開發以及藥物先導化合物的篩選上奠定基礎。此外，該研究分析的植物總浸膏量較少，分離鑒定的大多為主要化學成分，對其微量成分的研究有所欠缺，而且生物活性的研究比較單一，僅涉及到體外抗氧化活性。后續研究將會圍繞微量成分的分析以及文獻提及的神經保護等生物活性開展，試圖尋找結構新穎皆具良好生物活性的化合物。