乳粉中金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析

摘 要：通過平板計(jì)數(shù)法和3M測(cè)試片法對(duì)兩個(gè)乳粉樣品中的金黃色葡萄球菌進(jìn)行定量檢測(cè)，結(jié)果分別為2 800 CFU/ g和3 200 CFU/g。Z值分別為0.3和0.1，結(jié)果均為滿意。通過開展能力驗(yàn)證可以更好地提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力。

關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌；定量檢測(cè)；能力驗(yàn)證

金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當(dāng)?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報(bào)道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件占食源性微生物食物中毒事件的25%左右[1]，由此可見金黃色葡萄球菌對(duì)食品安全的威脅很大。所以做好食品中金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)室參加了2018年度乳粉中金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)能力驗(yàn)證，通過能力驗(yàn)證可以提高實(shí)驗(yàn)室對(duì)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)能力，通過檢驗(yàn)結(jié)果有效評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)方法。

1 材料和方法

1.1 樣品和菌株

陽性對(duì)照菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 6538；陰性對(duì)照菌株：表皮葡萄球菌CICC 26069。

樣品：由中國(guó)食品藥品檢定研究院發(fā)放兩個(gè)待測(cè)樣品code 0010和code 0092。每件樣品由1個(gè)菌球和相應(yīng)的1袋奶粉基質(zhì)組成。

1.2 主要培養(yǎng)基與儀器設(shè)備

Baird-Parker瓊脂平板（廣東環(huán)凱）；凍干兔血漿（北京陸橋）；腦心浸出液（BHI）肉湯（北京陸橋）；血平板（北京陸橋）。

自動(dòng)微生物快速檢定分析系統(tǒng)（VITEK 2 COMPACT 30），生化培養(yǎng)箱。

1.3 方法

采用Baird-Parker平板計(jì)數(shù)法。

1.3.1 樣品前處理及前增菌

在生物安全柜內(nèi)將裝有金黃色葡萄球菌樣品的西林瓶打開，取225 mL滅菌稀釋液加入到無菌均質(zhì)袋中，并將西林瓶中小球加入到稀釋液中，充分溶解。然后再與西林瓶有相同編碼的乳粉樣品加入到上述稀釋液中，充分均質(zhì)混勻。此溶液即為濃度為10-1 CFU/g的待測(cè)樣品。

1.3.2 樣品稀釋

用1 mL微量移液器吸取濃度為10-1 CFU/g待測(cè)樣品1 mL，緩慢注入盛有9 mL磷酸鹽緩沖液無菌試管中，渦旋振蕩充分混勻，按此方法將樣品稀釋至濃度為10-6 CFU/g。

1.3.3 樣品接種

吸取10-1～10-6 CFU/g的樣品勻液 1 mL樣品勻液0.3、0.3、0.4 mL分別加入3塊Baird-Parker平板，同時(shí)做一組平行試驗(yàn)，然后用一次性L棒涂布整個(gè)平板，未觸及平板邊緣。

1.3.4 培養(yǎng)

涂布后，將平板放在培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)1 h，等樣品勻液吸收后翻轉(zhuǎn)平皿，倒置于培養(yǎng)箱，（36±1）℃培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后，觀察Baird-Parker平板上菌落的形態(tài)。選取可疑菌落進(jìn)行血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算陽性菌數(shù)目。

1.3.5 3M測(cè)試片法

將測(cè)試片放置在生物安全柜中，揭起上層膜。使用吸管將1 mL樣品垂直滴在測(cè)試片的中央處。將壓板放置在上層膜中央處。輕輕壓下，使樣品液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)基上。且勿扭轉(zhuǎn)或滑動(dòng)壓板，靜置1 min后使培養(yǎng)基凝固。

2 結(jié)果

2.1 Baird-Parker平板計(jì)數(shù)法結(jié)果

培養(yǎng)48 h后的BP平板上共有3種菌落形態(tài)：1號(hào)黑色較大圓形菌落，周圍無明顯白色沉淀環(huán)；2號(hào)黑色圓形菌落，較大沉淀環(huán)，外有一層透明圈；3號(hào)黑色圓形菌落，表面光滑，周圍有沉淀環(huán)，外有一層清晰帶。

從合適稀釋度且有典型金黃色葡萄球菌菌落的Baird-Parker平板上挑取菌落劃線接種到血瓊脂平板上，置于（36±1）℃培養(yǎng)24 h后，菌落形態(tài)為：1號(hào)灰色圓形菌落，無溶血圈；2號(hào)灰白色圓形菌落，有溶血圈；3號(hào)金黃色較小圓形菌落，有溶血圈。

血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)：分別挑取BairdParker平板上典型及可疑菌落10個(gè)，分別接種到BHI肉湯中（36±1）℃培養(yǎng)24 h后，接種凍干兔血漿，置于（36±1）℃，每30 min觀察一次，觀察6 h。觀察結(jié)果如表1所示。

上機(jī)實(shí)驗(yàn)：挑取3個(gè)典型菌落用VITEK 2 COMPACT 30進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，結(jié)果為：Code 0010 1號(hào)與溶血葡萄球菌有95%的相似率；2號(hào)于糞腸球菌有99%的相似率；3號(hào)與金黃色葡萄球菌有99%的相似率。Code 0092 1號(hào)與糞腸球菌有99%的相似率；2號(hào)與溶血葡萄球菌有99%的相似率；3號(hào)與金黃色葡萄球菌有99%的相似率。

由此可見，3號(hào)菌落為金黃色葡萄球菌。確認(rèn)典型菌落數(shù)記錄結(jié)果為：code 0010為2 800 CFU/g；code 0092為3 200 CFU/g，結(jié)果均為滿意。

2.2 3M測(cè)試片結(jié)果

兩個(gè)樣品的含菌量分別為3 500 CFU/g，3 300 CFU/g，兩種方法結(jié)果上差別不大。測(cè)試片法是基于微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)從而顯色的原理進(jìn)行檢測(cè)。3M上的目標(biāo)菌落均呈現(xiàn)紫紅色，而其他菌被抑制，顏色不明顯，并且相比傳統(tǒng)方法有操作簡(jiǎn)便、工作量少、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，并且與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果相差不大。

3 結(jié)語

在此次能力驗(yàn)證中分別用了兩種方法對(duì)乳粉中金黃色葡萄球菌進(jìn)行定量檢測(cè)，結(jié)果滿意。相比之下，金黃色葡萄球菌測(cè)試片顯色明顯，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)要求相對(duì)較低；而且操作快速、簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間；在計(jì)數(shù)方面，結(jié)果顯示與Baird-Parker平板上的計(jì)數(shù)值十分接近，實(shí)際應(yīng)用中，金黃色葡萄球菌測(cè)試片能在很大程度上縮短檢測(cè)時(shí)間[2]，在實(shí)驗(yàn)室快速檢驗(yàn)中有很大的利用空間。但是測(cè)試片法有很多不成熟的地方，因此選用哪種方法還是根據(jù)樣品形狀、環(huán)境等因素來決定。

參考文獻(xiàn)

[1]Atanassova V，Meindla R.Prevalence of Staphylococcus aureus and Staphylococcal enterotoxins in raw pork and uncooked smoked hamacomparison of classical culturing detection and RFLP-PCR[J].Int J Food Microbiol，2001，68（1-2）：105.

[2]謝作蓉，楊穗珊，林青，等.能力驗(yàn)證中金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)結(jié)果分析與方法比較[J].現(xiàn)代食品，2017（20）： 111-113.

作者簡(jiǎn)介：張悅（1990—），女，河南三門峽人，碩士，助理工程師。研究方向：食品微生物。