黃芪多糖對動物免疫器官生長發(fā)育的影響

馬發(fā)順，范樂樂，時(shí)志琪，梁秀麗，宋玉偉，元雪湞

（1.安陽工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，河南安陽455000；2.河南省獸用生物制品研發(fā)與應(yīng)用國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室/河南省動物疫病防控與營養(yǎng)免疫院士工作站，河南安陽455000；3.河南省獸藥飼料監(jiān)察所，鄭州450000）

中藥黃芪為蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其中最主要的活性成分是多糖、皂甙、黃酮等[1]。黃芪多糖（APS）具有促進(jìn)動物免疫器官發(fā)育、提高機(jī)體免疫力、促進(jìn)生長發(fā)育等功能，是較好的免疫調(diào)節(jié)劑。楊慶芳等[2]、柳志余等[3]和孫波等[4]研究表明，肉雞和珍珠雞日糧中添加APS可提高日增重和免疫器官功能；蒙洪嬌等[5]和李春鳳等[6]研究表明，APS可提高仔豬日增重和免疫功能；桑秋凌等[7]認(rèn)為APS可增強(qiáng)大鼠細(xì)胞免疫功能；蔣瑞雪等[8]研究了APS對小鼠免疫功能的影響；葛斌等[9]研究了APS對小鼠的抗衰老作用機(jī)制。上述研究主要集中在APS對動物的生產(chǎn)性能和免疫功能方面，而針對動物免疫器官生長發(fā)育的研究比較少。筆者以昆明鼠為試驗(yàn)動物，在APS生物活性檢測的基礎(chǔ)上研究其對小鼠免疫器官的影響，為以后APS的作用機(jī)理研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物

昆明小鼠（SPF級）購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心。飼養(yǎng)室保持空氣流通，自然光照，溫度控制在20～26℃，濕度控制在40%～70%；所用飼料（SPF級），購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心；飲水為去離子水；保持小鼠生活環(huán)境清新，保持飼料、飲水清潔。

1.1.2 試驗(yàn)儀器和藥品

電子天平（型號ES3200），天津市德安特傳感技術(shù)有限公司生產(chǎn)；獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具（型號IVCII），上海康為醫(yī)療科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；黃芪多糖注射液（規(guī)格以葡萄糖計(jì)100mL：1.0g），河南省各獸藥廠提供；氯化鈉注射液（規(guī)格0.90%），河南科倫藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

取體重18～20 g健康昆明鼠64只，隨機(jī)分為8組，每組8只；其中4組為試驗(yàn)組，4組為對照組。安排4種APS樣品進(jìn)行試驗(yàn)，每1種樣品設(shè)1組試驗(yàn)，1組對照。試驗(yàn)組每只腹腔注射黃芪多糖注射液0.5 mL/d，對照組注射等量生理鹽水；試驗(yàn)期為7 d。

1.2.2 測定項(xiàng)目

最后1次注射APS 24 h后將小鼠處死，稱量小鼠的體重、脾重和胸腺重，并計(jì)算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)；脾指數(shù)=脾臟重(mg)/體重(g)，胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/體重(g)。再計(jì)算試驗(yàn)組相對于對照組的增長率：增長率=(試驗(yàn)組測量值－對照組測量值)/對照組測量值×100%。按照《中華人民共和國獸藥典》（2015版二部）的規(guī)定，試驗(yàn)組與對照組脾指數(shù)差值≥2判定樣品為合格，差值＜2判定樣品為不合格。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

使用Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和描述統(tǒng)計(jì)，試驗(yàn)組與對照組間的比較采用t檢驗(yàn)法，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各項(xiàng)目初步統(tǒng)計(jì)結(jié)果

APS生物活性檢測各項(xiàng)目測定結(jié)果見表1。

從表1可以看出，脾重和脾指數(shù)在4種樣品試驗(yàn)組與對照組間均差異極顯著（P＜0.01），胸腺重1種樣品差異極顯著（P＜0.01）、2種樣品差異顯著（P＜0.05）；胸腺指數(shù)1種樣品差異極顯著（P＜0.01）、1種樣品差異顯著（P＜0.05）；體重2種樣品差異極顯著（P＜0.01）、1種樣品差異顯著（P＜0.05），但樣品S2t值為負(fù)值。從變異系數(shù)（CV）來看，胸腺重和胸腺指數(shù)變異程度較大，其次是體重，脾重和脾指數(shù)變異程度最小。

