維生素D對嬰兒肝炎綜合征患兒炎癥因子的影響

曹軍華，朱 磊，朱俊嶺，祁伯祥

0 引言

嬰兒肝炎綜合征(Infantile hepatitis syndrome，IHS)是兒科較為常見的疾病，病因復雜，部分患兒可出現肝功能衰竭、凝血功能障礙等并發癥，嚴重威脅兒童生命健康。肝臟是脂溶性維生素代謝的主要場所，肝功能受損容易引起維生素D缺乏[1]。炎癥細胞浸潤、炎性反應增強是IHS患兒主要的病理改變之一，近年來，諸多研究提示，維生素D具有調節炎癥反應的作用[2-3]。基于此研究背景，本研究對我院確診IHS且合并維生素D缺乏的患兒口服治療劑量的維生素D，觀察其對患兒炎癥因子及肝功能的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2017年3月至2018年10月，我院共確診IHS患兒62例，根據臨床表現及肝膽ECT、B超等檢查排除先天性膽總管囊腫、膽道閉鎖等。男38例，女24例，年齡26～65 d，平均(39.55±10.81) d。將IHS合并維生素D缺乏的患兒應用隨機數字表的方法分為常規治療組和維生素D組;同期健康體檢的60例兒童作為對照組。IHS患兒與正常對照組、IHS兩亞組間患兒年齡、性別比例比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。患兒家長均知情同意并經我院醫學倫理委員會批準。

1.2 治療方法 常規治療組IHS患兒應用還原型谷胱甘肽及丁二磺酸腺苷蛋氨酸護肝利膽等治療，并按照第8版《兒科學》要求給予常規預防量的維生素D，400 IU/d口服；維生素D組在常規治療基礎上口服維生素D32 000 IU/d，連用10 d[4]。

1.3 標本采集及檢測 治療前及治療10 d后空腹6 h采肘靜脈血用于檢測單核細胞核因子-κB (NF-κB) p65含量、血清IL-6、TNF-α水平及維生素D水平及肝功能。

參照試劑盒說明書提取外周血單核細胞，采用蛋白質印跡法(Western blot)檢測NF-κB p65的表達，選用β-actin作為內參蛋白，蛋白顯影后應用Image J、GraphPad Prism 5.0軟件進行圖像分析，以目的蛋白/內參蛋白灰度值來評估NF-κB p65表達水平。血清TNF-α、IL-6的測定：試劑盒購自上海恒遠生物科技有限公司。按照試劑盒操作步驟，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定。血清25(OH)D3及總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、谷氨酰轉肽酶(GGT)由我院檢驗科常規測定。

2 結果

2.1 對照組與IHS患兒維生素D、NF-κB p65、IL-6、TNF-α水平比較 IHS組患兒血清25(OH)D3水平低于對照組(P<0.01)。IHS組患兒血清IL-6、TNF-α及單核細胞NF-κB p65表達高于對照組(P<0.01)，見表1。

參照美國內分泌協會關于維生素D缺乏的臨床實踐指南，將血清25(OH)D3≤50 nmol/L定義為維生素D缺乏[5]，對照組中僅1例出現維生素D缺乏，而IHS組有45例患兒維生素D缺乏，差異有統計學意義(χ2=65.28，P<0.01)。

表1 對照組與IHS組患兒25(OH)D3、NF-κB、TNF-α、IL-6水平比較

2.2 IHS患兒治療前后維生素D、NF-κB、IL-6、TNF-α水平的變化 IHS合并維生素D缺乏的45例患兒隨機分為常規治療組及維生素D組，其中常規治療組22例，維生素D組23例。治療后，常規治療組及維生素D組NF-κB、IL-6、TNF-α降低(P<0.05)。常規治療組治療前后25(OH)D3水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；而連續10 d口服維生素D3后患兒血清25(OH)D3水平顯著升高(P<0.05)。治療前，兩組患兒NF-κB、IL-6、TNF-α水平比較差異無統計學意義；與常規治療組比較，維生素D組患兒治療10 d后NF-κB、IL-6、TNF-α水平顯著下降(P<0.05)，見表2。

