HPLC 法測定夢縈口服液中馬錢苷的含量

賀程蓓，曲 萍，趙思俊，施懷生

（1.山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西 晉中030619； 2.山西省食品藥品檢驗所，山西 太原030001）

夢縈口服液是針對青年女性睡眠失調(diào)、精力不足而研發(fā)的一款中藥保健食品，由酸棗仁、山茱萸等五味中藥組成，具有填精益髓、養(yǎng)血補肝、寧心安神之功效。課題組前期已對酸棗仁中的酸棗仁皂苷A 進行了質(zhì)量標準研究。為了更加全面地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，擬對配方中山茱萸的質(zhì)量標準進行研究。

山茱萸（Cornus officinalis）是我國傳統(tǒng)的名貴滋補中藥材，以其干燥成熟果肉入藥，是山茱萸科山茱萸屬植物，主產(chǎn)于山西、陜西等省。山茱萸首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補益肝腎、收澀固脫的功效，用于治療眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽痿遺精、內(nèi)熱消渴等［1］。馬錢苷常被作為山茱萸的指標性成分，具有明顯的降血糖［2-3］、鎮(zhèn)靜催眠［4］、抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗抑郁［5］等功能。

本文采用高效液相色譜法對配方中山茱萸的主要成分馬錢苷建立了含量測定方法，并對其進行了方法學(xué)驗證，為進一步完善質(zhì)控標準提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

LC-20AT 高效液相色譜儀，SPD-M20A 紫外檢測器（日本島津公司），ME204/02 電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），TGCXW-10B 超聲波提取機（北京市弘祥隆生物技術(shù)有限公司）。

1.2 藥品與試劑

夢縈口服液的制法：按比例稱取藥材，煎煮2次，壓榨藥渣，合并煎液，濃縮藥液至1.4 g/mL（相當(dāng)于每毫升含生藥量1 g）。馬錢苷標準品（中國藥品生物制品檢定所，用于含量測定，批號：111640-200503），乙腈為色譜純（DIKMA，批號：R141261），甲醇為分析純（國藥化學(xué)試劑有限公司，批號：R141471），磷酸為分析純（國藥化學(xué)試劑有限公司，批號：20160706），實驗用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

2.2 檢測波長的選擇

根據(jù)上述液相色譜條件，對樣品溶液進行200～400 nm 波長范圍的光譜掃描。截取不同波長下色譜圖，在237 nm 下馬錢苷分離度好，并且峰形好。結(jié)果如圖1。

圖1 不同波長下供試品溶液的色譜圖

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液制備 精密稱取馬錢苷對照品適量置容量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.328 mg 馬錢苷的對照品溶液，搖勻，即得。

2.3.2 供試品溶液制備 取夢縈口服液1 mL 置于10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，稱重，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減少的質(zhì)量，即得。

分別取對照品溶液和供試品溶液，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，進樣10 μL，按上述試驗條件和儀器進行測定。色譜圖見圖2。

圖2 對照品溶液、供試品溶液的色譜圖（237 nm）

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取馬錢苷對照品溶液（濃度為0.328 mg/mL）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2 mL、3 mL 至10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，經(jīng)微孔濾膜（0.45 μm）濾過后注入高效液相色譜儀。以馬錢苷溶液濃度（μg/mL）為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=16 624X-2870.9，（r=0.999 8），表明馬錢苷在16.4～98.1 μg/mL 之間呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖3。

圖3 馬錢苷標準曲線

2.4.2 精密度試驗 取2.3.2 項下的供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進樣6 次，測定馬錢苷峰面積，結(jié)果RSD為0.51%，表明儀器的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取2.3.2 項下的供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 進樣測定馬錢苷的峰面積，RSD為0.78 %，提示供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗 分別精密吸取2.3.2 項下的供試品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL 至10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，稱重，超聲提取30 min，放冷，稱重，用甲醇補足減少的質(zhì)量，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，濾過后分別進樣，計算馬錢苷的含量，RSD為1.08 %，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 采用加樣回收方法，精密量取已知含量的樣品溶液適量（濃度為0.459 mg/mL），分別加入一定量的馬錢苷對照品，按前述方法制備供試品溶液，計算回收率，平均回收率為99.6 %，RSD為1.29 %。結(jié)果見表1。

3 討 論

采用高效液相色譜法測定馬錢苷含量的色譜系統(tǒng)多有報道，例如乙腈-水［6-8］、乙腈-磷酸水［9-10］等多個系統(tǒng)。本試驗對甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%乙酸溶液等流動相系統(tǒng)進行考察，選用乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）系統(tǒng)可以達到很好的分離效果，并且馬錢苷峰型較好，與相鄰峰分離度好。

表1 回收率試驗結(jié)果

文獻報道以236 nm［11-12］、240 nm［8-9］、230 nm［7］作為馬錢苷檢測波長，在本試驗中對供試品溶液進行200～400 nm 波長范圍掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)馬錢苷在237 nm 處有最大吸收，這可能與不同制劑中藥物配伍、提取方法、流動相不同等有關(guān)。

本文建立夢縈口服液中馬錢苷含量測定的液相色譜方法，經(jīng)過方法學(xué)考察，此法具有良好的精密度、準確度和重復(fù)性，簡便易行，可以更好地控制夢縈口服液的質(zhì)量，可為夢縈口服液質(zhì)量控制和綜合評價提供參考依據(jù)。