表1 各項(xiàng)目測定結(jié)果

2.2 各項(xiàng)目增長情況

比較各項(xiàng)目試驗(yàn)組相對于對照組的增長情況，計(jì)算的絕對差值和增長率見表2。

表2 各項(xiàng)目試驗(yàn)組相對于對照組的增長情況

從表2可以看出，體重項(xiàng)差值大小順序?yàn)椋篠3、S4、S1、S2，脾重項(xiàng)為：S1、S3、S4、S2，胸腺重項(xiàng)為：S4、S3、S2、S1，脾指數(shù)項(xiàng)為：S1、S2、S3、S4，胸腺指數(shù)項(xiàng)為：S4、S2、S3、S1。從各項(xiàng)目增長率的比較來看，樣品 S1和S3的脾重增長率均最大，樣品S4的胸腺重最大，樣品S2的胸腺指數(shù)最大。樣品S2的體重項(xiàng)試驗(yàn)組小于對照組。根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)可判定樣品S1、S2、S3為合格品，樣品S4不合格。

2.3 合格樣品試驗(yàn)組與對照組的比較

將合格樣品S1、S2、S3進(jìn)行綜合分析，考查各項(xiàng)目試驗(yàn)組相對于對照組的變化情況，結(jié)果見表3。

從表3可以看出，試驗(yàn)組體重高于對照組體重5.67個(gè)百分點(diǎn)，但差異不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)組變異程度大于對照組；脾重試驗(yàn)組比對照組高71.98個(gè)百分點(diǎn)，差異極顯著（P＜0.01），試驗(yàn)組變異程度小于對照組；胸腺重試驗(yàn)組比對照組高25.93個(gè)百分點(diǎn)，差異顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組變異程度小于對照組；脾指數(shù)試驗(yàn)組比對照組高66.33個(gè)百分點(diǎn)，差異極顯著（P＜0.01），試驗(yàn)組變異程度小于對照組；胸腺指數(shù)試驗(yàn)組比對照組高17.29個(gè)百分點(diǎn)，但差異不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)組變異程度小于對照組。

3 討論與結(jié)論

1）從試驗(yàn)組與對照組的比較來看，APS對小鼠脾臟和胸腺生長均有促進(jìn)作用，但對脾臟生長的促進(jìn)作用更顯著，此結(jié)果與陳明志等[10]和高旭等[11]的研究結(jié)果一致。注射APS注射液可使小鼠脾重和脾指數(shù)極顯著提高（P＜0.01），可使胸腺重顯著提高（P＜0.05），而胸腺指數(shù)提高未達(dá)到顯著水平（P＞0.05），這與黃志遠(yuǎn)等[12]的研究結(jié)果不完全相同。APS對體重生長的影響不顯著（P＞0.05），此結(jié)果與楊慶芳等[2]、柳志余等[3]和孫波等[4]的結(jié)論不一致，這可能與動物的種類及試驗(yàn)設(shè)計(jì)有關(guān)。樣品S2體重項(xiàng)的特殊差異可能是由于試驗(yàn)應(yīng)激和誤差所造成。

表3 合格樣品試驗(yàn)組與對照組間的比較

2）APS對小鼠體重、脾重和胸腺重促生長作用程度不同。比較而言對脾重影響最大（增長率71.98%），其次是胸腺重（增重率25.93%），對體重影響最小（增長率5.67%）。由于APS樣品不同其生物學(xué)效價(jià)不同，對小鼠脾重、胸腺重和體重的影響有較大差異；小鼠個(gè)體對APS樣品的反應(yīng)不同，導(dǎo)致試驗(yàn)組體重變異程度有增大的傾向，而由于APS對免疫器官的促生長作用，使脾重和胸腺重的變異程度有減小的傾向。

3）按照我國獸藥典提供的方法進(jìn)行APS生物活性檢測，方法中僅規(guī)定了小鼠的體重要求，而沒有日齡、性別、注射操作、體重稱量、脾臟分離與稱量等方面的說明。在實(shí)際檢測時(shí)這些因素均可能成為誤差來源，影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)的精確性和準(zhǔn)確性。所以相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)試驗(yàn)規(guī)范性研究，出臺操作細(xì)則以降低試驗(yàn)誤差，提高試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。