Y染色體AZFb區sY1192缺失5例報告并文獻復習

郭廷超，孟令波，梁悅，盧永平

（中國醫科大學 1.附屬生殖醫院男科；2.附屬生殖醫院檢驗科；3.國家衛健委生殖健康與遺傳醫學重點實驗室，沈陽 110031）

Y染色體長臂的微缺失與男性精子生精功能密切有關。這些微缺失主要發生在3個區域：無精子因子（azoospermia factor，AZF）a區、AZFb區和AZFc區。Y染色體上1個或多個AZF區域的缺失是男性不育最常見的遺傳原因之一，生精功能異常的程度通常取決于缺失的類型（位置）和缺失范圍［1］。本研究回顧性分析5例Y染色體AZFb區sY1192缺失患者精液常規、精漿生化、內分泌激素、抑制素B、染色體情況，現報道如下：

1 臨床資料

患者均是遼寧省計劃生育科學研究院門診因不孕不育就診的男性患者。其中1例精液常規正常；1例少精子癥；3例無精子癥伴內分泌異常，其中1例無精子為克氏癥。

（1）精液常規分析：患者禁欲2～7 d，手淫法取精，患者近期無發熱、無酗酒，取精完全。少精子檢測2次間隔1個月。無精子間隔3周檢測3次，均離心鏡檢，同時脫落細胞染色檢測。（2）染色體核型分析：采集患者外周血進行淋巴細胞培養，G顯帶核型分析。（3）內分泌激素檢測：患者上午8：00～10：00空腹采集靜脈血，化學發光法（羅氏發光儀cobas e602）檢測。（4）Y染色體微缺失檢測：采集患者外周血進行抗凝處理，采用深圳亞能生物技術有限公司提供的DNA提取試劑盒提取 DNA，采用多重 PCR 技術對15個位點進行擴增，擴增產物采用瓊脂糖凝膠電泳進行分析。

2 結果

結果顯示，5例患者均存在AZFb區sY1192缺失?；颊?為精液常規正常，患者2為少精子癥，患者3和4為無精子癥伴內分泌異常，患者5為無精子癥伴克氏征。見表1。

3 討論

近年研究［2］發現Y染色體長臂上含有與精子發生密切相關的基因，根據其在精子發生不同階段中的作用將其分為AZFa區、AZFb區和AZFc區。研究［3］表明，這些區域較易發生染色體重排，常表現為Y染色體微缺失，可能是由于Y染色體上同源序列較多引起的。Y染色體微缺失可影響生精功能，導致男性不育。生育問題的嚴重程度通常取決于缺失的類型（位置）和范圍。一般來說，AZFa區缺失與唯支持細胞綜合征（sertoli cell only syndrome，SCOS）或生精阻滯相關，AZFb區完全缺失與睪丸生精阻滯相關，而AZFa區部分缺失、AZFb區部分缺失和（或）AZFc缺失可導致廣泛的睪丸表型，包括SCOS、精子發生阻滯或少精子癥，偶見精液正?；颊摺Ｄ壳埃瑢τ谀承?AZF區部分缺失與生精障礙的相關性尚有爭論。本研究報道5例Y染色體AZFb區sY1192缺失，分別表現為生精正常、少精子和無精子。

表1 5例AZFb區sY1192缺失患者的臨床檢查結果

歐洲男科學會和歐洲分子遺傳學質量網絡共識［4-5］推薦使用6個STS標記檢測Y染色體微缺失，包括sY84和sY86（AZFa），sY127和sY134（AZFb），sY254和sY255（AZFc），可檢測臨床相關和研究報道的95%缺失類型。另外，采用額外的8個STS位點可以進一步分析AZFa區和AZFb區是否發生區段的缺失，這些位點包括sY82、sY83或者sY1064（AZFa近端），sY1065、sY1182或 者sY88（AZFa遠 端）；sY105、sY121或者sY1224（AZFb近端），sY143、sY1192或者sY153（AZFb遠端）。本研究采用的試劑盒包括推薦的6個位點、8個拓展位點及異染色體標簽（sY160）、SRY基因，可以提高AZF區域缺失的檢出率。

男性不育與Y染色體微缺失之間的聯系已明確，但Y染色體微缺失導致男性不育是否存在個體差異以及其作用機制尚未完全清楚。男性生精功能可能受Y染色體上特殊基因點突變、微重排和缺失等影響。由于Y染色體是以單倍體形式存在的，基因缺失有可能產生明顯的生物學效應［6］。目前研究報道Y染色體部分缺失而臨床表型不一致患者，可能存在以下2種原因：（1）2個或多個STS位點可以判斷相應AZF區的微缺失，而單獨1個STS位點缺失由于其斷裂點的不同存在多種可能性，與生精功能相關基因有可能并未缺失或者部分缺失，通過擴展體系STS標記，可以進一步分析確認缺失的存在和程度；（2）精子發生是多基因時序調控過程，除少量 Y染色體基因單獨缺失或突變能引起明顯效應外，其他基因單獨缺失時并不會表現出明顯的表型效應。另外，有研究［7］報道由于下游引物存在單核苷酸多態性，可能會造成部分缺失假陽性結果（亞洲人群特有）。

有研究［8］報道AZFb區部分缺失也可表現少精子癥，并且隨著年齡增加精子密度逐年降低。STOUFFS等［1］報道2例重度少精患者AZFb區大部缺失，僅sY1192位點保留，認為sY1192位點可以作為睪丸活檢取精的重要標志物。本研究患者1精液常規檢測正常，患者2表現為少精子癥，雖然都是sY1192位點缺失，但是可能缺失的范圍較小，精子發生相關的基因仍全部或者部分保留。而患者3、4、5表現為無精子癥，推測相關生精基因完全缺失，僅保留了相鄰的STS位點。另外，患者1和患者2不排除由于AZFb區sY1192的缺失而導致年齡依賴性、精子逐漸惡化的可能性。因而需要觀察診治過程中精液變化，有惡化趨勢可考慮進行輔助生殖或冷凍精子。此外，建議AZF區缺失患者的兒子在青春期接受Y染色體微缺失檢測，并可能在成年早期冷凍精液［9］。

研究［10］表明，部分AZF缺失患者會出現內分泌異常，表現為卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）增高、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）正?；蛏摺⒉G酮（testosterone，T）正?；蚪档停罕憩F為少精或無精。本研究無精子、少精子患者均表現T下降，FSH增高、LH正?；蛳鄳煌潭鹊脑龈?。與以往研究結果相近。這可能是Y染色體微缺失導致睪丸功能受損，反饋下丘腦-垂體-性腺軸，導致FSH、LH、T異常表現［11］。

綜上所述，本研究5例Y染色體AZFb區sY1192缺失患者臨床表現差異較大。Y染色體部分缺失與精子發生關系有待進一步研究，需要大量臨床資料證實和長期隨訪觀察。高通量測序技術的發展推動了男性不育相關基因研究，更多AZF缺失類型及其相關的其他基因突變將被發現［12］，為Y染色體微缺失與男性不育的研究、診療帶來更為精準依據和指導。