表2 IHS患兒治療前后25(OH)D3、NF-κB、IL-6、TNF-α水平的變化

注：與治療前比較，*P<0.05，**P<0.01

2.3 IHS患兒治療前后TBIL、DBIL、ALT、GGT水平變化 治療10 d后，常規治療組及維生素D組患兒肝功能指標明顯改善，差異有統計學意義(P<0.01)。治療前，兩組患兒各項肝功能指標比較差異無統計學意義(P>0.05)；與常規治療組比較，治療10 d后，維生素D組患兒血清TBIL、DBIL、ALT、GGT顯著下降，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 IHS患兒治療前后TBIL、DBIL、ALT、GGT水平變化

注：與治療前比較，**P<0.01

2.4 IHS患兒維生素D水平與NF-κB、IL-6、TNF-α的相關性 IHS患兒血清維生素D水平與血清IL-6、TNF-α、NF-κB呈負相關(r=-0.557、-0.599、-0.371,P<0.01)，見圖1。

圖1 維生素D與血清IL-6、TNF-α、NF-κB的相關性

2.5 不良反應 維生素D組患兒口服維生素D32 000 IU/d 治療10 d，未發現煩躁不安、惡心、厭食、發熱、血壓升高、心律不齊、煩渴等不良反應。

3 討論

嬰兒肝炎綜合征病因較復雜，發病機制尚不明確。既往研究提示，炎癥反應是其病理進程中重要的因素之一[6]。有研究發現，嬰兒肝炎綜合征患兒血清及膽汁中IL-6及TNF-α水平明顯升高，并促進了膽汁淤積和肝功能損傷的病理過程[7]，而抑制炎癥反應能有效減輕IHS患兒的肝功能損傷[6]。NF-κB最早發現于B淋巴細胞，在細胞凋亡、炎性炎癥等多種病理進程中發揮重要作用。靜息狀態下NF-κB以非活化形式存在于細胞質，當細胞受到病毒感染、氧化應激等各種病理因素刺激后，NF-κB被激活，誘導TNF-α、IL-6、IL-8等多種炎性因子的表達[8]。本研究發現，IHS患兒外周血單核細胞NF-κB表達水平及血清IL-6、TNF-α水平均較對照組顯著升高，提示IHS患兒存在炎癥反應增強，這與既往研究相符合。

維生素D是一組具有生物活性的脂溶性類固醇衍生物，其中人體中最重要的是維生素D3。維生素D3主要由皮膚中的7-脫氫膽固醇經光化學作用轉變而來，25-羥維生素D3[25-(OH)D3]是維生素D在血液循環中的主要形式，性質較為穩定，是評估維生素D水平的可靠指標[9-10]。近年研究表明，維生素D具有抗炎、抗腫瘤、免疫調節等多種生物學作用[11-17]。維生素D經肝臟和腎臟羥化后轉化為生物活性很強的1,25-(OH)2-D3，后者與維生素D受體結合發揮生物學效應。研究發現，炎癥性腸病患兒維生素D水平顯著降低[18]，而補充維生素D能抑制IL-1、IL-6等促炎因子的表達，改善炎癥性腸病的臨床癥狀[19-20]。然而補充維生素D能否減輕IHS患兒的炎癥反應而改善肝功能尚未見報道。本研究發現，IHS患兒存在明顯的維生素D缺乏，這與既往研究相符合[21]，考慮可能與肝臟合成25-(OH)D3減少、肝臟25-羥化酶的活性降低及維生素D的吸收減少等因素有關。此外，本研究亦發現對于合并維生素D缺乏的IHS予以常規預防劑量的維生素D并不能改善維生素D缺乏的狀況，而予以治療劑量的維生素D能顯著提高IHS患兒血清維生素D水平。相關性分析發現，IHS患兒血清維生素D水平與IL-6、TNF-α、NF-κB水平呈負相關，提示維生素D缺乏可能是IHS患兒炎癥反應增強的危險因素。患兒口服治療劑量的維生素D310 d后，血清維生素D水平較前升高，炎癥因子水平低于常規治療組，肝功能指標明顯改善，表明維生素D與IHS患兒炎癥反應等病理進程相關。

綜上，IHS患兒維生素D缺乏明顯，后者與患兒炎癥因子升高及肝功能損害具有一定的相關性。口服治療劑量的維生素D能有效提高患兒血清維生素D水平，抑制炎癥反應，減輕肝功能損傷，有益于患兒預后，但具體機制仍有待研究證實。